На сколько вредна электронная сигарета с жидкостью: Электронные сигареты. Насколько опасен «дым без огня»?

Испарители, электронные сигареты и другие электронные системы доставки никотина (ENDS)

Вейпы, вапорайзеры, вейп-ручки, ручки для кальяна, электронные сигареты (электронные сигареты или электронные сигареты) и электронные трубки — вот некоторые из многих терминов, используемых для описания электронных систем доставки никотина (ENDS). ENDS — это негорючих табачных изделий.

В этих продуктах используется «жидкость для электронных сигарет», которая может содержать никотин, а также различные композиции ароматизаторов, пропиленгликоля, растительного глицерина и других ингредиентов. Жидкость нагревается, чтобы создать аэрозоль, который пользователь вдыхает.

ENDS может быть изготовлен так, чтобы выглядеть как обычные сигареты, сигары или трубки. Некоторые напоминают ручки или флешки. Более крупные устройства, такие как резервуарные системы или модификации, мало или совсем не похожи на сигареты.

Респираторные заболевания, связанные с использованием электронных сигарет

Оба флага U.Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов и Центры США по контролю и профилактике заболеваний неустанно работают над расследованием тревожных случаев тяжелых респираторных заболеваний, связанных с использованием электронных сигарет.

Узнайте о действиях и рекомендациях FDA для общественности.

Кампания по предотвращению электронных сигарет «Реальная стоимость»
Отмеченная наградами кампания FDA по профилактике употребления табака среди молодежи «Реальная стоимость» расширяется, чтобы информировать молодежь об опасностях электронных сигарет.

Статистика об использовании электронных сигарет среди молодежи США

• Среди учащихся средних и старших классов 3,6 миллиона в настоящее время употребляли электронные сигареты в 2020 году. ¹
• Более 8 из 10 нынешних молодых пользователей электронных сигарет используют ароматизированные электронные сигареты, среди которых наиболее часто используются фруктовые, мятные, конфетные и ментоловые ароматизаторы. ¹
• Согласно опросу 2013–2014 годов, 81 процент нынешних молодых пользователей электронных сигарет назвали наличие привлекательных ароматов основной причиной их употребления. ²

Регулирование электронных систем доставки никотина FDA

В 2016 году FDA доработало правило, расширяющее регулирующие полномочия CTP на все табачные изделия, включая электронные системы доставки никотина (ЭСДН), которые соответствуют определению табачного изделия. FDA регулирует производство, импорт, упаковку, маркировку, рекламу, продвижение, продажу и распространение ENDS, включая компоненты и части ENDS, но исключая аксессуары.Примеры компонентов и частей ENDS включают:

• Электронные жидкости
• Стеклянный или пластиковый флакон с жидкостью для электронных сигарет
• Картриджи
• Форсунки
• Некоторые батареи
• Картомайзеры и клиромайзеры
• Цифровой дисплей или подсветка для регулировки настроек
• Резервуарные системы
• Наконечники для капель
• Ароматизаторы для ENDS
• Программируемое программное обеспечение

Продукты, продаваемые в терапевтических целях (например, продаваемые как продукты, помогающие людям бросить курить), регулируются Центром оценки и исследований лекарственных средств (CDER) FDA.FDA опубликовало правило, разъясняющее, когда продукты, изготовленные или полученные из табака, регулируются как табачные изделия, лекарства и / или устройства.

В январе 2020 года FDA издало правоприменительную политику в отношении неразрешенных ароматизированных электронных сигарет на основе картриджей, в том числе фруктовых и мятных ароматизаторов, которые нравятся детям. Для получения дополнительной информации см. Окончательное руководство: Приоритеты обеспечения соблюдения для электронной системы доставки никотина (ENDS) и других предполагаемых продуктов на рынке без предварительного разрешения.

Производство электронных систем доставки никотина и электронных жидкостей

Если вы производите, модифицируете, смешиваете, производите, изготавливаете, собираете, обрабатываете, маркируете, переупаковываете, меняете этикетку или импортируете ENDS, вы должны соблюдать требования производителей.

CTP может ответить на конкретные вопросы о требованиях малого бизнеса и о том, как соблюдать закон. Этот офис также предоставляет онлайн-образовательные ресурсы, чтобы помочь регулируемой отрасли понять правила и политику FDA.

Обязательное предупреждение о никотиновой зависимости на упаковке и рекламе

Начиная с 2018 г., все табачные изделия с покрытием * должны иметь обязательное предупреждение о никотиновой зависимости на упаковках и в рекламных объявлениях. * Примечание : Сигары, которые также являются «покрытыми» табачными изделиями, имеют дополнительные обязательные предупреждающие надписи.

Розничная продажа электронных систем доставки никотина и жидкостей

Центр табачных изделий

Встраивайте контент CTP на свой сайт бесплатно.Благодаря Exchange Lab, когда контент обновляется на нашем сайте, он автоматически обновляется и на вашем сайте.

Вставить этот контент

Примечание: 20 декабря 2019 года президент подписал закон о внесении поправок в Федеральный закон о пищевых продуктах, лекарствах и косметических средствах и о повышении федерального минимального возраста продажи табачных изделий с 18 до 21 года. В настоящее время розничным торговцам запрещено продавать любые табачные изделия, включая сигареты, сигары и электронные сигареты, лицам младше 21 года.FDA предоставит дополнительные сведения по этому вопросу по мере их появления, и информация на этой странице будет своевременно обновляться соответствующим образом.

Если вы продаете ЭСДН, жидкости для электронных сигарет или их компоненты или части, изготовленные из табака или полученные из него, прочтите это краткое изложение федеральных правил, которым должны следовать розничные торговцы.

Табачные изделия, импортируемые или предлагаемые для импорта в США, должны соответствовать всем применимым требованиям Федерального закона о пищевых продуктах, лекарствах и косметических средствах (Закон FD&C).

Вы также можете узнать больше о процессе импорта в Руководстве FDA по нормативным процедурам, глава 9, Операции и действия по импорту.

Если у вас возникли нежелательные проблемы со здоровьем или качеством определенного табачного изделия, вы можете сообщить о проблеме с любым табачным изделием, включая вейпы, в FDA. Знание о неблагоприятном опыте может помочь FDA выявить проблемы со здоровьем или качеством, помимо тех, которые обычно связаны с употреблением табачных изделий.

Если вы считаете, что эти товары продаются несовершеннолетним, или вы видите другое потенциальное нарушение Закона FD&C или правил FDA о табаке, сообщите о потенциальном нарушении.

В жидкостях для вейпинга и аэрозолях для электронных сигарет обнаружено около 2000 неизвестных химических веществ.

Первое в своем роде исследование, проведенное учеными из Университета Джона Хопкинса, обнаружило следы сотен неизвестных химических веществ в жидкости для вейпинга и аэрозолях для электронных сигарет. В исследовании подробно рассказывается об огромном количестве неопознанных химических веществ, а также о нескольких известных и потенциально вредных соединениях.

«Существующее исследование по сравнению электронных сигарет с обычными сигаретами показало, что в электронных сигаретах намного меньше загрязняющих веществ», — объясняет старший автор исследования Карстен Прассе.«Проблема в том, что аэрозоли для электронных сигарет содержат другие совершенно не охарактеризованные химические вещества, которые могут иметь риски для здоровья, о которых мы еще не знаем. Все больше и больше молодых людей используют эти электронные сигареты, и им необходимо знать, с чем они сталкиваются ».

Это первое исследование, в котором проводится тщательный нецелевой анализ всех потенциальных соединений, присутствующих в жидкостях и аэрозолях для вейпинга. с использованием жидкостной хроматографии / масс-спектрометрии высокого разрешения.Проверили четыре популярных жидкости для вейпов с табачным вкусом, а также тестировали аэрозоли, генерируемые четырьмя распространенными электронными сигаретными устройствами (один резервуар, один одноразовый и две капсулы).

В ходе исследования было идентифицировано почти 2000 различных химических соединений, и большинство из них не были идентифицированы. Из химикатов, которые исследователи смогли идентифицировать, были обнаружены шесть потенциально вредных соединений. К ним относятся пара ароматизаторов, вызывающих раздражение дыхательных путей, три промышленных химиката, пестицид и, возможно, самое необычное — кофеин.

Мина Тегерани, ведущий автор исследования, говорит, что две из четырех жидкостей для вейпинга содержали кофеин. Известно, что ароматизаторы, такие как кофе или шоколад, содержат следы кофеина, но тестировались только жидкости для табачных вейпов, поэтому Тегерани был удивлен этим открытием.

«Это может дать курильщикам дополнительный удар, который не разглашается», — говорит Тегерани. «Интересно, добавляют ли они это намеренно».

Еще одним неожиданным открытием в исследовании стало обнаружение конденсированных углеводородоподобных соединений в аэрозолях паровых газов. Эти соединения обычно образуются при сгорании, но все же производятся в процессе парообразования.

Аналогичное недавнее австралийское исследование с использованием газовой хроматографии / масс-спектрометрии для анализа химического состава 65 жидкостей для паровых газов показало, что каждый изученный образец содержал по крайней мере один вид потенциально вредного химического вещества.К ним относятся бензальдегид, раздражитель дыхательных путей, и транс-коричный альдегид, иммунодепрессант. Австралийское исследование также обнаружило следы никотина в шести испытанных жидкостях для вейпинга, несмотря на то, что они явно рекламировались как безникотиновые.

Эти исследования, безусловно, не первые, в которых были обнаружены потенциально вредные химические вещества в жидкостях для электронных сигарет. Но важно отметить, что эти исследования предназначены для поиска любых следов химических веществ. Они не исследуют, наносят ли химические вещества прямой вред в контексте вейпинга или присутствуют ли они в достаточно больших количествах, чтобы гипотетически причинить вред.

Вместо этого, по словам Прассе, исследование подтверждает, насколько мало мы знаем о химических веществах, используемых в электронных сигаретах. В то время как его исследование не сравнивает вред, причиняемый курением сигарет и вейпингом, Прасс подчеркивает, что электронные сигареты не следует рассматривать как «здоровую» альтернативу традиционному курению.

«Людям просто нужно знать, что они вдыхают очень сложную смесь химических веществ, когда они вейпируют. И для многих из этих соединений мы понятия не имеем, что они на самом деле», — говорит Прассе.«У меня проблема с тем, как вейпинг позиционируется как более полезный для здоровья, чем курение сигарет. На мой взгляд, мы просто еще не в той точке, когда мы действительно можем сказать это».

Новое исследование было опубликовано в журнале Chemical Research in Toxicology .

Источник: Университет Джона Хопкинса

Frontiers | Аэрозоль и жидкость, генерируемые электронной сигаретой без запаха, по сравнению с ароматизированными аэрозолями и электронной жидкостью при росте распространенных оральных комменсальных стрептококков

Введение

Электронные сигареты (ECIG) — это устройства, которые распыляют жидкость (E-жидкость), которая затем вдыхается, как если бы вы вдыхали дым от традиционной сигареты.В жидком состоянии E-Liquid состоит в основном из пропиленгликоля и / или растительного глицерина в качестве основных увлажнителей, никотина и любого количества ароматизаторов. E-жидкость содержит растворенный никотин в концентрациях от 0 до 24 мг / мл (или выше). Следовательно, устройства ECIG стали популярным суррогатом курения как средства удовлетворения никотиновой зависимости, что, по мнению многих, является более безопасной, более здоровой и модной альтернативой сигаретам. Хотя признано, что вейпинг не является полностью безопасным, некоторые ученые и медицинские работники (Farsalinos and Polosa, 2014; Farsalinos and Gillman, 2018; Stephens, 2018; St Helen et al., 2020) сообщают, что вдыхание аэрозольных электронных жидкостей может вызвать меньше осложнений, связанных со здоровьем, чем вдыхание традиционного сигаретного дыма, на основании того факта, что электронные жидкости содержат меньше и меньше вредных веществ (особенно тех, которые считаются канцерогенными), чем сожженный табак. Например, в табачном дыме гораздо больше канцерогенных соединений, включая специфические N-нитрозамины, полициклические ароматические соединения, летучие органические соединения и канцерогенные тяжелые металлы (Talhout et al., 2011), чем в аэрозоле E-жидкости (Palazzolo, 2013; Farsalinos, Polosa, 2014; Farsalinos, Gillman, 2018; Stephens, 2018; St Helen et al., 2020). Вызывает тревогу то, что в последнее время появилось много сообщений о травмах легких, вызванных жидким аэрозолем E (Chand et al., 2019). Однако эти травмы часто связаны с такими веществами, как масла тетрагидроканнабинола (THC) и каннабидиола (CBD), многие из которых незаконно приобретаются на черном рынке (Kalininskiy et al., 2019; Conuel et al., 2020; Duffy et al., 2020). Кроме того, ароматизирующие соединения, такие как коричный альдегид, вызывают воспаление и цитотоксичность в тканях дыхательных путей (Bahl et al., 2012; Muthumalage et al., 2018). Учитывая, что ECIG существуют только относительно короткий период времени, другие соглашаются с тем, что недостаточно известно о долгосрочных последствиях для здоровья, которые аэрозоли, генерируемые ECIG, могут проявляться у пользователей (Löhler and Wollenberg, 2019), включая возможность латентная канцерогенность, вызванная ECIG. Текущие данные показывают, что электронные сигареты вейпинга стали более распространенными, особенно среди подростков.Например, исследования, проведенные Центрами по контролю за заболеваниями (CDC), показали, что использование ECIG среди старшеклассников выросло с 1,5% в 2011 году до 27,5% в 2019 году (Jamal et al., 2017, 2011–2016; Center for Disease Control and Prevention, 2019a). Однако совсем недавно CDC (2020) обнаружил, что использование ECIG среди старшеклассников снизилось до 19,6%. Это снижение, скорее всего, связано с запретами штатов (поскольку количество смертей, связанных с вейпингом, растет, эти государства ввели запреты на электронные сигареты, 2019 г.) на устройствах ECIG, особенно на тех, которые содержат ароматизированные жидкости для электронных сигарет, как следствие общественного беспокойства по поводу многих В 2019 г. сообщалось о травмах, связанных с вейпингом (Chand et al., 2019; Калининский и др., 2019; Конуэль и др., 2020; Даффи и др., 2020).

Еще больше беспокоит то, что все уровни употребления никотина (как от ECIG, так и от табачных изделий) выросли до 31,2% среди учащихся старших классов и 12,5% среди учащихся средних школ в период с 2011 по 2019 год (Центр по контролю и профилактике заболеваний, 2019a) . Эти статистические данные демонстрируют заметный рост по сравнению с данными 2016 года, согласно которым потребление никотина среди учащихся средних и старших классов составило 7% и 20% соответственно (Jamal et al., 2017). Внедрение новых и более привлекательных жидкостей для электронных сигарет со вкусом, а также таких инноваций, как легко скрываемые палочки Juul, являются факторами, способствующими увеличению уровня потребления никотина среди подростков в Соединенных Штатах (Krüsemann et al., 2019; Vogel et al. , 2018). Поскольку компоненты электронной жидкости, включая ароматизаторы, легко доступны для покупки в Интернете, это позволяет пользователям создавать свои собственные смеси жидкостей для электронных сигарет в любых пропорциях, которые они выбирают, до вейпинга. Такая свобода и подход к вейпингу «сделай сам» допускает чрезмерное содержание ароматизаторов и других незаконных компонентов в вдыхаемых аэрозолях, что увеличивает вероятность развития связанных с вейпингом травм и госпитализаций (Центр по контролю и профилактике заболеваний, 2019b; Fonseca Fuentes et al. ., 2019). В отличие от снижения потребления никотина из сигарет среди подростков, наблюдавшегося в начале 2000-х годов, потребление никотина возвращается к уровням, невиданным со времен пика популярности курения в середине 1970-х годов; и многие связывают это со стремительным ростом популярности ECIG (Pampel and Aguilar, 2008; Center for Disease Control and Prevention, 2019a).

Курение сигарет, как известно, оказывает серьезное вредное воздействие на микробиоту полости рта и саму полость рта, в частности, нарушая хрупкий баланс между микробами и хозяином.Нормальная микробиота полости рта состоит из множества комменсальных и патогенных видов бактерий, которые образуют сложно организованные полимикробные сообщества на поверхностях полости рта (Kolenbrander, 2000; Diaz et al., 2006; Kolenbrander et al., 2006). Эти микробы существуют в гомеостатическом состоянии друг с другом и с хозяином в виде многовидовых биопленок во рту. Однако их рост можно индивидуально моделировать планктонно в жидких культурах (Aas et al., 2005; Marsh et al., 2015; Samaranayake, Matsubara, 2017; Kilian, 2018).Распространенные комменсальные виды включают Streptococcus gordonii , Streptococcus intermediateus , Streptococcus mitis и Streptococcus oralis (Garnier et al., 1997; Jenkinson and Lamont, 1997; Rosan and Lamont, 2000, 2005; Aas et al. Коленбрандер и др., 2006; Коломбо и др., 2007). Эти комменсальные виды живут в симбиотических отношениях со своими человеческими хозяевами, конкурентно противодействуя росту патогенных микробов (Kreth et al., 2008; Avila et al., 2009; Гросс и др., 2012; Herrero et al., 2016). Эти четыре вида одними из первых колонизируют поверхность полости рта и служат в качестве основы для других микробов полости рта, что приводит к росту многовидовых биопленок (Socransky et al., 1998; Gross et al., 2012; Teles et al. , 2012). Эти виды также играют полезную роль для человека-хозяина в профилактике кариеса и заболеваний пародонта (Hasegawa et al., 2007; Gross et al., 2012; Herrero et al., 2016; Huang et al., 2018; Liu et al., 2018; Thurnheer, Belibasakis, 2018).Например, было показано, что S. gordonii и S. intermediateus уменьшают инвазию пародонтального патогена, Porphyromonas gingivalis , в эпителиальные клетки полости рта и могут защищать от гингивита (Hanel et al., 2020). Здоровье полости рта и общее системное здоровье неразрывно связаны. Например, несколько исследований связывают P. gingivalis с заболеваниями вне полости рта, такими как диабет, сердечно-сосудистые заболевания и даже болезнь Альцгеймера (Mealey, 1999; Seymour et al., 2007; Амано и Инаба, 2012; Borgnakke et al., 2013; Dominy et al., 2019). Точно так же несколько видов оральных стрептококков, включая S. gordonii , S. mitis, S. sanguinis и S. oralis , считаются комменсалами в полости рта, но также причастны к инфекционному эндокардиту (Abranches et al., 2018). Следовательно, любая неблагоприятная активность в полости рта из-за воздействия аэрозолей, генерируемых ECIG, может привести как к оральным, так и к системным заболеваниям (Holmlund et al., 2017).

Курение табака является основной причиной заболеваний пародонта, удваивая шансы на его развитие (Palmer et al., 2005; Kanmaz et al., 2019). Было продемонстрировано, что сигаретный дым нарушает формирование здоровых биопленок полости рта путем стимулирования и привлечения патогенных бактерий, таких как Fusobacterium, Fretibacterium, Corynebacterium, Cardiobacterium, Filifactor, Synergistes и Selenomonas , а также респираторные патогены Phogens во время раннего образования зубного налета (Kumar et al., 2011; Moon et al., 2015; Родригес-Рабасса и др., 2018). Механически, метатранскриптомный и протеомный анализ показывает, что оральные комменсальные бактерии подавляют метаболические гены, в то время как патогены процветают в тех же условиях за счет активации генов вирулентности, таких как липополисахариды, жгутики и капсулы; таким образом получая пространство и ресурсы по сравнению с комменсальными стрептококками (Shah et al., 2017). Сообщалось, что такие нарушения способствуют усилению гингивита (Löe and Silness, 1963; Kumar et al., 2011).Сигаретный дым изменяет микробиоту полости рта, влияя на содержание цитокинов в слюне. Например, у курильщиков наблюдалась повышенная экспрессия IL-2, IL-4 и адренокортикотропного гормона и пониженная экспрессия MDC (n- [2- (1-малеимидил) этил] -7-диэтиламинокумарин-3-карбоксамид), IL. -5, IL-7, IL-10, инсулин и лептин по сравнению с некурящими (Rodríguez-Rabassa et al., 2018). Кроме того, активация IL-2 и IL-4 предполагает активацию иммунного ответа (Rodríguez-Rabassa et al., 2018). Как недавно описал Кумар и его коллеги, жидкости для электронных сигарет и их аэрозоли также обладают отрицательными эффектами (Kumar et al., 2019). Например, антимикробные препараты лизоцим и иммуноглобулин А значительно снижены в слюне пользователей ECIG (Cichoñska et al., 2019), а также выражено прилипание и рост биопленки кариогенного патогена Streptococcus mutans (Kim et al., 2018). Некоторые данные даже предполагают, что аэрозоль, генерируемый ECIG, может быть столь же опасным (или потенциально более опасным), чем обычное курение (Jensen et al., 2015; Холлидей и др., 2016; Ю. и др., 2016).

Было проведено множество исследований для оценки безопасности электронных жидкостей и / или их аэрозолей для ткани легких и эпителиальных клеток бронхов; однако исследования, касающиеся микробиоты полости рта, ограничены. Электронные жидкости продемонстрировали провоспалительное действие на моноциты человека и токсическое действие на стволовые клетки человека, а также на окончательно дифференцированные клетки человека (Bahl et al., 2012; Muthumalage et al., 2018; Pushalkar et al., 2020) . Среди исследований легочной ткани исследования подтверждают, что ароматизаторы, содержащиеся в корице, клубнике, чернике, ментоле и табаке, а не основные увлажнители (т.е., пропиленгликоль и / или растительный глицерин) несут ответственность за продукцию цитокинов и побочные эффекты, такие как гибель клеток (Leigh et al., 2016, 2018; Sundar et al., 2016). В настоящее время исследования ECIG в основном сосредоточены на тканях дыхательных путей. Имеется мало информации о воздействии аэрозоля, генерируемого ECIG, на полость рта, и еще меньше известно о воздействии на микробиоту полости рта. В одном исследовании (Cichoñska et al., 2019) у пользователей ECIG наблюдалось снижение уровней перорального лизоцима и лактоферрина, что свидетельствует о том, что аэрозоль ECIG, как и традиционный дым, снижает антимикробный потенциал слюны.Другое исследование (Stewart et al., 2018) продемонстрировало, что жидкость для электронных сигарет в форме аэрозоля может изменить популяции микробов в полости рта. Недавнее исследование демонстрирует значительный сдвиг в бета-разнообразии микробиоты полости рта у пользователей ECIG (Pushalkar et al., 2020). В предыдущих исследованиях нашей группы изучались эффекты безвкусного аэрозоля ECIG с никотином и без него и сообщалось, что аэрозоли ECIG оказывают менее пагубное влияние на выживание и рост пероральных комменсальных стрептококков, чем обычный сигаретный дым (Cuadra et al., 2019; Nelson et al., 2019), хотя влияние ароматизаторов не исследовалось.

В текущем исследовании мы оцениваем влияние различных коммерчески доступных жидких ароматизаторов E на рост четырех вышеупомянутых ранних колонизаторов комменсальных бактерий. Целью этого исследования является проверка влияния обычных жидких ароматизаторов для электронных сигарет в диапазоне концентраций, который обычно используется в паровой среде, на планктонный рост оральных комменсальных стрептококков. Мы предполагаем, что ароматизаторы жидкости для электронных сигарет могут изменять характер роста обычных комменсальных оральных стрептококков.Основываясь на результатах этого исследовательского исследования, будут использоваться более чувствительные и продвинутые методы, такие как использование открытых систем или анализ трехмерных каркасов биопленок полости рта, чтобы точно определить специфические эффекты, которые ароматизаторы оказывают на полимикробные сообщества в полости рта. полость. Определение потенциально вредного воздействия ароматизаторов на рост оральных комменсальных бактерий имеет решающее значение для понимания общего воздействия использования ECIG на здоровье полости рта. Здоровье полости рта неразрывно связано со здоровьем системы, а поддержание здоровья полости рта зависит от хорошо сбалансированного роста микробиоты полости рта.

Материалы и методы

Реагенты и расходные материалы

Все реагенты и расходные материалы были приобретены у Thermo Fisher Scientific (Уолтем, Массачусетс, США), если не указано иное.

Бактериальные штаммы

Streptococcus gordonii DL1, Streptococcus mitis UF2, Streptococcus intermediateus 0809 и Streptococcus oralis SK139 были щедро пожертвованы доктором Робертом Бёрном из Университета Флориды, Колледж стоматологии, США, США.Все штаммы выращивали в среде для инфузии мозга и сердца (BHI) с добавлением 5 мкг / мл бычьего гемина или на агаре BHI при 37 ° C и 5% CO ₂ (Rogers and Scannapieco, 2001; Tomoyasu et al., 2010 ; Huang et al., 2018; Harth-Chu et al., 2019; Hanel et al., 2020). Базы бактерий хранили при -80 ° C, и чистоту проверяли окрашиванием по Граму и световой микроскопией.

Стандартная жидкость для электронных сигарет

На рисунке 1 исходные растворы E-жидкости были приготовлены с использованием пропиленгликоля и растительного глицерина (также известного как глицерин) в соотношении 1: 1 по объему.Концентрированные ароматизаторы E-Liquid табака, ментола, корицы, клубники и черники, восстановленные в пропиленгликоле, были получены от оптовых торговцев жидким никотином (Феникс, Аризона, США) и описаны в таблице 1. Для этого исследования ароматизаторы табака и ментола были выбраны потому, что они имитируют использование обычных сигарет. По словам местных продавцов вейп-шопов и студентов колледжей, корица, клубника, черника и другие фруктовые ароматы популярны среди молодых взрослых пользователей ECIG и являются причиной, по которой они также были выбраны для этого исследования.Кроме того, CDC (Wang et al., 2020) подтверждает эти фруктовые предпочтения среди молодежи. Как показано на рисунке 1, все ароматизированные и неароматизированные жидкости для электронных сигарет содержали 20 мг / мл (S) — (-) — никотина (Alpha Aesar, Тьюксбери, Массачусетс, США). Как показано в таблице 2, исходные ароматизированные жидкости для электронных сигарет были приготовлены в виде 5% (низкая концентрация) и 25% (высокая концентрация) растворов.

Рис. 1. Простая схема экспериментальной процедуры, изображающая добавление приготовленной в лаборатории исходной жидкости для ЭВ (пропиленгликоль и растительный глицерин), содержащей 5% ароматизаторов (табак, ментол, корица, клубника или черника в низких концентрациях) и 20 мг / мл никотина в питательную среду BHI.* Указывает на вторую базовую жидкость для электронных сигарет, приготовленную с 25% ароматизаторов (высокая концентрация). Базовые жидкости для электронных сигарет вводятся непосредственно в BHI (соотношение 1, 1,25, 2,5 или 5% E-жидкости к BHI) или закачиваются в BHI в виде аэрозоля, генерируемого ECIG. Сто 5-секундных затяжек E-жидкости представляют собой около 1% E-жидкости в BHI. Часть этого рисунка адаптирована из Nelson et al. (2019).

Таблица 1. Описание коммерчески приобретаемого концентрированного жидкого ароматизатора для электронных сигарет.

Таблица 2. Процент стандартных электронных жидкостей ± ароматизаторы в BHI.

Анализы Кирби Бауэра

В качестве исследовательского пути были использованы анализы Кирби Бауэра (Bauer et al., 1959, 1966), чтобы выяснить, влияют ли концентрированные ароматизирующие вещества на характер роста бактерий. Бактерии выращивали в течение ночи в среде BHI до оптической плотности (OD) 1,0 при длине волны 595 нм. Используя стерильные ватные палочки, чашки с агаром BHI инокулировали с использованием чистых культур, создавая сливающийся газон.Шестимиллиметровые бумажные диски (BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США) помещали на сливающиеся газоны ( n = 3 диска на группу обработки). Десять микролитров либо концентрированных ароматизаторов (100%), либо исходной E-жидкости с 5% концентрированными ароматизаторами наносили пипеткой на каждый диск и позволяли диффундировать в культуры. Десять микролитров перекиси водорода или исходной E-жидкости без запаха использовали в качестве контролей. Чашки с агаром инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ в течение ночи для роста бактерий.На следующий день визуально осматривали зоны ингибирования (ZOI) и измеряли их диаметр в миллиметрах.

Кривые роста

Было проведено два эксперимента с кривой роста. В первом эксперименте эффект 100 затяжек аэрозоля, генерированного ECIG, сравнивали с эффектом 1% исходной E-жидкости ± низкая концентрация (0,05% конечный процент в BHI) ароматизаторов, в то время как во втором эксперименте проверяли реакцию на дозу с использованием исходной жидкости. безвкусная жидкость для электронных сигарет или жидкости для электронных сигарет с низкой или высокой концентрацией ароматизаторов Таблица 2.Как показано на рисунке 1, в свежую стерильную среду BHI (10 мл в пластиковых конических пробирках объемом 50 мл) добавляли 1, 1,25, 2,5 или 5% E-Liquid ± ароматизаторы с низкой или высокой концентрацией и хранили в течение ночи в холодильнике (4 ° C), следуя методологии Nelson et al. (2019), в котором не сообщается об отсутствии существенных различий в общей кинетике роста трех из четырех протестированных видов. Более того, чтобы сделать наши эксперименты более физиологически релевантными, выбранные процентные доли исходной жидкости для электронных сигарет и ароматизаторов были основаны на расчетах, определенных на основе гипотетической модели открытой системы, как показано в таблице 3.Согласно предыдущему исследованию (Palazzolo et al., 2017), 9,3 мкл E-жидкости испаряется за одну затяжку, и происходит четыре затяжки в минуту (см. Раздел «Улавливание аэрозолей» ниже). Son et al. (2020) определили, что фракция осаждения аэрозоля ECIG в трахеобронхиальной и бронхоальвеолярной областях составляла 0,504–0,541 и 0,073–0,306 соответственно, в результате чего в полости рта оставалось менее 0,400 (Son et al., 2020). Из «Слюны и здоровья полости рта, четвертое издание» (Смит, 2012) скорость потока слюны колеблется от 0.От 310 до 0,390 мл / мин. Следовательно, процентное содержание электронной жидкости в слюне в этой гипотетической модели открытой системы (с непрерывным потоком слюны) колеблется от 3,5 до 4,3%, что попадает в диапазон процентов от стандартной жидкости для электронных сигарет, использованной в этом исследовании. Следовательно, 100 мкл (т.е. 1%) ароматизаторов E-жидкость с низкой концентрацией добавляли непосредственно в BHI и хранили в течение ночи в холодильнике. Для сравнения, сто 5-секундных затяжек стандартной жидкости E ± ароматизаторы низкой концентрации барботировали в среду BHI (см. Раздел «Улавливание аэрозолей» ниже) и также хранили в течение ночи при 4 ° C.В качестве контролей использовалась пятипроцентная E-жидкость без запаха в BHI и 5% перекиси водорода в BHI. Кроме того, 100 затяжек воздуха служили контролем для эксперимента с аэрозолем, генерированным ECIG. На следующее утро ночные бактериальные заквасочные культуры доводили до OD 595 нм, равного 1,0, путем разбавления свежей стерильной средой BHI. Конечный посевной материал в размере 100 мкл скорректированных бактериальных культур добавляли к 10 мл охлажденной среды BHI (1% об. / Об.). Во втором эксперименте все экспериментальные условия были идентичны первому эксперименту, за исключением того, что кривые роста доза-ответ были построены с использованием только E-жидкости ± низкие или высокие концентрации ароматизаторов, добавленных непосредственно в BHI (т.е.е., отсутствие аэрозоля, генерируемого ECIG). Триста микролитров каждого засеянного образца, n = 12 для эксперимента с аэрозолем и электронной жидкостью и n = от 4 до 8 для экспериментов «доза-реакция», вместе с соответствующими контролями, были помещены в 96-луночный раунд. донные планшеты или 96-луночные планшеты с плоским дном соответственно. Для кривых роста аэрозоля и E-жидкости показания оптической плотности при OD 595 нм были измерены через 0, 2, 4, 6, 8 и 24 часа с использованием спектрофотометра Thermo Scientific Evolution 300 Ultra Violet-Visible (Waltham, MA) с Программное обеспечение VISIONpro ^TM (Conex, Натик, Массачусетс, США).Для кривых роста доза-ответ значения оптической плотности при OD 595 нм были измерены через 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 24 часа с использованием монохроматического ридера микропланшетов μQuant, оснащенного программным обеспечением KC4 версии 3.4 (MTX Lab Systems , Брадентон, Флорида, США). Для обоих экспериментов образцы кривой роста инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ в течение всего эксперимента, за исключением короткого периода времени, необходимого для получения показаний оптической плотности. Хотя значения оптической плотности, полученные на 96-луночных планшетах с круглым дном, как правило, были выше, чем на 96-луночных планшетах с плоским дном, общая тенденция кривых роста была аналогичной, как показано на дополнительном рисунке 1.

Таблица 3. E-жидкость / слюна в гипотетической открытой системе и E-жидкость / BHI в закрытой системе.

Улавливание аэрозолей

Как описано ранее (Nelson et al., 2019), жидкость для электронных сигарет распыляли с использованием литий-ионной батареи типа Tripl3 (Kennesaw, Джорджия, США) eGo (650 мАч, 3,7 В нерегулируемый). E-жидкость помещалась в стеклянный резервуар Aspire емкостью 1,8 мл (Shenzhen Eigate Technology Co., Ltd., Шэньчжэнь, Китай), снабженный катушкой сопротивления 1,8 Ом для средней выходной мощности ≈ 7.6 Вт. Воздух или аэрозоль-ароматизаторы, генерируемые ECIG, подавали в 10 мл BHI с помощью перистальтических насосов Cole-Palmer Master Flex L / S (Vernon Hills, IL, США). Трубки, модифицированные для серологических пипеток объемом 1 мл, доставляли аэрозольную E-жидкость непосредственно в среду BHI через просверленные отверстия в закрытые, но вентилируемые конические пробирки объемом 50 мл (рис. 1). Скорость потока доводили до 400 мл / минуту (т.е. 33,3 мл за пятисекундную затяжку). Подача воздуха осуществлялась путем включения насоса на пять секунд (насос включен) с последующим 10-секундным периодом отдыха (выключение насоса).Протокол затяжки состоял из 100 циклов затяжки (включение / выключение насоса). Используя эту методологию, 9,3 мкл E-жидкости распыляется в виде аэрозоля на одну затяжку или 930 мкл на 100 затяжек (Palazzolo et al., 2017). Поскольку было определено, что процент восстановления аэрозольной E-жидкости в BHI составляет от 8,4 до 10,1% (Nelson et al., 2019), количество аэрозольной E-жидкости, которая присутствует в BHI, находится в диапазоне от 78 до 94 мкл. . Следовательно, 100 мкл E-жидкости, добавленные непосредственно к 10 мл BHI (или 1%), примерно эквивалентны 100 затяжкам.Все улавливание аэрозолей проводилось в вытяжном шкафу P20 Purair без воздуховода (Airscience, Форт-Мейерс, Флорида, США) с высокоэффективным воздушным фильтром для твердых частиц (HEPA). Хотя мы полностью осознаем, что наш режим затяжки не соответствует рекомендациям, указанным в рекомендованном методе CORESTA № 81, мы решили использовать наш режим затяжки ради сравнения и согласованности с нашими предыдущими двумя публикациями (Cuadra et al., 2019; Nelson и др., 2019).

Статистический анализ

Все экспериментальные и контрольные точки данных в анализах Кирби Бауэра и на кривых роста бактерий были проанализированы на средние значения и стандартную ошибку средних (SEM).Кроме того, в дополнительной таблице 1 представлены все средние значения и стандартные отклонения для всех точек данных в анализах Кирби Бауэра и на кривых роста бактерий. Для кривых роста, сравнивающих эффект 100 затяжек аэрозоля, генерируемого ECIG, с эффектом 1% исходной E-жидкости ± низкая концентрация (0,05% конечный процент в 10 мл BHI) ароматизаторов, точки данных для экспоненциальной фазы кривых роста ( 2–6 часов для S. gordonii и S. mitis и 4–8 часов для S. intermediateus и S.oralis ) были подвергнуты логарифмическому преобразованию с последующим линейным регрессионным анализом. Тесты F использовали для определения различий между наклонами линии регрессии при сравнении E-жидкости или аэрозоля, генерируемого ECIG, с ароматизаторами и без них. Статистические различия между группами лечения в анализах Кирби-Бауэра, анализе кривой роста и анализе наклона линии регрессии устанавливали с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным анализом Тьюки. А р <0.05 считалось значительным. PRISM 5 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США) использовался для выполнения всех статистических расчетов.

Результаты

Анализы Кирби Бауэра

Влияние жидких ароматизаторов E на рост комменсальных стрептококков на чашках с агаром BHI показано на рисунке 2. Как продемонстрировано увеличением ZOI, рост видов комменсальных стрептококков на агаре BHI был значительно подавлен при воздействии 100% концентрированного ментола ( S. oralis был исключением), ароматом корицы и клубники по сравнению с безвкусной контрольной жидкостью E-жидкость.Кроме того, во многих случаях обработка 100% -ной корицей (для S. oralis ) и клубники (для S. gordonii , S. mitis и S. oralis ) давала ZOI, сравнимые с ZOI контроль перекиси водорода. Напротив, как показано на дополнительном рисунке 2, ни один из видов комменсальных стрептококков при воздействии 5% ароматизаторов, разбавленных в исходной жидкой основе E, не показал статистической разницы в ZOI по сравнению с контрольной жидкостью E без запаха.Данные показывают, что концентрированные ароматизаторы токсичны для бактерий полости рта. Поскольку жидкости для электронных сигарет, содержащие 5% ароматизаторов, представляют собой более реалистичные дозы для потребления человеком, методика Кирби Бауэра недостаточно чувствительна для тестирования ингибирующих эффектов жидкостей для электронных сигарет на рост оральных комменсальных бактерий.

Рис. 2. Тесты Кирби-Бауэра, показывающие влияние 100% концентрированных ароматизаторов в электронной жидкости на зону ингибирования. Каждая полоса представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 3 — количество повторов. a = p <0,05 для перекиси водорода (положительный контроль) и b = p <0,05 для отрицательного контроля (E-жидкость без запаха).

Кривые роста: сравнение аэрозоля, генерируемого ECIG, и электронной жидкости на планктонном росте оральных комменсальных бактерий

Чтобы получить более полное представление о влиянии ароматизаторов E-жидкости, мы провели кривые роста планктона, сначала сравнив E-жидкость, пипетированную непосредственно в BHI, и аэрозоль, генерируемый ECIG, барботируемый в среду, как показано на Рисунке 1.На графиках слева на рисунке 3 показана 1% концентрация исходной жидкости E + ароматизаторы в BHI, что соответствует концентрации ароматизатора 0,05% (таблица 3) для всех 24-часовых кривых роста бактерий. Результаты показывают, что во всех испытанных условиях наблюдалась картина роста, аналогичная необработанному контролю. Аналогичным образом, правые графики на Рисунке 3 показывают, что 100 затяжек (приближение 1% исходной E-жидкости) аэрозоль + ароматизаторы, генерируемые ECIG, для всех 24-часовых кривых роста бактерий были аналогичны как для 100 затяжек воздуха, так и для необработанного контроля. .Кроме того, большинство точек для всех кривых обработки попали в 95% доверительный интервал контрольных кривых ( n = 12), и однофакторный дисперсионный анализ показывает отсутствие статистических различий между любыми кривыми. Чтобы дополнительно оценить скорость роста во время экспоненциальной фазы, линейный регрессионный анализ этого интервала для каждой комбинации бактерий / ароматизатор показан на Рисунке 4 (1% E-жидкость ± ароматизаторы) и Рисунке 5 (100 затяжек образовавшегося E-CIG аэрозоля ± ароматизаторы). На рисунке 4 линии линейной регрессии для S.Intermedius , подверженный воздействию ментола и корицы, имеет наклоны, которые статистически отличаются от E-жидкости без запаха. Точно так же линии регрессии для S. mitis , подвергнутые воздействию ментола, корицы, клубники и черники, имеют наклоны, которые статистически отличаются от E-жидкости без запаха. На рисунке 5 линии линейной регрессии для S. gordonii , подвергнутые воздействию ментола, корицы, клубники и черники, имеют наклоны, которые статистически отличаются от E-жидкости без запаха.Линии регрессии для S. intermediateus , подвергнутые воздействию табака, ментола и корицы, и линии регрессии для S. mitis , подвергнутые воздействию ментола, корицы и клубники, имеют наклоны, которые статистически отличаются от E-жидкости без запаха. Наконец, линии регрессии для S. oralis , подвергнутые воздействию табака, корицы, клубники и черники, имеют наклоны, которые статистически отличаются от E-жидкости без запаха. В таблице 4 суммировано влияние 1% ароматизированной жидкости для е-жидкости (рис. 4) и 100 затяжек ароматизированного аэрозоля, генерируемого ECIG (рис. 5), на все четыре протестированных бактерии.Немногим более половины сравнений между ароматизированными и неароматизированными обработками выявили значимость. Из этих значимых сравнений все, кроме одного, указали на торможение роста (т.е. более пологий уклон). Кроме того, ароматизированный аэрозоль, генерируемый ECIG, привел к 15 значительным различиям наклона, тогда как ароматизированная E-жидкость привела только к шести значительным различиям наклона. Из этих результатов видно, что бактерии, подвергшиеся воздействию аэрозоля, растут медленнее во время экспоненциальной фазы, чем бактерии, подвергшиеся воздействию неаэрозольной E-жидкости.Когда наклоны, представленные на рисунках 4, 5, были объединены либо по видам бактерий ( n = 10), либо по ароматизаторам ( n = 8), статистических различий в наклонах между группами не было обнаружено (дополнительный рисунок 3). Несмотря на то, что все виды достигают стационарной фазы при всех обработках, эти результаты указывают на возможность того, что ароматизаторы в целом могут замедлять рост бактерий во время экспоненциальной фазы. Поразительно, что аэрозоль, генерируемый ECIG, по-видимому, препятствует росту четырех протестированных видов.В целом, наши данные показывают, что ароматизированные аэрозоли от ECIG, по-видимому, влияют на рост оральных комменсальных бактерий.

Рис. 3. Эффекты 100 мкл E-жидкости ± ароматизаторы (1% в BHI), добавленных непосредственно в BHI (графики слева), и 100 затяжек генерируемого ECIG аэрозоля ± ароматизаторы (приблизительно 1%), закачанных в BHI (графики справа) на кривых 24-часового роста стрептококков. Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 12 — количество повторов.

Таблица 4. Влияние ароматизаторов на рост бактерий на основе комбинированного линейного регрессионного анализа, полученного из комбинированных данных на Рисунке 4 (прямое воздействие E-жидкости) и Рисунке 5 (воздействие аэрозоля, генерируемого ECIG).

Рисунок 4. Из данных на Рисунке 3 была определена линейная регрессия, отражающая влияние 100 мкл жидкости E + ароматизаторы на рост бактерий во время логарифмической фазы 24-часовых кривых роста (то есть между 2 и 6 часами). для S. gordonii и S.mitis и от 4 до 8 часов для S. intermediateus и S. oralis ). Сто микролитров E-жидкости в 10 мл BHI = 1%. Ароматизатор, присутствующий в электронной жидкости = 0,05%. На каждой панели графика (т.е. комбинации бактерий / ароматизатор) красные значения p ( p <0,05) указывают на то, что наклон линий регрессии значительно различается. Каждый наклон рассчитывается по 36 точкам данных (3 временных точки X 12 повторений для каждой временной точки).

Рисунок 5. Из данных на Рисунке 3 была определена линейная регрессия, отражающая влияние 100 затяжек аэрозоля с ароматизаторами, генерируемого ECIG, на рост бактерий во время логарифмической фазы 24-часовых кривых роста (то есть между 2 и 6 часами для S. gordonii и S. mitis и от 4 до 8 часов для S. intermediateus и S. oralis ). Сто затяжек аэрозоля, генерированного ECIG, в BHI ≈ 1%. Ароматизатор, присутствующий в аэрозоле, генерируемом ECIG, = 0,05%. На каждой панели графиков (т.е., комбинация бактерий / ароматизатор), красные значения p ( p <0,05) указывают на то, что наклон линий регрессии значительно различается. Каждый наклон рассчитывается по 36 точкам данных (3 временных точки X 12 повторений для каждой временной точки).

Кривые роста: дозозависимый эффект исходных жидких ароматизированных жидкостей

На основании результатов тестов Kirby Bauer, в которых 100% ароматизаторов ментола, корицы и клубники подавляли рост бактерий, в то время как 5% ароматизаторов в жидкости для электронных сигарет не оказывали никакого эффекта; Эксперименты «доза-реакция» были проведены для определения процентного содержания ароматизатора в E-жидкости, необходимого для подавления роста планктонных бактерий.На рисунке 6 показано влияние ароматизатора низкой концентрации (0,0625, 0,125 и 0,25%) на рост четырех штаммов оральных комменсальных бактерий. Хотя ни одна из комбинаций бактерий / ароматизаторов не показала статистической значимости по контрольным кривым роста, наблюдалась явная тенденция более высоких доз ароматизаторов к задержке роста. Напротив, фигура 7 демонстрирует, что ароматизатор с высокой концентрацией (0,3125, 0,625 и 1,25%) оказывает статистически значимые дозозависимые эффекты, особенно для ментола, корицы и клубники.При первоначальной интерпретации кажется, что корица имеет обратный эффект дозы, но это не так. Поскольку концентрированная корица имеет более высокое значение абсорбции (т. Е. Темнее), чем другие ароматизаторы (см. Таблицу 1), добавление 25% концентрированного ароматизатора корицы к E-жидкости по своей сути увеличивает начальные показания абсорбции среды для выращивания, что дает появление эффекта обратной дозы. На самом деле высокие концентрации (0,3125, 0,625 и 1,25%) корицы полностью препятствуют росту бактерий.Полный список сравнительных статистических данных для рисунка 7 приведен в дополнительной таблице 2. На основе ранней стационарной фазы для каждого стрептококка (8 часов для S. gordonii и S. mitis или 10 часов для S. intermediateus и . S. oralis ), сравнения всех значений абсорбции показаны на Фигуре 8 как процент от соответствующих контрольных значений (т.е. без жидкости E). Значительное увеличение процента безвкусной электронной жидкости в BHI с 1,25 до 5% ( p <0.001) подавляет рост всех протестированных бактерий. На рисунке 9 показано влияние ароматизированных жидкостей для электронных сигарет на ранней стационарной фазе для каждого стрептококка (0,0625, 0,125, 0,25, 0,3125, 0,625 и 1,25 конечных процентов в BHI) по сравнению с 5% E-жидкости без запаха в BHI. Для всех стрептококков самый низкий процент всех ароматизаторов в BHI показал статистически более высокие значения, чем 5% E-жидкость без запаха, в то время как самый высокий процент всех ароматизаторов в BHI показал статистически более низкие значения, чем 5% E-жидкость без запаха.Поскольку концентрированная корица имеет более высокое значение абсорбции, чем другие ароматизаторы (таблица 1), значения абсорбции для электронной жидкости с высоким содержанием корицы (конечный процент 0,3125, 0,625 и 1,25 в BHI) были выше контрольных значений (без жидкости ) и впоследствии были нормализованы до контрольного исходного уровня. При выражении в процентах от контроля все значения, кроме одного (0,3125% корицы для S. mitis ), были отрицательными (дополнительный рисунок 4), и, следовательно, нулевые значения представлены на рисунке 9.Таким образом, эти результаты показывают, что E-жидкость без запаха при концентрациях выше 2,5% в BHI снижает рост бактерий. Кроме того, низкие концентрации ароматизированных жидкостей для электронных сигарет, по-видимому, увеличивают рост бактерий, в то время как высокие концентрации ароматизированных жидкостей для электронных сигарет снижают рост бактерий. В целом, наши данные свидетельствуют о том, что жидкости для электронных сигарет и их аэрозоли-ароматизаторы изменяют характер роста оральных комменсальных бактерий in vitro . Такие изменения роста могут в конечном итоге повлиять на баланс многовидовых биопленок полости рта и могут привести к дисбактериозу и болезням.

Рис. 6. Двадцатичетырехчасовые кривые роста, иллюстрирующие реакцию на дозу жидкости для приема пищи ± ароматизаторы с низкой концентрацией. Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = от 4 до 8 — количество повторов. c = p <0,001 для необработанного контроля.

Рис. 7. Двадцатичетырехчасовые кривые роста, иллюстрирующие дозовые реакции жидкости для приема пищи ± ароматизаторы высокой концентрации. Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 4 — количество повторов. a = p <0,05, b = p <0,01 и c = p <0,001 для необработанного контроля. Полный список сравнительной статистики см. В дополнительной таблице 2.

Рис. 8. Влияние процента E-жидкости без запаха в BHI на рост бактерий в начале фазы плато. Каждая полоса представляет собой среднее ± SEM процентное отклонение от контроля, где n, как показано на графике, представляет собой количество повторов.Красная линия указывает на 0% E-жидкость (контроль). c = p <0,001 от 0% E-жидкости.

Рис. 9. Влияние E-жидкость ± высокий и низкий процент ароматизаторов в BHI на рост планктонных бактерий. Каждая полоса представляет собой среднее ± SEM процентное изменение роста планктона в контрольной среде BHI (без E-жидкостей), n = от 4 до 12 — количество повторов. a = p <0,05 из безвкусной E-жидкости, b = p <0.01 из безвкусной электронной жидкости и c = p <0,001 из безвкусной электронной жидкости.

Обсуждение

Эта работа расширяет наши предыдущие открытия и впервые представляет влияние ароматизирующих соединений на рост оральных комменсальных бактерий путем независимого анализа видов в твердофазном росте на агаре BHI и в жидких культурах BHI. Для этих исследований концентрации всех ароматизаторов варьировались от 5 до 25% от общего раствора жидкости E (Таблица 2), что типично для большинства пользователей ECIG.Кроме того, процентное содержание E-жидкости в BHI варьировалось от 1 до 5%, что очень близко к процентному содержанию E-жидкости (в виде аэрозоля), которое может быть обнаружено в слюне, выстилающей ротовую полость (Таблица 3). В этих условиях было показано, что ароматизирующие вещества оказывают ингибирующее действие на рост всех четырех испытанных видов оральных растений. Приведенные здесь данные не только согласуются с нашими предыдущими выводами о незначительном влиянии 1% жидкости без запаха на оральные комменсалы (Cuadra et al., 2019; Nelson et al., 2019), но также сосредоточены на потенциальных опасностях более высоких доз. концентрация жидкостей ± ароматизаторы и их аэрозоли на рост стрептококков полости рта.Было обнаружено, что ароматизаторы полной концентрации, но не 5% ароматизаторов в E-жидкости, оказывают ингибирующее действие на анализы Кирби Бауэра, подчеркивая недостаточную чувствительность этого метода (рисунок 2 и дополнительный рисунок 2). Среди испытанных ароматизаторов было обнаружено, что ментол, корица и клубника оказывают значительное ингибирующее действие на рост пероральных видов на агаре BHI. Хотя 24-часовые кривые планктонного роста для всех комбинаций бактерий / ароматизаторов были подобны (рис. 3), регрессионные анализы интервалов экспоненциального роста были несопоставимы при обработке как E-жидкость + ароматизаторы (рисунок 4), так и аэрозоль + ароматизаторы, генерируемые ECIG ( Рисунок 5).Было обнаружено, что ароматизаторы с низкой концентрацией в E-жидкости имеют дозозависимый, но не статистически значимый эффект (Рисунок 6). С другой стороны, ароматизаторы с высокой концентрацией в E-жидкости вызывают дозозависимое и статистически значимое снижение роста бактерий (рис. 7). Дальнейший анализ этих данных в поздней экспоненциальной фазе показывает, что концентрации выше 1% E-жидкости без запаха в BHI могут способствовать замедленному росту оральных комменсальных бактерий (рис. 8). Аналогичным образом, жидкие ароматизаторы E, как было замечено, оказывают значительное ингибирующее действие на все четыре вида комменсалов во всех ароматизированных условиях при высоких концентрациях, особенно ментол, корица и клубника (Рисунок 9).Это говорит о том, что самодельный 25% ароматизированный раствор Е-жидкости (об. / Об.), Используемый в течение дня, может серьезно изменить рост бактерий полости рта in vivo . С точки зрения реального вейпинга, воздействие высококонцентрированных ароматизированных жидкостей для электронных сигарет на рост этих оральных комменсальных стрептококков может зависеть не только от аэрозольных компонентов электронной жидкости, но и от топографии затяжки пользователя (Beauval et al., 2019), как известно, изменяет производство и выброс различных карбонильных соединений, что, в свою очередь, может влиять на рост комменсальных бактерий.Настоящее исследование ограничивалось соотношением пропиленгликоля к глицерину 1: 1, концентрацией никотина 20 мг / мл и единственной предварительно определенной топографией затяжки, как указано в разделе улавливания аэрозолей в материалах и методах. Однако в предыдущей работе этой лаборатории (Nelson et al., 2019) сообщалось, что изменение соотношения пропиленгликоль / глицерин или изменение концентрации никотина в безвкусной жидкости для электронных сигарет не привело к значительному изменению модели роста S. gordonii . , с.mitis и S. oralis . В качестве альтернативы можно привести аргумент, что изменение соотношения увлажнителя или концентрации никотина может либо ослабить, либо усилить влияние жидких ароматизаторов на рост этих видов бактерий. В конечном счете, эти данные демонстрируют, что жидкость для электронных сигарет с ароматизаторами имеет переменный и потенциально вредный эффект на рост пероральных комменсальных стрептококков.

Электронные жидкие соединения при нагревании могут выделять вредные побочные продукты (Lerner et al., 2015; Bitzer et al., 2018; Qu et al., 2018; Стронгин, 2019) к аэрозолю. Кроме того, использование ECIG может привести к выщелачиванию токсичных металлов из нагревательной спирали и других металлических компонентов устройства ECIG в аэрозоль (Kosmider et al., 2014; Lerner et al., 2015; Palazzolo et al., 2017; Bitzer et al., 2018; Olmedo et al., 2018). Кроме того, сообщалось, что металлы являются токсинами для стрептококков полости рта (Dunning et al., 1998). Поскольку бактерии, подвергшиеся воздействию низких концентраций жидкостей для электронных сигарет с ароматизаторами и их соответствующих аэрозолей, имеют схожие модели роста, несмотря на то, что профили роста во время экспоненциальной фазы, по-видимому, демонстрируют небольшое препятствие для роста, эти вредные побочные продукты, по-видимому, не влияют на общую рост, особенно при низком уровне воздействия.Следовательно, наши данные демонстрируют, что дозозависимая токсичность E-жидкости обусловлена ​​исключительно самими составляющими E-жидкости, а не следами металлов или других побочных продуктов, вымываемых из устройства ECIG. Любое количество ингибирования, возникающее в результате аэрозольных побочных продуктов и металлов, высвобождаемых из устройства ECIG, одинаково для всех экспериментальных групп и, следовательно, не может быть связано с ингибированием роста в этом исследовании. Однако это не исключает возможности того, что эти побочные продукты могут влиять на регуляцию транскрипции или ферментативную активность.Например, транскриптомный анализ генов, таких как recA и lytA (Lewis, 2000), которые отвечают на ДНК из лизированных клеток, а также стрессовых генов, таких как sdbA (Davey et al., 2016), может раскрыть дальнейшее понимание неблагоприятного воздействия ароматизаторов E-liquid на комменсальные стрептококки.

На сегодняшний день проведено несколько исследований, посвященных влиянию ароматизаторов жидкости для электронных сигарет на микробиоту полости рта. В одном исследовании анализировалось влияние электронных жидкостей на S.mutans и обнаружили ускоренный рост у таких кариесогенных видов, как сахароза, студенистые конфеты и кислые напитки (Kim et al., 2018). В другом исследовании изучалась микробиота полости рта и кишечника 30 человек и не было обнаружено значительного бета-разнообразия между пользователями ECIG и контрольной группой (Stewart et al., 2018). Клиническое значение для полости рта среди пользователей ECIG имеют недавние сообщения, демонстрирующие наличие повреждений слизистой оболочки полости рта, разрывов и разрывов зубов (GülŞen and Uslu, 2020), а также никотиновый стоматит (обычно известный как нёбо курильщика), волосатый язык. и воспаление губ, состояние, известное как угловой хейлит (Bardellini et al., 2018). Примечательно, что содержание котинина, основного метаболита никотина, в слюне и моче подержанных вейперов также значительно увеличилось (Ballbè et al., 2014). Однако роль ароматизаторов в аэрозольной E-жидкости в этих клинических условиях еще предстоит определить. Альтернативно, эти эффекты E-жидкости были охарактеризованы на различных тканях и клеточных линиях млекопитающих. Было обнаружено, что аэрозоли E-жидкости, содержащие классические табачные ароматизаторы, являются мощными стимуляторами интерлейкина (IL) -6 и IL-8 в эпителиальных клетках дыхательных путей человека h392 (Lerner et al., 2015). Точно так же фибробласты легких человека демонстрировали стресс, морфологические изменения и высокую продукцию IL-8 при обработке жидкостями и аэрозолями со вкусом корицы (Lerner et al., 2015). Более того, эпителий легкого in vivo мыши показал пониженные уровни как глутатиона (GSH), так и дисульфида глутатиона (GSSG) по сравнению с контролем, демонстрируя нарушение клеток и, вероятно, микробов, для поддержания надлежащего баланса общего глутатиона (Lerner et al., 2015 ). Это нарушение окислительно-восстановительного баланса может быть потенциальным механизмом, посредством которого жидкости и ароматизаторы влияют на рост микробов.В другом исследовании (Leigh et al., 2016) было обнаружено, что многие ароматизаторы ECIG, включая табак, ментол и клубнику, значительно снижают жизнеспособность и метаболическую активность бронхиальных эпителиальных клеток h392 при выращивании in vitro (Leigh et al., 2016). Ключевые цитокины, такие как IL-1β, IL-10 и хемокины, включая CXCL1, CXCL2 и CXCL10, активировались клубничным вкусом (Leigh et al., 2016). Коричный альдегид, основной компонент многих ароматизаторов корицы, снижает жизнеспособность моноцитарных клеток U937 и MM6 человека и вызывает повышенную регуляцию IL-8 дозозависимым образом (Muthumalage et al., 2018). Наши данные хорошо коррелируют с вышеупомянутыми исследованиями эукариотических моделей в том смысле, что эффекты электронных жидкостей и их аэрозолей, приводящие к вышеупомянутым стресс-ответам, также могут иметь место у пероральных комменсальных стрептококков и могут обеспечивать предполагаемый механизм ингибирования роста.

Многие ароматизаторы являются производными пищевых продуктов, но также обладают антимикробным действием. Мы предполагаем, что ароматизаторы ECIG, как пищевые производные, служат дополнительным источником углерода для метаболизма и роста бактерий.Возможно, эти предполагаемые источники углерода в низких концентрациях улучшают рост бактерий в полости рта. Хотя точная химическая структура ароматизаторов неизвестна, велика вероятность того, что эти молекулы такие же, как и в натуральных растительных веществах. Оральные комменсальные бактерии часто подвергаются воздействию этих ароматических молекул, когда люди едят эти растения. Например, ментол содержится во многих терпеносодержащих травах (Aggarwal et al., 2015), а корица часто используется в качестве добавки для приготовления пищи.Известно, что клубника и черника содержат много полезных соединений, таких как антиоксиданты и витамины, в дополнение к их естественным ароматизаторам. Ароматизирующие молекулы, приятные на вкус при низких концентрациях, могут быть неприятными или даже токсичными для рта человека при высоких концентрациях. Следовательно, аналогичный аргумент может быть предложен в отношении биологии оральных комменсальных бактерий. Оральные комменсальные бактерии, подвергшиеся воздействию жидкостей с высокой концентрацией ароматизаторов (25%), испытывают замедленный рост в условиях, аналогичных тем, которые обычно наблюдаются при применении антибиотиков.Например, известно, что ментол и коричный альдегид токсичны для бактерий и являются общепризнанными антимикробными средствами (Solórzano-Santos и Miranda-Novales, 2012; Freires et al., 2015). Важно отметить, что оральные комменсальные бактерии выработали значительную множественную лекарственную устойчивость на основе длительного использования антибиотиков в медицине (Thornton et al., 2015). Развитие множественной лекарственной устойчивости у комменсальных стрептококков предполагает возможность развития у этих комменсалов устойчивости к аэрозолям E-жидкости, содержащим высокие концентрации ароматизаторов.Эти результаты предполагают, что при воздействии низких концентраций ароматизаторов бактерии полости рта либо адаптируются и, возможно, чрезмерно компенсируют свой рост, либо используют эти соединения в качестве дополнительного источника питательных веществ. В любом случае низкие концентрации ароматизаторов вызывают более высокие темпы роста. С другой стороны, высокие концентрации, по-видимому, действуют как противомикробные средства, снижая скорость роста этих оральных комменсалов. В конечном счете, воздействие ароматизированного аэрозоля ECIG на низком уровне может вызвать более быстрый рост комменсалов в полости рта in situ , что само по себе является нарушением микробной экологии полости рта, в то время как воздействие ароматизаторов в высоких дозах снижает рост комменсальных бактерий в полости рта.Независимо от воздействия высокого или низкого уровня, вызванные ароматизаторами изменения в росте бактерий в микробной среде полости рта могут привести к изменениям во взаимодействии бактерий-хозяев и могут способствовать дисбактериозу, тем самым способствуя возникновению заболеваний полости рта.

Настоящее исследование было ограничено изучением четырех видов оральных комменсалов, обитающих в микробиоме полости рта человека. Эти комменсальные стрептококки были изучены, потому что они в значительной степени представляют биомассу начальных стадий образования биопленок полости рта, если учитывать необработанный процент этих четырех видов (Colombo et al., 2007). Наше исследование in vitro пытается имитировать рост микробов в агаре BHI и рост планктона в среде BHI, подвергая бактерии воздействию физиологически значимых концентраций электронных жидкостей в закрытой системе. Другие исследования показали элегантные открытые системы, производящие биопленки ротовой полости, которые лучше отражают рост микробов in vivo (Kolenbrander et al., 2006; Rickard et al., 2008; Cuadra-Saenz et al., 2012). Хотя слюна была бы предпочтительной средой, бульон BHI был хорошо проверен для поддержки роста комменсальных стрептококков и стал обычным явлением в качестве стандартной среды для анализов in vitro (Kreth et al., 2008; Куадра и др., 2019; Нельсон и др., 2019; Hanel et al., 2020). Кроме того, эти исследования были выполнены в виде одновидовых культур, которые устраняют межвидовые взаимодействия, присутствующие в полости рта (Socransky et al., 1998; Kolenbrander, 2000; Kolenbrander et al., 2006; Cuadra-Saenz et al., 2012; Диас и Вальм, 2019). Более реалистичные условия, которые позволят нам изучить влияние воздействия ароматизированной жидкости на оральные комменсальные бактерии, будут включать открытую систему, выращивающую многовидовые биопленки, питаемые исключительно непрерывным потоком слюны.Более того, будущие исследования должны учитывать присутствие конкурирующих патогенов, более реалистично имитируя микробную среду полости рта. В наших будущих экспериментах наша группа будет изучать рост пародонтальных бактериальных патогенов, таких как Fusubacterium nucleatum , Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans и возбудитель кандидоза языка Candida albicans в условиях экспериментального стрептококка и того же стрептококка.Такие исследования помогут изучить влияние на взаимодействие между комменсальными стрептококками и патогенами полости рта. Кроме того, жидкие ароматизаторы и их компоненты будут проверены на бактерицидные, бактериолитические или бактериостатические свойства в отношении бактерий в полости рта. Молекулярные исследования с низким уровнем воздействия электронной жидкости также будут изучены для выявления предполагаемых генов, участвующих в метаболизме или стрессовой реакции на эти агенты. Другим ограничением является патентованная природа самих коммерческих жидких ароматизаторов для электронных сигарет, что, в свою очередь, ограничивает понимание механизмов ингибирования, вызываемых ароматизаторами.Химическое разделение и идентификация ароматизирующих компонентов с помощью всестороннего анализа ВЭЖХ и ЖХМС / ГХМС будет необходимо для начала определения любых потенциальных механизмов ингибирования роста. Будущие химические анализы позволят выявить отдельные соединения в жидких ароматизаторах для электронных сигарет, которые будут проверены на микробное ингибирование и токсичность.

В заключение, это исследование показывает, что ароматизированная E-жидкость, особенно с более высокой концентрацией ароматизаторов, оказывает значительное ингибирующее действие на рост планктона пероральных комменсальных стрептококков при физиологически значимых концентрациях и воздействиях.Наше исследование (по крайней мере, в условиях низкого уровня воздействия ароматизаторов) также подтверждает, что неаэрозольная жидкость E-Liquid служит моделью, сравнимой с ее аэрозольным аналогом. Кроме того, это исследование прокладывает путь для будущих исследований для продолжения изучения воздействия ароматизированных аэрозолей и жидкостей для электронных сигарет, генерируемых ECIG, на бактерии и биопленки в полости рта. Дестабилизация микробиоты полости рта связана с тяжелыми заболеваниями, такими как гингивит, кариес и заболевания пародонта (Rosan and Lamont, 2000; Kreth et al., 2008; Гросс и др., 2012; Марш и др., 2015). Было продемонстрировано, что комменсальная микробиота полости рта, в частности S. gordonii и S. intermediateus , ограничивает инвазию Porphyromonas gingivalis в эпителий полости рта, что может служить защитной мерой против гингивита (Hanel et al., 2020). Заболевания полости рта являются фактором и предиктором плохого системного здоровья, которое распространяется за пределы полости рта и может оказывать пожизненное воздействие на здоровье и физиологию человека.

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы. Дальнейшие запросы можно направить соответствующему автору.

Авторские взносы

GC и DP разработали исследование, разработали эксперименты и предоставили информацию о проекте. GC и JF провели анализы Кирби Бауэра. JF, SS, DL, GC и DP проводили эксперименты с кривой роста. DP проанализировал данные. JF, GC и DP внесли свой вклад в написание рукописи.Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана очным грантом Колледжа остеопатической медицины ДеБуск.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим Абрара Шамима, Майкла Хелу, Шивама Пателя и Джордана Кодилла за помощь в проведении анализов Кирби Бауэра и экспериментах с кривой роста.Мы также благодарим преподавателей колледжа Мюленберг (доктора Эми Харк, Кери Колаброй и Брюс Вайтман), Мемориальный университет Линкольна, Колледж остеопатической медицины ДеБуск (доктора Беатрикс Дудзик, Дуглас Фитцович, Джонатан Лео, Ховард Тейтельбаум, Майкл Витинг и Ян Зирен) и Мемориальный онкологический центр им. Слоуна Кеттеринга (Габриэль Армийо, Памела Хэтфилд и доктор Джонатан Пелед) за любезно предоставленную конструктивную критику, комментарии и редакционную помощь при подготовке этой рукописи.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2020.585416/full#supplementary-material

Дополнительный рисунок 1 | Сравнение 24-часовых кривых роста с использованием 96-луночных планшетов с круглым и плоским дном. Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 12 — количество повторов.

Дополнительный рисунок 2 | Анализ Кирби-Бауэра, показывающий влияние 5% концентрированных ароматизаторов в электронной жидкости на зону ингибирования. Каждая полоса представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 3 — количество повторов. a = p <0,05 для перекиси водорода (положительный контроль) и b = p <0,05 для отрицательного контроля (E-жидкость без запаха).

Дополнительный рисунок 3 | Процентное изменение наклона (объединенные данные из рисунков 4, 5) по сравнению с жидкостью для электронных сигарет без запаха; по видам бактерий (верхняя панель) и аромату (нижняя панель). Каждая полоса представляет собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 8 на верхней панели и n = 10 на нижней панели — это количество повторов.

Дополнительный рисунок 4 | Каждая полоса представляет собой среднее значение ± SEM процента контрольных значений оптической плотности (OD 595) для всех бактерий, подвергшихся воздействию ароматизатора корицы в высокой концентрации, где n , как показано на графике, представляет собой количество повторов.

Дополнительная таблица 1 | Средние ± стандартное отклонение и n -значения для всех точек данных в анализах Кирби Бауэра и на кривых роста бактерий.

Дополнительная таблица 2 | Полный список статистики для рисунка 7.

Сноски

Список литературы

Аас, Дж. А., Пастер, Б. Дж., Стокс, Л. Н., Олсен, И., и Дьюхерст, Ф. Э. (2005). Определение нормальной бактериальной флоры полости рта. J. Clin. Microbiol. 43, 5721–5732. DOI: 10.1128 / JCM.43.11.5721-5732.2005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Abranches, J., Zeng, L., Kajfasz, J., Palmer, S., Chakraborty, B., Wen, Z., et al. (2018). Биология оральных стрептококков. Microbiol. Спектр. 6, 1–18. DOI: 10.1128 / microbiolspec.GPP3-0042-2018

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аггарвал С., Агарвал С. и Джалхан С. (2015). Эфирные масла как новый усилитель проникновения через кожу человека для трансдермальной доставки лекарств: обзор. J. Pharm. Pharmacol. 67, 473–485. DOI: 10.1111 / jphp.12334

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Амано, А., Инаба, Х. (2012).Сердечно-сосудистые заболевания и заболевания пародонта. Clin. Кальций 22, 43–48.

Google Scholar

Бахл, В., Лин, С., Сюй, Н., Дэвис, Б., Ван, Ю., и Талбот, П. (2012). Сравнение цитотоксичности жидкости для пополнения электронных сигарет на эмбриональной и взрослой моделях. Репродукция. Toxicol. 34, 529–537. DOI: 10.1016 / j.reprotox.2012.08.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Баллбе, М., Мартинес-Санчес, Х.М., Sureda, X., Fu, M., Pérez-Ortuño, R., Pascual, J. A., et al. (2014). Сигареты по сравнению с электронными сигаретами: пассивное воздействие дома измеряется с помощью маркеров в воздухе и биомаркеров. Environ. Res. 135, 76–80. DOI: 10.1016 / j.envres.2014.09.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Барделлини Э., Амадори Ф., Конти Г. и Майорана А. (2018). Поражения слизистой оболочки полости рта у потребителей электронных сигарет по сравнению с бывшими курильщиками. Acta Odontol. Сканд. 76, 226–228. DOI: 10.1080 / 00016357.2017.1406613

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бауэр А. В., Кирби В. М., Шерис Дж. К. и Терк М. (1966). Тестирование чувствительности к антибиотикам стандартным методом с одним диском. Am. J. Clin. Патол. 45, 493–496. DOI: 10.1093 / ajcp / 45.4_ts.493

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бауэр А. В., Перри Д. М. и Кирби В. М. (1959). Однодисковое тестирование стафилококков на чувствительность к антибиотикам; анализ техники и результатов. AMA Arch. Междунар. Med. 104, 208–216. DOI: 10.1001 / archinte.1959.00270080034004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боваль, Н., Верриель, М., Гарат, А., Фронваль, И., Дюсавуар, Р., Антерье, С. и др. (2019). Влияние условий затяжки на карбонильный состав аэрозолей электронных сигарет. Внутр. J. Hyg. Environ. Здоровье 222, 136–146. DOI: 10.1016 / j.ijheh.2018.08.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Битцер, З.T., Goel, R., Reilly, S.M., Elias, R.J., Silakov, A., Foulds, J., et al. (2018). Влияние ароматизаторов на образование свободных радикалов в аэрозолях электронных сигарет. Free Radic. Биол. Med. 120, 72–79. DOI: 10.1016 / j.freeradbiomed.2018.03.020

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боргнакке, В. С., Юлёстало, П. В., Тейлор, Г. В., и Дженко, Р. Дж. (2013). Влияние заболеваний пародонта на диабет: систематический обзор данных эпидемиологических наблюдений. J. Clin. Пародонтол. 40, S135 – S152. DOI: 10.1111 / jcpe.12080

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Центр по контролю и профилактике заболеваний (2019a). Молодежь и употребление табака. Атланта, Джорджия: Центр по контролю и профилактике заболеваний.

Google Scholar

Центр по контролю и профилактике заболеваний (2019b). Вспышка травмы легких, связанная с использованием электронных сигарет или вейпинга | Электронные сигареты | Курение и употребление табака.Атланта, Джорджия: CDC.

Google Scholar

Чанд, Х. С., Мутумалаге, Т., Мазиак, В., и Рахман, И. (2019). Легочная токсичность и патофизиология электронных сигарет или электронных сигарет связаны с повреждением легких. Перед. Pharmacol. 10: 1619. DOI: 10.3389 / fphar.2019.01619

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цихоньска Д., Кусяк А., Кочаньска Б., Очочинская Д. и Свитлик Д. (2019). Влияние электронных сигарет на отдельные антибактериальные свойства слюны. Внутр. J. Environ. Res. Публичный. Здоровье 16: 4433. DOI: 10.3390 / ijerph26224433

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коломбо, А. В., да Силва, К. М., Хаффаджи, А., и Коломбо, А. П. В. (2007). Идентификация внутриклеточных видов ротовой полости в трещинных эпителиальных клетках человека от субъектов с хроническим пародонтитом путем флуоресцентной гибридизации in situ. J. Periodontal Res. 42, 236–243. DOI: 10.1111 / j.1600-0765.2006.00938.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Конуэль, Э.J., Chieng, H.C., Fantauzzi, J., Pokhrel, K., Goldman, C., Smith, T.C, et al. (2020). Повреждение легких, связанное с курением каннабиноидного масла, и его рентгенологические проявления. Am. J. Med. 133, 865–867. DOI: 10.1016 / j.amjmed.2019.10.032

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Куадра, Г. А., Смит, М. Т., Нельсон, Дж. М., Ло, Э. К., и Палаццоло, Д. Л. (2019). Сравнение безвкусного аэрозоля, создаваемого электронными сигаретами, и обычного сигаретного дыма по выживаемости и росту обычных оральных комменсальных стрептококков. Внутр. J. Environ. Res. Публичный. Здоровье 16: 1669. DOI: 10.3390 / ijerph26101669

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Куадра-Саенс, Г., Рао, Д. Л., Андервуд, А. Дж., Белапуре, С. А., Кампанья, С. Р., Сан, З. и др. (2012). Аутоиндуктор-2 влияет на взаимодействие первых колонизирующих стрептококков в биопленках полости рта. Microbiol. Читать. Англ. 158, 1783–1795. DOI: 10.1099 / mic.0.057182-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэйви, Л., Гальперин, С.А., Ли, С.Ф. (2016). Мутация тиол-дисульфидоксидоредуктазы SdbA Streptococcus gordonii приводит к усиленному образованию биопленок, опосредованному двухкомпонентной сигнальной системой CiaRH. PLoS One 11: e0166656. DOI: 10.1371 / journal.pone.0166656

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Диас П. И., Чалмерс Н. И., Рикард А. Х., Конг К., Милберн К. Л., Палмер Р. Дж. И др. (2006). Молекулярная характеристика специфической микрофлоры полости рта во время начальной колонизации эмали. Заявл. Environ. Microbiol. 72, 2837–2848. DOI: 10.1128 / AEM.72.4.2837-2848.2006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Dominy, S. S., Lynch, C., Ermini, F., Benedyk, M., Marczyk, A., Konradi, A., et al. (2019). Porphyromonas gingivalis в мозге при болезни Альцгеймера: данные о причинах заболевания и лечении низкомолекулярными ингибиторами. Sci. Adv. 5: eaau3333. DOI: 10.1126 / sciadv.aau3333

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Даффи, Б., Li, L., Lu, S., Durocher, L., Dittmar, M., Delaney-Baldwin, E., et al. (2020). Анализ каннабиноидсодержащих жидкостей в картриджах для незаконного вейпинга, полученных от пациентов с легочной травмой: определение ацетата витамина Е в качестве основного разбавителя. Токсики 8: 8. DOI: 10.3390 / toxics8010008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Даннинг, Дж. К., Ма, Ю., и Маркиз, Р. Э. (1998). Анаэробное уничтожение стрептококков полости рта восстановленными катионами переходных металлов. Заявл. Environ. Microbiol. 64, 27–33. DOI: 10.1128 / AEM.64.1.27-33.1998

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фарсалинос, К. Э., Гиллман, Г. (2018). Выбросы карбонила в аэрозоле электронных сигарет: систематический обзор и методологические соображения. Перед. Physiol. 8: 1119. DOI: 10.3389 / fphys.2017.01119

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фарсалинос, К. Э., и Полоса, Р. (2014).Оценка безопасности и риска электронных сигарет как заменителей табака: систематический обзор. Ther. Adv. Drug Saf. 5, 67–86. DOI: 10.1177 / 2042098614524430

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fonseca Fuentes, X., Kashyap, R., Hays, J. T., Chalmers, S., Lama von Buchwald, C., Gajic, O., et al. (2019). Острое повреждение легких, связанное с VpALI-Vaping: новый убийца вокруг блока. Mayo Clin. Proc. 94, 2534–2545.DOI: 10.1016 / j.mayocp.2019.10.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фрейрес И. А., Денни К., Бенсо Б., де Аленкар С. М. и Розален П. Л. (2015). Антибактериальная активность эфирных масел и их изолированных компонентов против кариесогенных бактерий: систематический обзор. Молекулы 20, 7329–7358. DOI: 10,3390 / молекулы20047329

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарнье, Ф., Жербо, Ж., Курвалин П. и Галиманд М. (1997). Идентификация клинически значимых стрептококков группы viridans на уровне вида с помощью ПЦР. J. Clin. Microbiol. 35, 2337–2341. DOI: 10.1128 / jcm.35.9.2337-2341.1997

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гросс, Э. Л., Билл, К. Дж., Куч, С. Р., Файерстоун, Н. Д., Лейс, Э. Дж., И Гриффен, А. Л. (2012). Beyond Streptococcus mutans : начало кариеса зубов, связанное с несколькими видами, по данным анализа сообщества 16S рРНК. PLoS One 7: e47722. DOI: 10.1371 / journal.pone.0047722

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

GülŞen, A., and Uslu, B. (2020). Опасности для здоровья и осложнения, связанные с электронными сигаретами: обзор. Тюрк. Грудной. J. 21, 201–208. DOI: 10.5152 / TurkThoracJ.2019.180203

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ханель, А. Н., Херцог, Х. М., Джеймс, М. Г., и Куадра, Г. А. (2020). Влияние пероральных комменсальных стрептококков на инвазию Porphyromonas gingivalis в эпителиальные клетки полости рта. Вмятина. J. 8:39. DOI: 10.3390 / dj8020039

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Харт-Чу, Э. Н., Алвес, Л. А., Теобальдо, Дж. Д., Саломао, М. Ф., Хёфлинг, Дж. Ф., Кинг, В. Ф. и др. (2019). Разнообразие экспрессии PcsB влияет на фенотипы Streptococcus mitis, связанные с персистентностью и вирулентностью хозяина. Перед. Microbiol. 10: 2567. DOI: 10.3389 / fmicb.2019.02567

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hasegawa, Y., Mans, J. J., Mao, S., Lopez, M.C., Baker, H.V., Handfield, M., et al. (2007). Транскрипционные реакции десневых эпителиальных клеток на комменсальные и условно-патогенные микроорганизмы полости рта. Заражение. Иммун. 75, 2540–2547. DOI: 10.1128 / IAI.01957-06

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эрреро, Э. Р., Сломка, В., Бернаертс, К., Бун, Н., Эрнандес-Санабриа, Э., Пассони, Б. Б. и др. (2016). Противомикробные эффекты комменсальных оральных видов регулируются факторами окружающей среды. J. Dent. 47, 23–33. DOI: 10.1016 / j.jdent.2016.02.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Холмлунд, А., Лампа, Э., и Линд, Л. (2017). Здоровье полости рта и риск сердечно-сосудистых заболеваний в группе пациентов с пародонтитом. Атеросклероз 262, 101–106. DOI: 10.1016 / j.atherosclerosis.2017.05.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг, X., Браунгард, К. М., Цзян, М., Ан, С.-Дж., Берн, Р. А., и Насименто, М. М. (2018). Разнообразие антагонистических взаимодействий между комменсальными оральными стрептококками и Streptococcus mutans . Caries Res. 52, 88–101. DOI: 10.1159 / 000479091

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джамал А., Генцке А., Ху С. С., Каллен К. А., Апельберг Б. Дж., Хома Д. М. и др. (2017). Употребление табака среди учащихся средних и старших классов — США, 2011–2016 гг. Morbid. Смертный.Еженедельный отчет 66, 597–603.

Google Scholar

Дженсен, Р. П., Луо, В., Панков, Дж. Ф., Стронгин, Р. М., и Пейтон, Д. Х. (2015). Скрытый формальдегид в аэрозолях электронных сигарет. N. Engl. J. Med. 372, 392–394. DOI: 10.1056 / NEJMc1413069

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Калининский А., Бах К. Т., Накка Н. Е., Гинзберг Г., Марраффа Дж., Наваретт К. А. и др. (2019). Электронная сигарета или вейпинг, связанное с употреблением продукта повреждение легких (EVALI): серия случаев и диагностический подход. Ланцет Респир. Med. 7, 1017–1026. DOI: 10.1016 / S2213-2600 (19) 30415-1

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Канмаз Б., Ламонт Г., Даначи Г., Гогенени Х., Будунели Н. и Скотт Д. (2019). Микробиологические и биохимические данные в связи с клиническим статусом пародонта у активных курильщиков, некурящих и пассивных курильщиков. Tob. Induc. Дис. 17:20. DOI: 10.18332 / tid / 104492

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, С.A., Smith, S., Beauchamp, C., Song, Y., Chiang, M., Giuseppetti, A., et al. (2018). Кариесогенный потенциал сладких ароматизаторов в жидкостях для электронных сигарет. PLoS One 13: e0203717. DOI: 10.1371 / journal.pone.0203717

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коленбрандер П. Э., Палмер Р. Дж., Рикард А. Х., Якубовикс Н. С., Чалмерс Н. И. и Диас П. И. (2006). Бактериальные взаимодействия и последовательности во время развития налета. Periodontol 2000 42, 47–79.DOI: 10.1111 / j.1600-0757.2006.00187.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kosmider, L., Sobczak, A., Fik, M., Knysak, J., Zaciera, M., Kurek, J., et al. (2014). Карбонильные соединения в парах электронных сигарет: влияние никотинового растворителя и выходного напряжения батареи. Никотин Тоб. Res. 16, 1319–1326. DOI: 10.1093 / NTR / NTU078

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kreth, J., Zhang, Y., and Herzberg, M.С. (2008). Стрептококковый антагонизм в биопленках полости рта: Streptococcus sanguinis и Streptococcus gordonii интерференция с Streptococcus mutans . J. Bacteriol. 190, 4632–4640. DOI: 10.1128 / JB.00276-08

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Крюсеманн, Э. Дж. З., Босвельд, С., де Грааф, К., и Талхаут, Р. (2019). Колесо вкусов E-Liquid: общий словарь, основанный на систематическом обзоре классификаций ароматов электронных жидкостей в литературе. Никотин Тоб. Res. 21, 1310–1319. DOI: 10.1093 / NTR / NTY101

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кумар, П. С., Мэтьюз, К. Р., Джоши, В., де Ягер, М., и Аспирас, М. (2011). Табакокурение влияет на приобретение и колонизацию бактерий в биопленках полости рта. Заражение. Иммун. 79, 4730–4738. DOI: 10.1128 / IAI.05371-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Н. Дж., Лоутон, Р. И., Хершбергер, П.А., Гоневич М. Л. (2016). Ароматизаторы значительно влияют на ингаляционную токсичность аэрозоля, образующегося из электронных систем доставки никотина (ЭСДН). Tob. Контроль 25: ii81. DOI: 10.1136 / tobaccocontrol-2016-053205

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Н. Дж., Тран, П. Л., О’Коннор, Р. Дж., И Гоневич, М. Л. (2018). Цитотоксическое действие нагретых табачных изделий (HTP) на бронхиальные эпителиальные клетки человека. Tob. Контроль 27: s26.DOI: 10.1136 / tobaccocontrol-2018-054317

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лернер, К. А., Сундар, И. К., Яо, Х., Герлофф, Дж., Осип, Д. Дж., Макинтош, С., и др. (2015). Пары электронных сигарет и электронных соков с ароматизаторами вызывают токсичность, окислительный стресс и воспалительную реакцию в эпителиальных клетках легких и в легких мыши. PLoS One 10: e116732. DOI: 10.1371 / journal.pone.0116732

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лю, Ю., Палмер, С. Р., Чанг, Х., Комбс, А. Н., Берн, Р. А., и Ку, Х. (2018). Дифференциальная устойчивость к окислительному стрессу изолятов Streptococcus mutans влияет на конкуренцию в экологической модели биопленки смешанного типа. Environ. Microbiol. Rep. 10, 12–22. DOI: 10.1111 / 1758-2229.12600

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лёлер, Дж., И Волленберг, Б. (2019). Являются ли электронные сигареты более здоровой альтернативой обычному курению табака? Eur.Arch. Оториноларингол. 276, 17–25. DOI: 10.1007 / s00405-018-5185-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Марш П. Д., Хед Д. А. и Дивайн Д. А. (2015). Зубной налет как биопленка и микробное сообщество — значение для лечения. J. Oral Biosci. 57, 185–191. DOI: 10.1016 / j.job.2015.08.002

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Moon, J.-H., Lee, J.-H., and Lee, J.-Y. (2015). Поддесневой микробиом у курильщиков и некурящих у пациентов с корейским хроническим пародонтитом. Мол. Oral Microbiol. 30, 227–241. DOI: 10.1111 / omi.12086

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Muthumalage, T., Prinz, M., Ansah, K. O., Gerloff, J., Sundar, I.K, and Rahman, I. (2018). Воспалительные и окислительные реакции, вызванные воздействием обычно используемых ароматизаторов для электронных сигарет и ароматизированных жидкостей для электронных сигарет без никотина. Перед. Physiol. 8: 1130. DOI: 10.3389 / fphys.2017.01130

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нельсон, Дж.М., Куадра, Г. А., и Палаццоло, Д. Л. (2019). Сравнение безвкусного аэрозоля, создаваемого электронными сигаретами, и обычного сигаретного дыма на планктонном росте обычных оральных комменсальных стрептококков. Внутр. J. Environ. Res. Общественное здравоохранение 16, 5004. doi: 10.3390 / ijerph26245004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ольмедо П., Гесслер В., Танда С., Грау-Перес М., Джармул С., Ахеррера А. и др. (2018). Концентрации металлов в жидких и аэрозольных образцах электронных сигарет: вклад металлических спиралей. Environ. Перспектива здоровья. 126: 027010. DOI: 10.1289 / EHP2175

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Палаццоло, Д. Л. (2013). Электронные сигареты и вейпинг: новый вызов клинической медицине и общественному здравоохранению. Обзор литературы. Перед. Общественное здравоохранение 1:56. DOI: 10.3389 / fpubh.2013.00056

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Палаццоло, Д. Л., Кроу, А. П., Нельсон, Дж. М., и Джонсон, Р.А. (2017). Следы металлов, полученные из электронных сигарет (ECIG), образуют аэрозоль: потенциальная проблема устройств ECIG, содержащих никель. Перед. Physiol. 7: 663. DOI: 10.3389 / fphys.2016.00663

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Палмер Р. М., Уилсон Р. Ф., Хасан А. С. и Скотт Д. А. (2005). Механизмы действия факторов окружающей среды — табакокурение. J. Clin. Пародонтол. 32, 180–195. DOI: 10.1111 / j.1600-051X.2005.00786.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пушалкар, С., Пол, Б., Ли, К., Янг, Дж., Васконселос, Р., Маквана, С. и др. (2020). Аэрозоль электронных сигарет модулирует микробиом полости рта и увеличивает риск заражения. iScience 23: 100884. DOI: 10.1016 / j.isci.2020.100884

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ку, Ю., Ким, К.-Х., Шулейко, Дж. Э. (2018). Влияние ароматизатора в жидкостях для электронных сигарет на выбросы карбонильных соединений электронными сигаретами. Environ. Res. 166, 324–333. DOI: 10.1016 / j.envres.2018.06.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рикард А. Х., Кампанья С. Р. и Коленбрандер П. Э. (2008). Аутоиндуктор-2 производится в условиях потока слюны, характерных для естественных биопленок полости рта. J. Appl. Microbiol. 105, 2096–2103. DOI: 10.1111 / j.1365-2672.2008.03910.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Родригес-Рабасса, М., Лопес, П., Родригес-Сантьяго, Р., Кейз, А., Феличи, М., Санчес, Р. и др. (2018). Модуляция микробного состава слюны и уровней цитокинов курением сигарет. Внутр. J. Environ. Res. Общественное здравоохранение 15: 2479. DOI: 10.3390 / ijerph25112479

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Роджерс Дж. Д. и Сканнапеко Ф. А. (2001). RegG, гомолог CcpA, участвует в регуляции экспрессии гена связывающего амилазу белка a (abpA) у Streptococcus gordonii . J. Bacteriol. 183, 3521–3525. DOI: 10.1128 / JB.183.11.3521-3525.2001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Розан Б. и Ламонт Р. Дж. (2000). Образование зубного налета. Microbes Infect. 2, 1599–1607. DOI: 10.1016 / S1286-4579 (00) 01316-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сеймур, Дж. Дж., Форд, П. Дж., Куллинан, М. П., Лейшман, С., Ямазаки, К. (2007). Связь между инфекциями пародонта и системным заболеванием. Clin. Microbiol. Заразить. 13 (Приложение 4), 3–10. DOI: 10.1111 / j.1469-0691.2007.01798.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шах, С. А., Ганесан, С. М., Варадхарадж, С., Дабдуб, С. М., Уолтерс, Дж. Д., и Кумар, П. С. (2017). Создание негодяя: табачный дым и создание биопленок, богатых патогенами. NPJ Biofilms Microbiomes 3:26. DOI: 10.1038 / s41522-017-0033-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смит, М.(2012). «Механизмы секреции слюны», в Saliva and Oral Health, Fourth Edition , ed. Л. Хантер (Дан Тью: Стивен Хэнкокс Лимитед), 17–36.

Google Scholar

Сокрански, С.С., Хаффаджи, А.Д., Куджини, М.А., Смит, К., и Кент, Р.Л. (1998). Микробные комплексы поддесневого налета. J. Clin. Пародонтол. 25, 134–144. DOI: 10.1111 / j.1600-051X.1998.tb02419.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Солорзано-Сантос, Ф., и Миранда-Новалес, М.Г. (2012). Эфирные масла ароматических трав как противомикробные средства. Curr. Opin. Biotechnol. 23, 136–141. DOI: 10.1016 / j.copbio.2011.08.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сон, Ю., Майнелис, Г., Делнево, К., Вацковски, О. А., Швандер, С., и Менг, К. (2020). Исследование выбросов частиц электронных сигарет и отложений в дыхательных путях человека при различных условиях использования электронных сигарет. Chem. Res. Toxicol. 33, 343–352.DOI: 10.1021 / acs.chemrestox.9b00243

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Св. Хелен, Г., Лиакони, Э., Нардоне, Н., Аддо, Н., Джейкоб, П., и Беновиц, Н. Л. (2020). Сравнение системного воздействия токсичных и / или канцерогенных летучих органических соединений (ЛОС) во время курения, курения и воздержания. Cancer Prev. Res. 13, 153–162. DOI: 10.1158 / 1940-6207.CAPR-19-0356

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стивенс, В.Е. (2018). Сравнение противораковой активности испарений никотиновых продуктов, включая электронные сигареты, с токсичностью табачного дыма. Tob. Контроль 27, 10–17. DOI: 10.1136 / tobaccocontrol-2017-053808

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стюарт, К. Дж., Аухтунг, Т. А., Аджами, Н. Дж., Веласкес, К., Смит, Д. П., Гарза, Р. Д. Л. и др. (2018). Воздействие табачного дыма и паров электронных сигарет на микробиоту полости рта и кишечника человека: пилотное исследование. PeerJ 6: e4693. DOI: 10.7717 / peerj.4693

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сундар И. К., Джавед Ф., Романос Г. Э. и Рахман И. (2016). Электронные сигареты и ароматизаторы вызывают воспалительные реакции и реакции старения в эпителиальных клетках полости рта и фибробластах пародонта. Oncotarget 7, 77196–77204. DOI: 10.18632 / oncotarget.12857

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Талхаут, Р., Шульц, Т., Флорек, Э., Ван Бентем, Дж., Вестер, П., и Опперхайзен, А. (2011). Опасные соединения в табачном дыме. Внутр. J. Environ. Res. Публичный. Здоровье 8, 613–628. DOI: 10.3390 / ijerph8020613

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Телес, Ф. Р., Телес, Р. П., Узел, Н. Г., Сонг, X. К., Торресяп, Г., Сокранский, С. С. и др. (2012). Ранняя микробная последовательность в перестройке зубных биопленок в здоровье и заболеваниях пародонта: микробная последовательность в зубных биопленках. J. Periodontal Res. 47, 95–104. DOI: 10.1111 / j.1600-0765.2011.01409.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торнтон, К. С., Гринвис, М. Э., Сибли, К. Д., Паркинс, М. Д., Рабин, Х. Р. и Суретт, М. Г. (2015). Чувствительность к антибиотикам и молекулярные механизмы устойчивости к макролидам стрептококков, выделенных от взрослых пациентов с муковисцидозом. J. Med. Microbiol. 64, 1375–1386. DOI: 10.1099 / jmm.0.000172

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Турнхеер, Т., и Белибасакис, Г. Н. (2018). Streptococcus oralis поддерживает гомеостаз в биопленках полости рта, противодействуя кариесогенному патогену Streptococcus mutans . Мол. Oral Microbiol. 33, 234–239. DOI: 10.1111 / omi.12216

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Томоясу Т., Табата А., Хиросима Р., Имаки Х., Масуда С., Уилли Р. А. и др. (2010). Роль контрольного белка А катаболита в регуляции продукции интермедилизина Streptococcus intermediateus . Заражение. Иммун. 78, 4012–4021. DOI: 10.1128 / IAI.00113-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фогель, Э. А., Рамо, Д. Э., Рубинштейн, М. Л. (2018). Распространенность и корреляты частоты употребления подростками электронных сигарет и зависимости. Зависимость от наркотиков и алкоголя. 188, 109–112. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2018.03.051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, Т. В., Нефф, Л. Дж., Пак-Ли, Э., Рен, К., Каллен, К. А., и Кинг, Б. А. (2020). Использование электронных сигарет учащимися средних и старших классов — США, 2020 г. MMWR Morb. Смертный. Wkly. Rep. 69, 1310–1312. DOI: 10.15585 / mmwr.mm6937e1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yu, V., Rahimy, M., Korrapati, A., Xuan, Y., Zou, A.E., Krishnan, A.R., et al. (2016). Электронные сигареты вызывают разрывы цепей ДНК и гибель клеток независимо от никотина в клеточных линиях.