Парные статусы: Подбор статуса: парные статусы для подруг — Статусы для вконтакте, одноклассников и аськи

Статусы о любви. Часть 2 — статусы про любовь со смыслом

Лучше потерять гордость ради человека, которого любишь, чем потерять человека, которого любишь, из-за гордости.

 

Мне ничего не надо, ни цветов, ни подарков, ни пылких фраз… Я просто хочу держать тебя за руку и чувствовать твое нежное дыхание у себя на щеке.

 

Мое сердце бьется вместе с твоим… Оно слышит его трепетанье… И хоть ты никогда не будешь моим… я навсегда запомню твое дыхание…

 

Любовь не переносит тех, кто слишком долго демонстративно поворачивался к ней спиной. Любовь любит решительных и смелых, которые именно потому и не делают ошибок, что не боятся их совершать.

 

Как хочется вернуться в те времена, когда для счастья хватало лишь шоколадки..

 

Любовь — не сумма обещаний дешёвых и трёпа это когда в сердце твоём чувства минимум до гроба.

 

Любовь – это желание сделать любимого человека счастливым.

 

Любовь покруче пластического хирурга – омолаживает, освежает и меняет без скальпеля – одним прикосновением к сердцу

 

В холоде тоже есть свои плюсы. Когда тебе холодно, тебя может кто-то обнять и вы будете мерзнуть вместе)

 

Любовь, как благоухающий цветок на краю пропасти, но чтобы сорвать его, нужна смелость.

 

Когда уже нет сил для любви, есть еще силы для ревности.

 

Любовь — это то от чего ты улыбаешься, даже когда устал.

 

Любовь не значит слиться телом, душою слиться это да, но слиться телом между делом не помешает никогда.

 

Любовь, пережившая расстояние, вознаграждается вечностью

 

Я любила, я страдала, ты-дебил, а я не знала

 

Любовь к ближнему ограничена тем, насколько каждый человек любит самого себя.

 

Оно разбито… не дотрагивайся, а то поранишься…

 

Ты знаешь, котик, любовь наркотик… и от неё… растёт животик… там человечек… такая лапа… откроет глазки и скажет: «папа»!

 

Когда любишь человека все его недостатки кажутся достоинствами

 

Любовь — это такая штука, где третий лишний, но иногда этот третий может помочь первым двум разобраться в своих чувствах. ..

 

Мы пишем статус что бы увидел один человек
Но порой статус увидят многие но не тот кто нужно!

 

Любовь это когда примеряешь его фамилию, а потом слушаешь звучит или нет!

 

В душе огнем горит любовь. Когда увидимся мы снова? Когда тебя, целуя вновь, услышу нежные три слова?

 

Только тому, кому девушка разрешает дотронуться до ее волос, дозволено остаться в её сердце.

 

У человека есть две любимые игрушки: собственная судьба и чужие чувства.

 

Любовь — это эгоизм для двоих влюбленных.

 

Для любящих, как и для птиц необходимо не только гнездышко, но и небо.

 

Красивые люди не умеют любить.

 

Он для тебя только страница из жизни!
Зато ты для него вся жизнь!

 

Любовь всегда обещает несбыточное и заставляет верить в невозможное.

 

Женщина более рассудительна в делах любви, чем мужчина, потому что для неё любовь в большей степени предмет всей жизни.

 

Обними меня так сильно, как ты меня любишь! — Тебя задушить что ли?. ..

 

Нужно питать свою любовь, а не питаться ею.

 

Любовь удивительна. Она, как фальшивомонетчик, превращающий медяки в золото.

 

Сердце стучит, сердце бьётся, сердце от тоски к любви своей рвётся. Сердце страдает, сердце умирает, сердце чувствует боль, когда далеко твоя любовь.

 

Любят не за что-то….

 

Приятно понимать, что даже элементарного прикосновения к её руке он ждал всю свою жизнь.

 

Любить не грех, забыть грешно, а всех любить не суждено!

 

Сердце находится в равновесии лишь на острие бритвы

 

Любовь мешает жить, но украшает нашу жизнь.

 

Когда я на тебя смотрю, то забываю все свои печали…

 

Любите молча, цените поступки а не слова

 

Мы так долго находим, и так быстро теряем.

 

Любовь убивают две вещи: время и разочарование.

Парные статусы в ВК

Мое сердце навсегда отдано тебе. Оно бьется только в твоих руках

Ты — моя душа, ты — мое сердце

Пока мы вместе, мы сможем добиться всего

3. 4 / 5 ( 7 голосов )

Парные статусы это статусы которые пользователи социальных сетей ставят в специальное поле своего аккаунта вместе с другим пользователем. Этим они показывают, что они связанны!

Когда я с тобой, я чувствую себя прекрасно.

1 год, 365 возможностей любить тебя.

Ты — небо, я — земля. Ты — сама серьезность, я легкомысленна. Но в одном мы похожи: мы любим друг друга и не хотим расставаться

Никому тебя не отдам!

Я чувствую себя в полной безопасности, когда ты обнимаешь меня.

В твоих глазах я вижу всю красоту мира

Лучшее, за что можно держаться в жизни, — это друг за друга.

Он (она) — смысл моей жизни, радость моих дней, улыбка в моих глаза

В хорошей компании нет долгой дороги.

Наш девиз: любовь, безграничная преданность, взаимное доверие

Любовь — это когда счастье другого человека важнее вашего собственного.

Быть с тобой — это все, что я хочу.

Ты даришь мне счастье, ты — мой мир, ты — мое призвание

Идеальный брак — это всего лишь два несовершенных человека, которые отказываются отказываться друг от друга.

Мы — эхо друг друга, мы — нежность друг друга

Из-за любви к тебе каждое утро стоит вставать.

Когда мы рядом, кажется, что солнце светит ярче, даже если его не видно за облаками

Многие мои улыбки начинаются с тебя.

Ты часть меня, которая мне всегда будет нужна.

Я катастрофически люблю тебя.

У меня до сих пор появляются бабочки, хоть я и видел вас сто раз.

Мы — две детали одной головоломки. Собрать которую можем только мы сами!

Вместе мы сможем улучшить все места. Даже ад.

Каждый раз, когда я тебя вижу, я снова влюбляюсь.

Мы — два крыла. Поодиночке ничто, но вместе можем взлететь в небо и подняться выше солнц!

У каждого есть своя история любви, но я люблю нашу больше всего.

Я нашел тебя. И одновременно нашел свое счастье

Я рада, что мы с тобой — «мы».

Если бы поцелуи были снежинками, я бы послал тебе метель.

А кто-нибудь слушал одну и ту же песню полночи, просто из-за того, что она нравится ей…

Осторожности – нет

1. Я бы простила тебе любую глупость, лишь бы ты сейчас смог быть со мной…
2. Настоящая любовь полна боли: за эйфорию нужно расплачиваться.
3. Я буду рад признанию, пойму, если отвергнешь, но безразличие я терпеть не в силах.
4. То чувство, когда не можешь нарадоваться человеку, который появился в твоей жизни.
5. Любовь к парню или девушке – она особенная, она – другая.
6. А что между вами – серьёзные отношения, или просто так? Всегда поможет определить расстояние…
7. Я люблю тебя. Просто знай об этом. Я немного стесняюсь, но не хочу, чтобы было поздно.
8. Бессонные ночи, голубые глаза, и ярко раскрашенный мир. Это всё ты, моя душа.
9. С кем-то секс, а с кем-то – близость. С кем-то обычная жизнь, а с кем-то – романтика.

Статусы про день свадьбы

День свадьбы – день вероломного нападения на мою свободу.

С годами твоя вторая половинка становится просто частью тебя.

Вот и пришло время, когда нам можно было веселиться на свадьбе. Потому что теперь это наша свадьба.

Самое счастливое утро для девушки — день ее свадьбы. Вы только подумайте: проснувшись, она знает, что надеть…

Мужу запрещается забывать про главный семейный праздник — День свадьбы жены.

Будет согласие – будет и счастье! Отныне только «Мы» – не «Я», и будет крепкая семья!

Я жду не просто весны, я жду самого счастливого ее дня, дня нашей свадьбы!

С годами твоя вторая половинка становится просто частью тебя.

Пусть всё всегда будет взаимно

Открывать или скрывать свои чувства – решать только вам. Если что, то вы всегда можете воспользоваться статусами для влюблённой девушки.

1. Люблю жизнь, просто безгранично. И всё это, милый, по твоей вине.
2. То, что мы практически не разговариваем, вовсе не говорит о том, что я не люблю тебя всем сердцем.
3. Никакой судьбы нет: есть ты и я, и мы должны быть вместе!
4. Подруга не понимает, что я в тебе нашла. А я удивляюсь тому, что нашла практически всё в одном единственном человеке.
5. Влюбившись, по-другому смотришь на многие вещи. Особенно – на любимого человека.
6. С тобою я почти святая. За всё спасибо тебе, зая.
7. Твои поцелуи – особенного вкуса, твоё дыхание – особенного запаха.
8. Жаль, что я слишком горда, чтобы тебе открыться. Сделай шаг навстречу, и ты не пожалеешь!
9. Теперь о нас расползутся сплетни. Но мы слишком высоко летаем, чтобы сожалеть…
10. Безответные чувства – худшее, что могло случиться. Хорошо, что этого так и не случилось.

Прикольные статусы для влюбленных

Если бы поцелуи были снежинками, я бы послал тебе метель.
— Милый, ты меня любишь? — Ты сидишь в моей майке и жуёшь моё печенье… у тебя ещё вопросы есть?

Статусы про подруг 2021

---

Все  Смешные  Про лучшую подругу  Прикольные

Дружба — это когда ты сама отправляешь подругу на свидание, а потом весь вечер на нее злишься за то, что тебе не чем заняться.

Вечная проблема девушек в школе и институте: хочется с парнем сидеть, а подругу обидеть жалко… =)

Когда появляются парни, исчезают подруги, даже самые лучшие. .

Лучшие подруги… Не держите никогда обиду друг на друга, даже маме иногда не скажешь то, что подруге…

Я вступаю в дружбу лишь с очень немногими, но зато дорожу ею.

Друзьям ничего не нужно объяснять. Они такие же, как и мы. И всегда понимают всё без лишних объяснялок. А вот сплетники готовы нас слушать и слушать.

Лучшая подруга никогда не спросит — зачем? Она просто сходит в магазин, купит, принесёт, откроет и нальёт.

Только лучшая подруга определит что у тебя новая тушь, просто заглянув в глаза.

Ты моя подруга… мы с тобой друзья… ты такая дура пряма как и я.

Ложь и Измена. Идиотка. Корова. Подстава. Ссора. Гордость. Звонок. Новость. Сплетни. И снова Любовь. Подруги Навеки!

Только настоящая подруга сфоткает твою попу, для того чтобы ты убедилась, что она чистая!

Объявление: Ищу жену, подругу, хозяйку и любовницу. Не возражаю, если придут все четыре.

Как мало нужно для счастья… Подругу, в контакте и мандарины )

Спрашиваю подругу: Блиннн, Ксюш, ты готовилась к контрольной по истории?? А она: Ты че?? меня за дуру принимаешь?? я даже не знаю какой параграф! Мне аж на душе спокойно стало, что не я одна 2 получу. =D

Я очень люблю свою подругу. И знаю, что возможно она сейчас читает этот статус и улыбается)

А на секунду мне показалось что он любит меня, а не ту психованную бывшую подругу. Которая воспользовалась мною, что б быть с ним… Не навижу…

Я влюблена в Его друга -> его друг в мою подругу -> моя подруга в Него -> а Он в меня…

Настоящая дружба — это когда на сообщение «Я заболела» тебе в ответ приходит «Ты что, ОХРИНЕЛА?!?»

Посадила подругу на маршрутку.

ну машу ей, поцелуйчики шлю, улыбаюсь. Смотрю, мужик какой то мне из маршрутки машет. Я чуть не упала.

Самое интересное это когда ты сидишь дома смотришь в окно, видешь свою подругу гуляющею с кем-то, звонишь ей, а она тебе говорит: извини я сегодня не выйду.. мама не отпускает.. =/

Это просто ужасно, когда в лучшей подруге начинаешь видеть потенциальную соперницу…

Познакомил подругу с родителями… выдала: — «ты на папу похож, а мама у тебя красивая»

Когда-нибудь ты встретишь мою подругу и вместо обыкновенных фраз спросишь как у меня дела.

Да, я нажрался и случайно поцеловал твою подругу. -А я нажралась и случайно избила её.

Для Вконтакте

Контакт, несомненно, был создан с целью поиска новых знакомств для последующей дружбы и отношений, поэтому тема дружбы очень актуально. Статусы про подруг благодарность и теплые чувства таким родным для пользователя людям. Чаще всего такие статусы пишутся про настоящих друзей, про тех, кто дорог на самом деле.

Для Одноклассников

Существует женская дружба или нет – это вопрос, на который однозначный ответ вам никто не сможет дать. Статусы про подруг в одноклассниках могут быть написаны с лучшими побуждениями, а могут просто использоваться для самовнушения.

Для Ватсапа

В аське статусы про подруг представлены во всем своем многообразии. Кто-то подчеркивает в статусе пренебрежение по отношению к женской дружбе, ставя себе на страницу двусмысленные фразы, а кто-то, наоборот, защищает женскую дружбу, иногда делая это даже слишком активно.

Грустные статусы

• В мире есть двое слепых. .. Ты — потому что не видишь, как сильно мне нужен; и Я — потому что не вижу никого, кроме тебя.
• Выпить кофе, закурить… И забыть… Забыть, хоть на время, что такое любовь…
• Всегда, когда телефон не звонит, я знаю, что это ты.
• Абонент развалился в кресле, запивая абсентом горе… Абоненту не интересно, кто виновен был в этой ссоре… Не звоните по этому номеру, измените своё отношение… Абонент сейчас не доступен, из-за выстрела на поражение.
• Однажды я убила любовь… Теперь она вернулась и медленно убивает меня …

• У всех всё хорошо… хотя у каждого своя пропасть.
• Грусть — эмоция сильных. Для слабых есть депрессия.
• Мы молчим, когда надо кричать. Мы стоим, когда надо бежать. Мы смеемся, когда надо рыдать. И теряем людей, которых нельзя терять…
• Найди слова для своей печали, и ты полюбишь ее.
• Слёзы могут значить больше чем улыбка. .. Потому что улыбаемся мы всем подряд, а плачем только из-за тех, кого любим…

• Красивые женщины редко бывают одни, но часто бывают одиноки. (Хенрик Ягодзиньский)
• Если у тебя есть человек, которому можно рассказать сны, ты не имеешь права считать себя одиноким… (Фаина Георгиевна Раневская)
• Нет одиночества страшнее, чем одиночество в толпе… (Эдгар Аллан По)
• И Бог шагнул в пустоту. И Он поглядел вокруг и сказал — Я одинок. Сотворю себе мир. (Джонсон Дж. У.)
• У людей, живущих одиноко, всегда бывает на душе что-нибудь такое, что они охотно бы рассказали. (Чехов А.П.)

• Истинная любовь похожа на приведение: все о ней говорят, но мало кто ее видел.
• Судьба дарует нам желаемое тогда, когда мы уже научились без него обходиться. (Кароль Ижиковский)
• — Где болит? — Там, где никому не видно, — подумал я. .. (Рэй Брэдбери)
• Мы жизнью часто не довольны, и часто делаем мы то, что мстим лишь тем, которым больно… За тех, которым все равно…
• Не рассказывай никому, что ты чувствуешь. Все равно никто не почувствует это так, как ты.

• No man or woman is worth your tears, and the one who is, would not make you cry. — Ни один человек не заслуживает твоих слез, а те, кто заслуживают, не заставят тебя плакать.
• Look after my heart. I have left it with you. – Присмотри за моим сердцем. Я оставляю его с тобой.
• Having learned everyday science, I understand little by little, not many will stretch their hand, but many will substitute a leg. – Познав житейскую науку, я понимаю по немногу — немногие протянут руку, н омногие подставят ногу.
• Earth hath no sorrow that heaven cannot heal. – На земле нет такого горя, от которого не могли бы избавить небеса.
• Make your smile change the world, but don»t let the world change your smile. – Пусть твоя улыбка изменит мир, но не позволяй миру изменить твою улыбку.

• Если у человека есть настоящая любовь, то ему уже больше ничего и не требуется, но если её нет, то уже все равно, что у этого человека есть. (Джеймс Бар)
• Когда человеку кажется, что он знает любимого, как свои пять пальцев, это означает только одно — конец любви.
• Не смотри в мои глаза, они пусты. Оставь меня, слышишь, отпусти.
• Те, кого действительно ждешь, никогда не приходят. Приходят другие. (Ю. Несбё)
• Надеюсь, хоть тут, в моем сне, мы будем вместе…

• В жизни бывают минуты, когда в глазах нет слез, а в сердце — целое море.
• Жизнь на самом деле – тьма, если нет стремления. Любое стремление слепо, если нет знания. Любое знание бесполезно, если нет труда. Любой труд бесплоден, если нет любви. (Халиль Джебран)
• Когда вы достигнете конца вашей жизни, единственное, что будет иметь какое-то значение, – это та любовь, которую вы отдали и получили. (Адам Дж. Джексон)
• Жизнь можно начать с чистого листа, но сам почерк изменить гораздо сложнее.
• Блаженна жизнь пока живешь без дум. (Софокл)

• Одиночество — это когда те, кого ты любишь, счастливы без тебя.
• Так мало пройдено дорог, так много сделано ошибок… (Сергей Есенин)
• Разум бессилен перед криком сердца. (Альбер Камю)
• Время не лечит. Оно просто учит жить с болью…
• К прошлому всегда можно вернуться, только зачем?

• Все мы говорим: жизнь нас свела, жизнь нас связала, у нас один путь… А пройдет пару лет, мы встретимся на улице и даже не поздороваемся. Вот вам и жизнь…
• Иногда думаешь, что Фортуна тебе улыбнулась, а оказывается — ты ее просто насмешил.
• Большинство дней в году не запоминаются ничем. Они начинаются. Они кончаются.
• Тот, кто сказал, что время лечит все раны, солгал. Время помогает только научиться перенести удар, а потом жить с этими ранами.
• Какой-то идиот режет сейчас себе вены, пытаясь умереть, а в это время где-то ребенок умирает, который так хотел жить…

• Судьба дарует нам желаемое тогда, когда мы уже научились без него обходиться. (Кароль Ижиковский)
• Одиночество — это когда в доме есть телефон, а звонит будильник. (Фаина Георгиевна Раневская)
• Ты повзрослела. И поумнела. И погрустнела. Обычная лестница из трех ступенек. (Дмитрий Емец)
• У каждого в жизни, есть не до конца забытый им человек.
• Она умела насмешить, не выглядя смешной, как это умеют только по-настоящему печальные женщины. (Жан Фрестье)

• Сложно забыть человека, который подарил надежду…
• Сперва полыхаем, как спичка, а после жуём, что дают, безвыходность, лень и привычка
• приносят покой и уют.
• Печаль — это когда плачет твое нутро, а не твое лицо.
• Иногда люди жалуются на свою боль. Иногда они ненавидят за эту боль. Иногда они кричат от боли. А иногда им так больно, что у них нет сил ни жаловаться, ни ненавидеть, ни кричать… А со стороны говорят: «Посмотрите, как невозмутим и равнодушен этот человек».

• Одиночество вдвоём – это добровольный ад.
• Сижу и вожу по листу бумаги кисточкой – рисую любовь… Вот только почему-то тёмными красками…
• Хоть предавай меня тысячи и сотни раз. Но я никогда не забуду твоё имя.
• Я слышал многое в жизни — обещания, клятвы, но лучшее, что я слышал — тишина. В ней нет лжи.
• Хуже всего — изображать спокойствие, когда в душе тихонько сходишь с ума.

• Не грусти! Ведь каждая минута обмену и возврату не подлежит.
• Грустью можно воспользоваться, ведь она объединяет людей сильнее и быстрей, чем радость…
• Если Ваш друг грустит, задумавшись о жизни – поддержите его в этом, ведь, не дай Бог, он потом задумается о смерти!
• Иногда мне становится нестерпимо грустно, но в целом жизнь течет своим чередом. (Харуки Мураками)
• Грусть внезапно сковала моё сердце.

• Грусть означает, что человек еще жив.
• Ненависть и печаль — все принадлежит вам. Превратите свои чувства в силу и продолжайте идти вперед.
• Грустно, когда люди расстаются из-за теней собственной невнимательности…
• Опять грусть… Опять любимая грустная песня… Опять грустные мысли… Опять ты …
• Сижу и плачу. В душе тоска. И тоскую я по тебе. И эта тоска изводит меня.

• Жизнь – всего лишь долгий путь к смерти…
• А знаете, что страшно? когда твои родители живут в одной квартире, но при этом ненавидят друг друга больше всего на свете… а ты смотришь на это и ничего поделать не можешь…
• В сумраке нет разницы между отсутствием света и отсутствием тьмы.
• Обидно, что очень мало таких людей, которые возьмут и просто так напишут, без повода и причина, просто потому, что скучают.
• Он у неё в душе, а она у него в Одноклассниках!

• Жизнь уходит, как газ из зажигалки. Без огня и с вонью.
• Страх — это болезнь. От него гниешь изнутри, он вползает в душу каждого, кто поддается.
• Лучше сгореть, чем раствориться. (Курт Кобэйн)
• В минуты собственного горя радость других вызывает тошноту.
• Жизнь даёт на размышление много тем, но мало времени!

• Есть вещи, которым учителя научить не могут, этим вещам учит жизнь.
• Жизнь подобна прогулке под дождем. Наступает момент, когда все равно, что промокли ноги.
• Только потому, что кто-то не любит тебя так, как тебе хочется, не значит, что он не любит тебя всей душой.
• Иногда хочется сбежать от всех и посмотреть, кто будет искать. Но как грозно разочарование, что твоего отсутствия никто не заметил.
• Она будет улыбаться, мечтать, придумывать и обязательно станет для кого-то самой большой радостью на свете…

• Иногда кажется, что люди с печальным взглядом что-то поняли в этой жизни или прошли через ее суровые испытания и боль.
• У меня нет вредных привычек, кроме одной… Привычка ошибаться в людях… Честное слово, лучше бы курила.
• Ты похож на конец света — после тебя ничего не будет.
• На нашем лучезарном небосклоне всегда сыщется темное пятно — и это наша собственная тень.
• Иногда один телефонный звонок меняет всю ситуацию. Впрочем, и не раздавшийся телефонный звонок тоже меняет многое.

• Когда ярость не хочет быть одинокой, она берет с собой еще и грусть. Вместе они приходят к злости, которая также скрывает печаль и прячет бессилие.
• Надежда человека изнашивается. Со временем она, как и старое пальто, покрыта дырами и продувается холодным ветром реальности.
• Жизнь прекрасна даже, когда по щекам текут слезы… Но когда плачешь, то так не считаешь.
• Хуже всего чувствовать себя изможденным старцем в теле молодого человека.
• Мальчик мой, здесь дожди льют сутками. И любовь умирает причинами. Ты меня выжигай проститутками, я тебя — дорогими мужчинами…

• Сегодня жизнь в очередной раз дала мне мощного пинка под зад за мою детскую наивность, как бы намекая, чтоб знала свое место в этом злосчастном и жестоком мире.
• Слышать обидные вещи от родных людей вдвойне больно. Оттого что в глубине души знаешь: сказанное – правда.
• Жизнь у нас как в курятнике – подвинь ближнего, нагадь на нижнего.
• Хуже всего, когда хочется плакать, а нечем. Хочется высказаться, а некому.
• Жизнь уходит так быстро, как будто ей с нами неинтересно.

• Нашёл своё место в жизни, а оно занято…
• Я просто не парная какая-то, как потерянная варежка.
• Пора менять не статус, а что-то в жизни…
• Цитрусовое сердце выжато до последней апельсиновой капли.
• Всё в жизни идёт хорошо, вот только мимо.

Новые статусы для ВК

Новые статусы и цитаты



Menu Для ВатсапаАрмияНа английскомБолеюПро больПро бывшихВремена годаВеселыеПро глазаГламурныеГрустныеПро девушекДерзкиеПро детейДружбаПро женщинЖизньЗлыеКлассныеКрасивыеКрутыеПро мужа и женуЛюбовьМесяцаПро мужчинНастроениеОтдыхОтношенияПро парнейПраздникиПрикольныеПро себяСемьяСмешныеСо смысломСтервозныеСчастьеУмныеДля ИнстаграммаИз песенПро школуИз фильмовЦитаты великих людейКомплименты

Back to top

01849

Page 4 and 5: полы в мойке покрыт

Page 6 and 7: полы в рaзных уровн

Page 8 and 9: полы в хрущевке из

Page 10 and 11: полы для свиноферм

Page 12 and 13: полы и потолки диза

Page 14 and 15: полы из керaмогрaни

Page 16 and 17: полы из плитки в бaн

Page 18 and 19: полы лaминировaнные

Page 20 and 21: полы наливные + в та

Page 22 and 23: полы полимерные нaл

Page 24 and 25: полы с мраморной кр

Page 26 and 27: полы с подогревом и

Page 28 and 29: полы с покрытием ке

Page 30 and 31: полы тиги кнауф с к

Page 32 and 33: полый шнек 2, 5 мполы

Page 34 and 35: полынь гастрит с по

Page 36 and 37: полынь лечение печ

Page 38 and 39: полынья морская я с

Page 40 and 41: поль брока исследо

Page 42 and 43: поль гоген выставк

Page 44 and 45: поль и шарк турция

Page 46 and 47: поль мюссе он и она

Page 48 and 49: поль сезaнн aвтопор

Page 50 and 51: поль сезанн натюрм

Page 52 and 53:

поль элюaр стихи о в

Page 54 and 55:

пользa в похудaнии ч

Page 56 and 57:

пользa грибa чaйного

Page 58 and 59:

пользa и вред aтомны

Page 60 and 61:

пользa и вред возду

Page 62 and 63:

пользa и вред жaрено

Page 64 and 65:

пользa и вред кaкaо п

Page 66 and 67:

пользa и вред креве

Page 68 and 69:

пользa и вред медов

Page 70 and 71:

пользa и вред от aквa

Page 72 and 73:

пользa и вред от неф

Page 74 and 75:

пользa и вред петру

Page 76 and 77:

пользa и вред рисов

Page 78 and 79:

пользa и вред солен

Page 80 and 81:

пользa и вред трени

Page 82 and 83:

пользa и вред элект

Page 84 and 85:

пользa и свойствa об

Page 86 and 87:

пользa креветок в п

Page 88 and 89:

пользa моркови в жи

Page 90 and 91:

пользa от зaгaрa в со

Page 92 and 93:

пользa от рaстений с

Page 94 and 95:

пользa получения зн

Page 96 and 97:

пользa смеси орехов

Page 98 and 99:

пользa фиников в по

Page 100 and 101:

пользaвние туристи

Page 102 and 103:

польза + и вред плав

Page 104 and 105:

польза белого и чер

Page 106 and 107:

польза воды с лимон

Page 108 and 109:

польза задержка ды

Page 110 and 111:

польза и вред бегов

Page 112 and 113:

польза и вред водно

Page 114 and 115:

польза и вред долго

Page 116 and 117:

польза и вред игров

Page 118 and 119:

польза и вред кокос

Page 120 and 121:

польза и вред курин

Page 122 and 123:

польза и вред молоч

Page 124 and 125:

польза и вред ортоф

Page 126 and 127:

польза и вред от ли

Page 128 and 129:

польза и вред от хо

Page 130 and 131:

польза и вред припр

Page 132 and 133:

польза и вред свино

Page 134 and 135:

польза и вред стебл

Page 136 and 137:

польза и вред угля

Page 138 and 139:

польза и вред эвкал

Page 140 and 141:

польза и применени

Page 142 and 143:

польза клюквы с пер

Page 144 and 145:

польза льняного ма

Page 146 and 147:

польза о эакуляции

Page 148 and 149:

польза от игры в хо

Page 150 and 151:

польза от пьянства

Page 152 and 153:

польза пивных дрож

Page 154 and 155:

польза рыб в органи

Page 156 and 157:

польза сыра с белой

Page 158 and 159:

польза хозяйственн

Page 160 and 161:

пользи и вред ифрок

Page 162 and 163:

пользовaние истреб

Page 164 and 165:

пользовaние симуля

Page 166 and 167:

пользовaтели в windows

Page 168 and 169:

пользовaтели п к го

Page 170 and 171:

пользовaтель не доб

Page 172 and 173:

пользовaтельские п

Page 174 and 175:

пользовaтельский э

Page 176 and 177:

пользовaться элект

Page 178 and 179:

пользование землей

Page 180 and 181:

пользование недвиж

Page 182 and 183:

пользование участк

Page 184 and 185:

пользователи в simply

Page 186 and 187:

пользователи интер

Page 188 and 189:

пользователь excel и

Page 190 and 191:

пользователь пк ку

Page 192 and 193:

пользовательские н

Page 194 and 195:

пользовательский и

Page 196 and 197:

пользоваться вокод

Page 198 and 199:

пользуюсь с сaмого

Page 200 and 201:

полькa с нотaми для

Page 202 and 203:

полькортолон мазь

Page 204 and 205:

польскaя aрмия в дре

Page 206 and 207:

польскaя женскaя од

Page 208 and 209:

польскaя куклa aгaткa

Page 210 and 211:

польскaя мебель флa

Page 212 and 213:

польскaя общинa в г

Page 214 and 215:

польскaя прессa о ви

Page 216 and 217:

польская 3-х местна

Page 218 and 219:

польская газета об

Page 220 and 221:

польская интервенц

Page 222 and 223:

польская кукла ага

Page 224 and 225:

польская мебель ди

Page 226 and 227:

польская народная

Page 228 and 229:

польская одежда оп

Page 230 and 231:

польская проектная

Page 232 and 233:

польская экономика

Page 234 and 235:

польские банки + в у

Page 236 and 237:

польские вещи в инт

Page 238 and 239:

польские глаголы в

Page 240 and 241:

польские дисковые

Page 242 and 243:

польские земли и ро

Page 244 and 245:

польские кaрнизы оп

Page 246 and 247:

польские компании b

Page 248 and 249:

польские летние ку

Page 250 and 251:

польские музыкальн

Page 252 and 253:

польские певцы и му

Page 254 and 255:

польские пожарные

Page 256 and 257:

польские ручки кно

Page 258 and 259:

польские сексуaлны

Page 260 and 261:

польские стaдионы к

Page 262 and 263:

польские трикотаж

Page 264 and 265:

польские фильмы 80-х

Page 266 and 267:

польские цветочные

Page 268 and 269:

польский aвтобус со

Page 270 and 271:

польский водяной ф

Page 272 and 273:

польский дом + в кие

Page 274 and 275:

польский институт

Page 276 and 277:

польский культурны

Page 278 and 279:

польский педaгог я

Page 280 and 281:

польский с нуля — ау

Page 282 and 283:

польский словарь с

Page 284 and 285:

польский трикотаж

Page 286 and 287:

польский фильм огн

Page 288 and 289:

польский язык в спб

Page 290 and 291:

польско русский сл

Page 292 and 293:

польское государст

Page 294 and 295:

польское консульст

Page 296 and 297:

польское нaвесное о

Page 298 and 299:

польское посольств

Page 300 and 301:

польское прaвитель

Page 302 and 303:

польско-совецкая в

Page 304 and 305:

польське посольств

Page 306 and 307:

польто купить в мос

Page 308 and 309:

польшa в 20-30годы 20 в

Page 310 and 311:

польшa высшее обрaз

Page 312 and 313:

польшa и цены нa вещ

Page 314 and 315:

польшa отель пaртос

Page 316 and 317:

польшa сувaльскaя об

Page 318 and 319:

польша а и польша б

Page 320 and 321:

польша в послевоен

Page 322 and 323:

польша г свидница н

Page 324 and 325:

польша закон о поку

Page 326 and 327:

польша каталог газ

Page 328 and 329:

польша отношение к

Page 330 and 331:

польша сгв в ч 74858по

Page 332 and 333:

польша, геогафичес

Page 334 and 335:

полюби меня магоме

Page 336 and 337:

полюбилa я еврея бе

Page 338 and 339:

полюбить можно и зм

Page 340 and 341:

полювання на кабан

Page 342 and 343:

полюс золото и его

Page 344 and 345:

полюс холодa в доне

Page 346 and 347:

полюси кaтушки в эл

Page 348:

полюция краба в южн

Эксперты НОМ поддерживают идею обязать кандидатов на выборах сообщать о статусе иноагента — Политика

МОСКВА, 10 февраля. /ТАСС/. Ассоциация «Независимый общественный мониторинг» (НОМ) поддерживает законопроект, обязывающий кандидатов на выборные должности, получающих зарубежное финансирование, информировать избирателей о выполнении ими функций иностранного агента. Об этом говорится в докладе НОМ об эволюции избирательного законодательства в современной России, который в среду был представлен на пресс-конференции в ТАСС.

«В условиях усиливающегося давления на Россию со стороны Запада, постоянных попыток вмешательства во внутренние дела, в том числе в выборы с целью дискредитации выборов и делигитимации их результатов, необходимо предпринять все необходимые усилия для защиты избирательных прав граждан, процесса и результата выборов от воздействия извне», — говорится в докладе.

«С этой целью инициировано введение в избирательное законодательство понятий «кандидат, выполняющий функции иностранного агента», и «кандидат, аффилированный с лицом, выполняющим функции иностранного агента», в отношении кандидатов на выборные должности, получающих иностранное финансирование. Избиратели должны быть проинформированы об этом факте. Сведения об этом должны быть указаны в подписных листах, агитационных материалах, в ходе проведения агитационных мероприятий, размещены на информационных стендах и в избирательных бюллетенях», — уточняют эксперты НОМ.

Речь идет о законопроекте, который внесли в Госдуму члены комиссий Совфеда и Думы по расследованию фактов вмешательства иностранных государств во внутренние дела России. Он устанавливает, что кандидаты, получающие финансовую поддержку из-за рубежа, смогут участвовать в выборах, но обязаны информировать избирателей о выполнении ими функций иностранного агента и маркировать свою агитационную продукцию. Аналогичные нормы коснутся в том числе и кандидатов, аффилированных с лицом-иноагентом.

Согласно документу, такие кандидаты должны указывать информацию о том, что они аффилированы с лицом, выполняющим функции иностранного агента, в заявлении о согласии баллотироваться, в подписных листах, а также в выпускаемых агитационных материалах. Кроме того, эти данные также должны быть размещены на информационных стендах в помещении УИК и в избирательных бюллетенях.

Иллюстрация, показывающая 6 структурных состояний парной нуклеиновой кислоты …

Контекст 1

… статусы шести парных оснований. Обратите внимание, что A-U означает основание A, расположенное рядом с 5′-концом, в паре с его дополнительным основанием U рядом с 5′-концом. Следовательно, A-U и U-A представляют два разных состояния структуры. То же самое верно для G-C, C-G, G-U, U-G. Следовательно, у нас есть еще шесть различных структурных состояний спаренных оснований в РНК (рис. 2). На основе десяти структурных состояний, если последовательность РНК представлена ​​структурными состояниями ее n соседних нуклеотидов или так называемым «n-кортежным составом нуклеотидных оснований» [47], соответствующий вектор признаков будет содержать 10 n компонентов. как указано (ср.Рис. …

Контекст 2

… F (C i) — это свободная энергия состояния структуры Ci азотистого основания в позиции i, а F (C j) — свободная энергия структуры. статус C j азотистого основания в позиции j. Как упоминалось выше, если мы различаем азотистые основания около 5′-конца и 3′-конца, существует 6 различных структурных состояний для спаренных азотистых оснований (рис. 2). Для пар оснований A-U и U-A, поскольку они имеют 2 водородные связи, их значения свободной энергии могут быть установлены как -2 ккал / моль; для пар оснований G-C или C-G они имеют 3 водородные связи (рис.2b) и, следовательно, их значения свободной энергии были установлены как -3 ккал / моль; для пар оснований колебания G-U и U-G (рис. 2c) их значения свободной энергии были установлены как-1 …

Context 3

… в позиции j. Как упоминалось выше, если мы различаем азотистые основания около 5′-конца и 3′-конца, существует 6 различных структурных состояний для спаренных азотистых оснований (рис. 2). Для пар оснований A-U и U-A, поскольку они имеют 2 водородные связи, их значения свободной энергии могут быть установлены как -2 ккал / моль; для пар оснований G-C или C-G они имеют 3 водородные связи (рис.2b) и, следовательно, их значения свободной энергии были установлены как -3 ккал / моль; для пар оснований колебания G-U и U-G (рис. 2c) их значения свободной энергии были установлены как -1 ккал / моль; для четырех неспаренных азотистых оснований каждое значение их свободной энергии было установлено как 0 …

Контекст 4

… структурные состояния для парных азотистых оснований (рис. 2). Для пар оснований A-U и U-A, поскольку они имеют 2 водородные связи, их значения свободной энергии могут быть установлены как -2 ккал / моль; для пар оснований G-C или C-G они имеют 3 водородные связи (рис.2b) и, следовательно, их значения свободной энергии были установлены как -3 ккал / моль; для пар оснований колебания G-U и U-G (рис. 2c) их значения свободной энергии были установлены как -1 ккал / моль; для четырех неспаренных азотистых оснований каждое значение свободной энергии было установлено как 0 …

Статус — Сопряжение устройств

Из этого туториала Вы узнаете, как правильно выполнить сопряжение устройств, позволяя клиенту статуса синхронизировать контакты, общедоступные чаты и сообщения.

В настоящее время мы синхронизируем:

• ваше текущее имя ENS
• ваши открытые публичные чаты
• сообщения, которые вы отправляете в чатах
• ваши контакты

Некоторые вещи, которые мы не синхронизируем:

• сообщения, отправленные до сопряжения
• при удалении чата на устройстве B или очистке истории он не будет удален на устройстве A
• push-уведомления будут приходить только на одно устройство

Сначала вам нужно соединить и , чтобы включить ваши устройства (скажем, A и B), эта операция симметрична и должна выполняться на обоих устройствах.

Можно выполнить сопряжение максимум 3 устройств.

Инструкции

Зайдите в Профиль-> Настройки синхронизации-> Устройства.
Вам будет предложено указать имя для вашего устройства.
После того, как вы зададите имя, нажмите Рекламировать устройство на обоих устройствах.
Теперь вы должны увидеть два устройства в списках устройств.
Включите устройства на обоих.

Синхронизация старых данных

После включения устройства новая информация будет синхронизироваться.
Чтобы синхронизировать старые данные (контакты и открытые общедоступные чаты, профиль учетной записи), нажмите Синхронизировать все устройства на устройстве, на котором у вас есть данные, и они должны появиться на другом устройстве, если синхронизированы правильно.

Данные не синхронизируются

Убедитесь, что устройства правильно сопряжены и включены. Если проблема не устранена, попробуйте снова нажать Рекламировать устройство на обоих устройствах, а отключить , а снова включить . В любом случае, пожалуйста, откройте проблему на https://github.com/status-im/status-react и загрузите свой geth.log с обоих устройств (после отправки сообщения с обоих устройств A и B)

Я вижу «Нет информации» на одном устройстве

Нажмите Рекламировать устройство на другом устройстве, и Нет информации следует заменить фактическим именем устройства

Сопряжение устройств — приложения UWP

• 31.08.2020
• 5 минут на чтение

В этой статье

Важные API

Некоторым устройствам необходимо выполнить сопряжение, прежде чем их можно будет использовать.Пространство имен Windows.Devices.Enumeration поддерживает три различных способа сопряжения устройств.

• Автоматическое сопряжение
• Базовое сопряжение
• Пользовательское сопряжение

Совет Некоторые устройства не требуют сопряжения для использования. Это описано в разделе об автоматическом сопряжении.

Автоматическое сопряжение

Иногда вы хотите использовать устройство в своем приложении, но вас не волнует, сопряжено ли это устройство.Вы просто хотите иметь возможность использовать функции, связанные с устройством. Например, если ваше приложение хочет просто захватить изображение с веб-камеры, вас не обязательно интересует само устройство, а только захват изображения. Если для интересующего вас устройства доступны API-интерфейсы устройств, этот сценарий будет подпадать под автоматическое сопряжение.

В этом случае вы просто используете API-интерфейсы, связанные с устройством, выполняя вызовы по мере необходимости и доверяя системе обрабатывать любое сопряжение, которое может потребоваться.Некоторые устройства не требуют сопряжения, чтобы вы могли использовать их функции. Если устройство действительно необходимо сопрягать, то API устройства будут обрабатывать действие сопряжения за кулисами, поэтому вам не нужно интегрировать эту функциональность в свое приложение. Ваше приложение не будет знать, сопряжено ли данное устройство или должно ли оно быть сопряжено, но вы все равно сможете получить доступ к устройству и использовать его функции.

Базовое сопряжение

Базовое сопряжение — это когда ваше приложение использует Windows.Devices.Enumeration API для попытки сопряжения устройства. В этом сценарии вы позволяете Windows попытаться выполнить сопряжение и обработать его. Если необходимо какое-либо взаимодействие с пользователем, оно будет обработано Windows. Вы должны использовать базовое сопряжение, если вам нужно выполнить сопряжение с устройством, и нет соответствующего API устройства, который попытается выполнить автоматическое сопряжение. Вы просто хотите иметь возможность использовать устройство, и вам нужно сначала выполнить сопряжение с ним.

Чтобы попытаться выполнить базовое сопряжение, сначала необходимо получить объект DeviceInformation для интересующего вас устройства.Получив этот объект, вы будете взаимодействовать со свойством DeviceInformation.Pairing , которое является объектом DeviceInformationPairing . Чтобы попытаться выполнить сопряжение, просто позвоните DeviceInformationPairing.PairAsync . Вам нужно будет ждать результата , чтобы дать вашему приложению время для попытки завершить действие сопряжения. Будет возвращен результат действия сопряжения, и до тех пор, пока не будет возвращено никаких ошибок, устройство будет сопряжено.

Если вы используете базовое сопряжение, у вас также есть доступ к дополнительной информации о состоянии сопряжения устройства.Например, вы знаете статус сопряжения ( IsPaired ) и возможность сопряжения с устройством ( CanPair ). Оба они являются свойствами объекта DeviceInformationPairing . Если вы используете автоматическое сопряжение, у вас может не быть доступа к этой информации, если вы не получите соответствующие объекты DeviceInformation .

Индивидуальное сопряжение

Пользовательское сопряжение позволяет вашему приложению участвовать в процессе сопряжения. Это позволяет вашему приложению указать DevicePairingKinds , которые поддерживаются для процесса сопряжения.Вы также будете нести ответственность за создание собственного пользовательского интерфейса для взаимодействия с пользователем по мере необходимости. Используйте настраиваемое сопряжение, если вы хотите, чтобы ваше приложение немного больше влияло на процесс сопряжения или отображало ваш собственный пользовательский интерфейс сопряжения.

Чтобы реализовать настраиваемое сопряжение, вам необходимо получить объект DeviceInformation для интересующего вас устройства, как и при базовом сопряжении. Однако конкретное свойство, которое вас интересует, — это DeviceInformation.Сопряжение. Пользовательский . Это даст вам объект DeviceInformationCustomPairing . Все методы DeviceInformationCustomPairing.PairAsync требуют включения параметра DevicePairingKinds . Это указывает на действия, которые пользователю необходимо будет предпринять, чтобы попытаться выполнить сопряжение устройства. См. Справочную страницу DevicePairingKinds для получения дополнительной информации о различных типах и действиях пользователя. Как и в случае с базовым сопряжением, вам нужно будет дождаться результата, чтобы дать вашему приложению время для попытки завершить действие сопряжения.Будет возвращен результат действия сопряжения, и до тех пор, пока не будет возвращено никаких ошибок, устройство будет сопряжено.

Для поддержки настраиваемого сопряжения необходимо создать обработчик для события PairingRequested . Этот обработчик должен учитывать все различные DevicePairingKinds , которые могут использоваться в пользовательском сценарии сопряжения. Соответствующее действие будет зависеть от DevicePairingKinds , предоставленного как часть аргументов события.

Важно помнить, что настраиваемое сопряжение всегда является операцией на уровне системы. Из-за этого, когда вы работаете на рабочем столе или в Windows Phone, пользователю всегда будет показано системное диалоговое окно, когда произойдет сопряжение. Это связано с тем, что обе эти платформы обладают пользовательским интерфейсом, требующим согласия пользователя. Поскольку это диалоговое окно создается автоматически, вам не нужно создавать собственное диалоговое окно, если вы выбираете DevicePairingKinds из ConfirmOnly при работе на этих платформах.Для других DevicePairingKinds вам потребуется выполнить некоторую специальную обработку в зависимости от конкретного значения DevicePairingKinds . В образце приведены примеры того, как обрабатывать настраиваемое сопряжение для различных значений DevicePairingKinds .

Начиная с Windows 10 версии 1903, поддерживается новый DevicePairingKinds , ProvidePasswordCredential . Это значение означает, что приложение должно запросить имя пользователя и пароль у пользователя для аутентификации на сопряженном устройстве.Чтобы обработать этот случай, вызовите метод AcceptWithPasswordCredential аргументов события обработчика событий PairingRequested , чтобы принять сопряжение. Передайте PasswordCredential объект, который инкапсулирует имя пользователя и пароль в качестве параметра. Обратите внимание, что имя пользователя и пароль для удаленного устройства отличаются и часто не совпадают с учетными данными для локально вошедшего пользователя.

Отключение

Отмена сопряжения устройства актуальна только в базовом или настраиваемом сценариях сопряжения, описанных выше.Если вы используете автоматическое сопряжение, ваше приложение не обращает внимания на статус сопряжения устройства, и нет необходимости отключать его. Если вы решите разорвать пару с устройством, процесс будет идентичным независимо от того, реализуете ли вы базовое или настраиваемое сопряжение. Это потому, что нет необходимости предоставлять дополнительную информацию или взаимодействовать в процессе разрыва пары.

Первым шагом к разрыву пары с устройством является получение объекта DeviceInformation для устройства, с которым вы хотите разорвать пару. Затем вам нужно получить DeviceInformation.Свяжите свойство и позвоните DeviceInformationPairing.UnpairAsync . Как и в случае со спариванием, вам нужно дождаться результата. Будет возвращен результат действия отмены сопряжения, и до тех пор, пока не будет возвращено никаких ошибок, устройство не будет сопряжено.

Образец

Чтобы загрузить образец, показывающий, как использовать API-интерфейсы Windows.Devices.Enumeration , щелкните здесь.

Начать работу с данными с сопряженными ЦИФРАМИ

Данные с сопряженными ЦИФРАМИ действуют как копия вашего существующего номера телефона и позволяют до пяти устройств использовать один и тот же номер телефона.Существует тарифный план с низкой скоростью передачи данных для носимых устройств и тарифный план с высокой скоростью, если используется на нескольких смартфонах.

Главное вначале

Чтобы использовать данные с парными ЦИФРАМИ, убедитесь, что у вас есть следующее:

• Вторая SIM-карта или устройство со встроенной SIM-картой (eSIM), которое может звонить и отправлять текстовые сообщения через сеть T-Mobile.
• Устройство Android 6.0 / iOS 10 или более поздней версии с доступом в Интернет или Chrome или Firefox для использования ЦИФРОВ на рабочем столе (требуется микрофон и динамики).

Настройка данных с парными ЦИФРАМИ

Чтобы T-Mobile знал, какую строку копировать, вы должны соединить строку DIGITS с желаемым номером.

1. Получите T-Mobile ID, если у вас его еще нет.
2. Клиенты T-Mobile для бизнеса : Если ваш работодатель назначит вам ЦИФРЫ для использования на вашем личном устройстве, вы получите электронное письмо от своего работодателя. Перейдите по ссылке в этом электронном письме, чтобы зарегистрироваться для получения идентификатора T-Mobile ID, если у вас его еще нет.После того, как вы настроили свой T-Mobile ID, вы можете войти в систему и использовать свои ЦИФРЫ.
3. Используйте свой основной номер мобильного телефона на 5 устройствах, подключив их к порталу myDIGITS.
   • Щелкните нужные данные с парной линией ЦИФРЫ.
   • В разделе Сопряженные ЦИФРЫ выберите нужную основную линию из раскрывающегося списка и выберите Сохранить

Данные с парными ЦИФРАМИ: максимальная скорость 600 кбит / с. Ограниченное по времени предложение; могут быть изменены.Совместимое устройство и требуются качественные услуги. Требуется 1 голосовая линия Мобильного Интернета; 2 для использования DIGITS Talk & Text и парных DIGITS в одной учетной записи. Может потребоваться стартовый комплект SIM-карты за 25 долларов и загрузка приложения. Если вы не пользуетесь планом с учетом налогов, применяются дополнительные налоги и сборы; налоги / сборы ок. 6-28% от счета. Цены на тарифные планы с включенным налогом отражают скидку AutoPay; без AutoPay — еще 5 долларов за линию. До 5 номеров на устройство и до 5 устройств на номер. DIGITS поддерживает 911, но звонки и текстовые сообщения на 911 лучше всего работают со стационарного или основного мобильного телефона / номера и без использования Wi-Fi; всегда сообщайте оператору службы 911 свое фактическое местонахождение и номер для обратного звонка; на обратный вызов могут ответить другие пользователи, использующие вашу линию DIGITS. См. Условия использования DIGITS для получения дополнительной информации о службе 911.

Объединяя передовой опыт исследований и статус учреждения, обслуживающего латиноамериканцев, Калифорнийский университет в Санта-Круз запускает новые программы по продвижению образовательной справедливости

Стремясь обеспечить равенство в образовании, которое поможет привести к реальным преобразующим изменениям, Калифорнийский университет в Санта-Крус запустит ряд новых программ для поддержки успеха латиноамериканских студентов, студентов с низким доходом, первого поколения и недостаточно представленных студентов и подготовки их к успешной карьере после окончания учебы.

«Инициативы HSI сосредоточены на целях повышения качества студенческого опыта и преобразования нашей политики и практики с целью включения и сосредоточения студентов, которые были и остаются в меньшинстве в системе высшего образования», — сказала Чарис Херзон, директор HSI Initiatives. «Мы стремимся достичь целостного успеха студентов, обеспечить справедливые образовательные мероприятия и практики, ориентированные на студентов, а также создать структуры, изменения и институциональные инвестиции в качестве государственного исследовательского университета, чтобы служить лидером Калифорнийского университета и страны.”

Национальная неделя осведомленности латиноамериканских учреждений

Национальная неделя HSI посвящена празднованию и повышению осведомленности о работе и важной роли, которую HSI играют в улучшении доступа к образованию, продвижении практики справедливости и вклада в свои сообщества. Посетите веб-сайт HSI Initiatives или следите за командой в Instagram @ ucsc.hsi, чтобы узнать о программах на этой неделе, включая веб-семинары с обновлениями грантов для GANAS Career и GANAS Graduate, а также веб-семинар специально для аспирантов с нашим новым ангелом-консультантом Graduate Services Counselor Domiguez.

Руководители Калифорнийского университета в Санта-Крузе сосредоточены на создании устойчивых изменений в кампусе, которые будут полезны нынешним и будущим студентам. Лучшие руководители кампуса продолжали тесно сотрудничать с Отделом по делам студентов и успехом и его командой по инициативам латиноамериканских учреждений.

В сотрудничестве с множеством преподавателей и сотрудников по всему университетскому городку команда испаноязычных обслуживающих институтов запустит и продолжит реализацию ряда программ и услуг для поддержки студентов и аспирантов в их академической успеваемости.

Команда UC Santa Cruz HSI сосредоточена на обеспечении равных возможностей в образовании для студентов и аспирантов, а также на устранении неравенств, созданных разными семьями, экономическим положением и образовательным опытом. Преподаватели и сотрудники кампуса стремятся понять и разработать программы, которые учитывают и исправляют эти различия.

Herzon сказал, что большая часть прошлого года была потрачена на планирование новых программ, чтобы они были готовы к этому учебному году.

«Наше далеко идущее сотрудничество и партнерство, как в кампусе, так и за его пределами, сыграли решающую роль в творческом подходе к созданию наших грантовых мероприятий и их успешной реализации», — сказала Сара Санчес, директор программы GANAS Graduate Program.«Мы создаем, планируем и реализуем в партнерстве и поддержке друг друга, повышая качество и охват наших инициатив — в конечном итоге на благо успеха студентов, включая успехи аспирантов с GANAS Graduate».

Повышение справедливости в образовании на уровне бакалавриата

Четыре новые программы поддерживаются пятилетним грантом университетского городка на сумму 3 миллиона долларов США для повышения квалификации новых американских ученых (GANAS) Career Pathways, присужденным Министерством образования США в прошлом году.

В кампусе будет предложен переработанный курс математического анализа, будут предоставлены дополнительные инструкции для поддержки обучения студентов, будет введена новая программа профессиональной стажировки и будет работать с двумя отделами для выявления и устранения расовых различий.

Калифорнийский университет в Санта-Крус был сосредоточен на переработке основных курсов математики, которые были препятствием на пути к успеху студентов, особенно в связи с биологией. Кампус переводит курсы с больших лекций, чтобы вместо этого сосредоточиться на активном обучении и занятиях по решению проблем, чтобы поддержать инклюзивность и равенство. Команда HSI уже переработала Math 2, Math 3 и Math 11 A и обратит свое внимание на Math 11B летом 2022 года.

Комплексный ремонт предназначен для повышения оценок по курсу и проходных баллов, а также для сокращения разрыва в успеваемости.В математике 2, до изменения дизайна, показатели успеваемости колебались между 70-75% с разрывом между латинскими (60%) и белыми учениками (90%) более 30%. По математике 2 процент успеваемости достигает 85-90%, а пропуски сокращены вдвое. В математике 3 мы обнаружили, что учащиеся переработанного курса математики, получившие ту же оценку, что и сверстники не переработанного курса математики, получили более высокие оценки на последующих курсах STEM.

Служба поддержки обучения

будет проводить дополнительное обучение на курсах, где высокий процент студентов имеет степени D, F или рискует не сдать экзамен или отказаться от него.Высококвалифицированные лидеры студентов будут предлагать занятия в небольших группах, чтобы помочь своим сверстникам усвоить важные материалы курса.

В рамках новой программы профессиональной стажировки, ориентированной на естественные науки, технологии, инженерию и математику (STEM), студенты будут подавать заявки позднее этой осенью. Студенты будут зачислены на курс карьеры, а также будут проходить стажировку в некоммерческих и коммерческих организациях с целью помочь подготовить когорту к началу успешной карьеры после окончания учебы.

Кроме того, команда преподавателей и штатных экспертов будет сотрудничать с кафедрой лингвистики и кафедрой молекулярной, клеточной биологии и биологии развития, чтобы провести самообучение, направленное на выявление и устранение пробелов в равенстве.

Программы поддержки студентов в аспирантуре и ее окончании

Калифорнийский университет в Санта-Крузе прошлой осенью также получил грант в размере 3 миллионов долларов от Министерства образования США для поддержки аспирантов.

Грант GANAS Graduate Pathways помогает раскрыть потенциал Калифорнийского университета в Санта-Крузе как ведущего исследовательского учреждения, обслуживающего испаноязычное население, за счет обеспечения равноправия в образовании среди аспирантов. UCSC — один из нескольких десятков HSI, которые также имеют «очень высокий уровень исследований», согласно классификации высших учебных заведений Карнеги.

Новый курс, поддерживаемый грантом, поможет студентам поступить в аспирантуру и подготовиться к ней. Проект призван помочь расширить список студентов бакалавриата, которые решают получить ученую степень, и обеспечить наличие у них инструментов для достижения успеха.

Кампус также будет предлагать учебный курс по искусству для студентов и аспирантов, ориентированный на успешную карьеру в творческой экономике.

Новый консультант по выпускным программам, Анхель Домингес, предоставит комплексные консультации с опытом поддержки студентов первого поколения с исторически низкими доходами и студентов BIPOC.

Инициатива Latinx для будущих учителей (LIFT) кампуса предоставит латиноамериканским ученым, заинтересованным в преподавании, упрощенный путь к программе магистратуры в области образования и преподавания (MA / C), а также наставничество и финансовую поддержку, пока они участвуют в программе. .

Калифорнийский университет в Санта-Крус также учредил Центр письма для аспирантов VOCES, который предоставляет латиноамериканским, малообеспеченным, первоклассным и цветным студентам-выпускникам целый ряд письменных стратегий, направленных на концептуальное мышление, чтение / грамотность и различные формы обучения. писать в аспирантуре.

Команда HSI планирует запустить еще несколько проектов летом 2022 года, включая программу исследовательских возможностей для студентов из UCSC и CSU Monterey Bay; курс первого года обучения для поступающих аспирантов, изучающих литературу, чтобы познакомить их с различными видами исследований; и программа «Летний мост» для поддержки поступающих аспирантов.

Создание долговременных изменений

Herzon сказал, что гранты HSI помогают создать трансформационные изменения в Калифорнийском университете Санта-Крус, как путем создания положительных изменений в академической среде, так и путем создания новых программ, которые могут продолжаться и после срока гранта.

Сюда входят постоянные должности, такие как координатор программы Центра ресурсов Чиканкс / Латинкс, которая первоначально финансировалась за счет гранта MAPA. Этот грант закончился в сентябре 2020 года, и кампус теперь финансирует эту должность. Построение путей передачи с такими программами, как перекрестное зачисление, также планируется продолжить в этом году под руководством директора Cultivamos Excelencia, который вскоре будет нанят.

Когда студенты вернутся к очному обучению, центр STEM в Научной библиотеке станет местом, где студенты смогут найти учебные занятия EOP по консультированию и поддержке обучения.

Грант кампуса SEMILLA, грант в размере 5,7 миллиона долларов, присужденный осенью 2016 года, заканчивается в этом году. Этот грант помог латиноамериканским студентам получить научные степени STEM, а преподаватели расчистили барьеры на пути к успеху в классе и за его пределами. Финансируемые грантом программы по математике, письму, развитию карьеры и многому другому.

В кампусе продолжится реализация программы для стипендиатов SEMILLA — поддержка студентов первого курса, которые планируют получить специализацию в области STEM, путем предоставления дополнительных консультаций, помощи в ознакомлении со своей специальностью и развития чувства принадлежности.

«В целом мы добились успехов, и нам предстоит еще много работы», — сказал Херзон. «Мы добились успеха в воспитании учителей и сотрудников, заботящихся о расе и справедливости. Эти специалисты регулярно просматривают дезагрегированные данные и стремятся понять опыт наших студентов в UCSC с любопытством, уязвимостью, намерениями и способностями к действию.

«Мы рады сообщить, что наши изменения в практике и политике приносят пользу студентам латиноамериканского языка, и в нашем анализе мы обнаружили, что они приносят пользу всем студентам.Мы с нетерпением ждем реализации новых программ и сотрудничества с нашими студентами и их путешествиями в начале нового учебного года ».

Дифференциальная экспрессия летучих органических соединений в моче в зависимости от пола, репродуктивного статуса самцов и статуса пары у гривистого волка (Chrysocyon brachyurus)

Abstract

Гривистый волк ( Chrysocyon brachyurus ) — индуцированный овулятор. Хотя механизм индукции овуляции остается неизвестным, предполагается, что это химические сигналы мочи, выделяемые мужчинами.В этом исследовании оценивались летучие органические соединения (ЛОС) в еженедельных образцах мочи через 5 месяцев от 13 гривистых волков (6 интактных самцов, 1 кастрированный самец, 6 самок) с целью выявления ЛОС, которые по-разному выражаются в зависимости от пола, репродуктивного статуса и пары. положение дел. Твердофазная микроэкстракция (ТФМЭ) и газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС) использовались для извлечения и разделения ЛОС, которые были идентифицированы путем спектрального сопоставления с аутентичными стандартами, с помощью спектральных библиотек или с помощью нового программного обеспечения, которое дополнительно сопоставляет структуры молекулярных фрагментов с масс-спектральные пики.Два ЛОС присутствовали во всех 317 образцах мочи: 2,5-диметилпиразин и 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин. Пятнадцать летучих органических соединений значительно различались ( Adj , P <0,001 и | log ₂ -кратное изменение |> 2,0) между интактными самцами и самками. Используя частичный дискриминантный анализ методом наименьших квадратов, соединениями, имеющими наибольшее значение для классификации по полу, были дельта-декалактон, дельта-додекалактон и бис (пренил) сульфид. Шестьдесят два ЛОС различались у интактных и стерилизованных мужчин.Важными классифицирующими соединениями были 3-этил-2,5-диметилпиразин, 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин и тетрагидро-2-изопентил-5-пропилфуран. Некоторые летучие органические соединения, признанные здесь важными, участвуют в репродуктивной коммуникации у других млекопитающих. Это исследование является наиболее надежным исследованием дифференциальной экспрессии у гривистого волка на сегодняшний день и обеспечивает наиболее полный анализ летучих органических соединений в моче гривистого волка на сегодняшний день, значительно увеличивая размер выборки по сравнению с предыдущими исследованиями химической коммуникации у этого вида.Новое программное обеспечение для анализа данных позволило идентифицировать соединения в мевалонатном пути выработки гормонов, о которых ранее не сообщалось в моче гривистого волка. Несколько предполагаемых семиохимических веществ были идентифицированы как хорошие кандидаты для поведенческих биотестов, чтобы определить их роль в воспроизводстве гривистых волков и, в частности, в индукции овуляции.

Образец цитирования: Jones MK, Huff TB, Freeman EW, Songsasen N (2021) Дифференциальная экспрессия летучих органических соединений в моче в зависимости от пола, репродуктивного статуса самцов и статуса пары у гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ).PLoS ONE 16 (8): e0256388. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0256388

Редактор: Balasubramanian Senthilkumaran, Хайдарабадский университет, ИНДИЯ

Поступила: 22 октября 2020 г .; Принята к печати: 5 августа 2021 г .; Опубликовано: 20 августа 2021 г.

Это статья в открытом доступе, свободная от всех авторских прав, и ее можно свободно воспроизводить, распространять, передавать, изменять, строить или иным образом использовать в любых законных целях.Работа сделана доступной по лицензии Creative Commons CC0 как общественное достояние.

Доступность данных: Обработанные данные о площади пиков ЛОС доступны на Figshare по адресу https://doi.org/10.6084/m9.figshare.13132892.v1.

Финансирование: Финансовая поддержка MKJ выражается с благодарностью со стороны Плана выживания видов гривистых волков, гранта на завершение диссертации проректора Университета Джорджа Мейсона, стипендии для получения докторской степени Смитсоновского института и стипендии для аспирантов Университета Джорджа Мейсона.Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Гривистый волк ( Chrysocyon brachyurus ) является уникальным представителем Canidae (семейство собак), эндемичным для тропических лугов Южной Америки [1]. Этот вид занесен в Красный список МСОП как «находящийся под угрозой исчезновения» с предполагаемой дикой популяцией в 17 000 особей [2] и популяцией <100 в зоологических учреждениях Северной Америки.Гривистый волк имеет большой ареал обитания [3–5] и в основном ведет одиночный образ жизни [3–5]. Особи основного репродуктивного возраста - от 3 до 8 лет, с редкими случаями успешных родов до 12 лет [6]. Как и другие дикие псовые, гривистый волк подходит к размножению только один раз в год, продолжительностью 1–10 дней [7–10]. Однако из-за одиночной природы гривистого волка он приобрел важную адаптацию, обеспечивающую репродуктивный успех. Большинство изученных на сегодняшний день видов псовых являются спонтанными овуляторами, что означает, что самке не требуется сигнал, вызывающий овуляцию: домашняя собака ( Canis ownis ) [11–13], серый волк ( Canis lupus ) [14, 15], красный волк ( Canis rufus ) [16], койот ( Canis latrans ) [17], африканская дикая собака ( Lycaon pictus ) [18, 19], кустарниковая собака ( Speothos venaticus ) [20], рыжая лисица ( Vulpes vulpes ) [21, 22] и песец ( Alopex lagopus ) [23].Интересно, что у самок гривистых волков овуляция происходит только в присутствии самца [7, 24–26]. Поскольку гривистый волк ведет одиночный образ жизни, такая адаптация повысит вероятность успешного годового эстрального цикла. На данный момент единственным другим видом псовых, предположительно демонстрирующим индуцированную овуляцию, является лисица с Нормандского острова ( Urocyon littoralis ) [27], хотя другие виды собак еще не исследованы по этому признаку.

Для североамериканской популяции гривистых волков пик размножения приходится на ноябрь [28].Самки гривистых волков, содержащиеся без самцов, показывают исходный уровень прогестерона в течение всего сезона размножения, что указывает на отсутствие овуляции [7, 24–26]. Пара гривистых волков совокуплялась вскоре после того, как была повторно представлена ​​за пределами типичного осеннего сезона размножения, и родила более чем через два месяца после сезона родов [10], что позволяет предположить, что присутствие самца сильно влияет на время овуляции. Кроме того, овулировала самка, проживающая отдельно, но разделяющая линию забора [25]. В этом случае самка имела визуальный доступ к самцу, а также возможность соприкасаться с его следами запаха мочи, нанесенными на общую линию забора.В том же репродуктивном сезоне несколько других самок, содержавшихся в том же учреждении, только с визуальным контактом с самцами, не смогли овулировать [25], что позволяет предположить, что зрительного стимула недостаточно, и в основе этого явления лежит обонятельный механизм с участием мочи. У хищников свидетельства обонятельных сигналов, вызывающих течку и овуляцию, гораздо менее распространены, чем у других таксонов [29–32]. Похоже, что у кустарниковой собаки, ближайшего живого существа по сравнению с гривистым волком, есть мужской эффект, где присутствие взрослого самца уменьшает межэструсный интервал у самок [20].Однако, насколько нам известно, соединения и механизмы, ответственные за этот эффект у хищников, остаются полностью неисследованными. Настоящее исследование начинает восполнять этот пробел. У грызунов и сумчатых химические стимулы могут влиять на воспроизводство, всасываясь в вомероназальный орган, у которого есть нейроны, оканчивающиеся в нескольких ядрах, связанных с высвобождением гонадолиберина в гипоталамусе [33–35], так что, возможно, здесь действует аналогичный механизм.

Химическая коммуникация играет важную роль в поведении млекопитающих и репродуктивных процессах для многих видов [36, 37].У Canidae моча считается более важным источником передачи сигналов запаха, чем фекалии [38–41]. Мечение запаха мочи, но не дефекация, увеличивается во время сезона размножения у некоторых видов собак, включая гривистого волка [8, 38, 39, 41–46]. Моча гривистого волка имеет очень характерный резкий запах с запахом, который остается заметным для человека в течение нескольких недель [3, 47]. Скорость запаховой маркировки у самцов и самок гривистых волков не различается [9]. Однако частота маркировки запаха мочи у мужчин варьируется в течение репродуктивного цикла женщины; с самой высокой частотой во время проэструса по сравнению с другими стадиями репродуктивного цикла и более высокой частотой у самцов, которые успешно размножаются, по сравнению с неудачными особями [8].Точно так же самки, которые размножаются и производят щенков, отмечают запах значительно больше, чем те, которые не размножаются [8].

В пределах Canidae летучие органические соединения в моче были охарактеризованы для красной лисы [48–50], койота [51, 52], домашней собаки [53–55], серого волка [56, 57], африканской дикой собаки [39, 40] , и гривистый волк [47, 58], хотя дифференциальный анализ, приписывающий предполагаемый семиохимический статус определенным соединениям, был изучен только на сером волке, социальном виде. Это исследование является первым надежным дифференциальным анализом летучих органических соединений в моче одиночных собак, который зависит от химической связи для репродуктивного успеха.Предыдущие анализы мочи гривистого волка показали, что серосодержащие гемитерпеноиды, гемитерпеноидные спирты и азотсодержащие пиразины являются основными компонентами, влияющими на запах мочи этого вида [47]. Несмотря на то, что в моче нескольких собак содержится восстановленное соединение серы, 3-метил-1-метилтиобут-3-ен, в моче гривистого волка это соединение не обнаружено. Вместо этого изомер, метил пренилсульфид, является одним из наиболее распространенных летучих органических соединений (ЛОС) в моче у этого вида [47], что является дополнительным подтверждением того, что летучие органические соединения с мочой уникальны для каждого вида.Фактически, в моче гривистых волков преобладают несколько гемитерпеноидных соединений, таких как геранилнитрил и метилпренилсульфид, которые, как считается, синтезируются мевалонатным путем [47]. Предыдущие исследования также показали, что некоторые соединения пиразина часто встречаются в образцах мочи гривистого волка [47, 58]. Для серого волка составы мочевого пузыря различаются в зависимости от пола донора и сезона [56]. Кроме того, введение тестостерона кастрированным самцам серых волков вызывает выработку летучих органических соединений с мочой, обычно связанных с интактными самцами [57], подтверждая идею о том, что соединения с мочой коррелируют с репродуктивными гормонами и, таким образом, отражают репродуктивный статус.

Это исследование является первым исследованием, в котором анализируется дифференциальная экспрессия ЛОС в моче гривистого волка по полу, репродуктивному статусу самцов (неповрежденный или кастрированный) и по статусу пары внутри каждого пола. Основная цель состояла в том, чтобы идентифицировать предполагаемые семиохимические соединения, ответственные за химическую коммуникацию, касающуюся воспроизводства, что имеет решающее значение для репродуктивного успеха этого одиночного вида. С 3-кратным увеличением размера выборки по сравнению с нашей предыдущей работой [59] и с 10-кратным увеличением размера выборки по сравнению с другими предыдущими исследованиями в этой области [47, 58], мы описываем обильные ЛОС в моче гривистого волка и идентифицируем несколько пренилов. соединения, еще не идентифицированные в моче гривистого волка.Эта работа закладывает основу для классификации соединений, ответственных за индукцию овуляции у гривистого волка, чтобы лучше понять этот уникальный репродуктивный механизм у Canidae.

Материалы и методы

Животные

Процедуры сбора образцов

были представлены Комитету по институциональному уходу и использованию животных Смитсоновского национального зоопарка и Института биологии сохранения и Университета Джорджа Мейсона, но были признаны освобожденными от полного рассмотрения из-за неинвазивного характера сбора образцов мочи.В исследовании приняли участие восемнадцать гривеных волков, но пять не предоставили регулярные пробы и были исключены из анализа. Таким образом, тринадцать гривистых волков (семь самцов, шесть самок) (таблица 1) были отобраны для этого исследования с 1 августа 2014 г. по 31 декабря 2014 г., в период пика сезона размножения в ноябре. Это составляет более 15% населения Северной Америки и является самой большой выборкой для этого вида на сегодняшний день. Персонал по уходу за животными не смог приписать образцы от братьев SB № 3192 и SB № 3195 одному конкретному волку, поэтому каждый образец мочи был взят от одного или потенциально обоих братьев.Таким образом, эти братья рассматривались как один волк для анализов. Все остальные образцы были взяты только от одного известного гривистого волка и не были отмечены другими особями, размещенными в том же вольере.

Все животные были размещены в соответствии с рекомендациями Плана выживания видов в открытом вольере с выходом в закрытое помещение [6, 10]. Из шести самок, включенных в исследование, трое не были спарены с самцом (непарным) (SB № 3231, SB № 3232, SB № 2845), две были спарены с самцом (SB № 3184, SB № 2945) и одна была исключена из парного / непарного анализа (SB № 2536), потому что, хотя она была размещена с мужчиной, он был кастрирован.Из семи самцов четверо были классифицированы как непарные (SB № 3192, SB № 3195, SB № 2810, SB № 3206), двое были парными (SB № 2844, SB № 2660) и один кастрированный самец (SB № 3014). был исключен из парного / непарного анализа. Кастрированный мужчина (SB № 3014) был полностью кастрирован в качестве стандартного лечения врожденного одностороннего крипторхизма. Процедура была завершена, когда пациенту исполнилось 10 месяцев в октябре 2007 года, за несколько лет до начала этого исследования. В данном исследовании процедура не проводилась, но дала прекрасную возможность сравнить ЛОС в моче этого человека, не продуцирующего тестостерон, с ЛОС, продуцируемыми интактными мужчинами.

Поскольку популяция гривистых волков в Северной Америке централизованно управляется Планом выживания видов [6], все волки получали одну и ту же диету — гривистый волчий корм (Mazuri, Land O’Lakes, Inc., Ричмонд, Индиана) с добавлением сезонных фруктов. и целые предметы добычи (мыши, морские свинки, рыба). Диета влияет на содержание летучих органических соединений в моче [60, 61], но поскольку все люди придерживались одинаковой диеты, это не является проблемой для настоящего исследования. Вода была доступна ad libitum . Образцы мочи (2–15 мл) собирали условно 1–2 раза в неделю.Образцы обычно собирали в течение нескольких минут после удаления (но до восьми часов после) из вымытого (только водой) поддона для сбора мочи из нержавеющей стали, подвешенного на заборе или положенного на землю. В редких случаях образцы отбирали пипеткой с бетонного пола в логове сразу после удаления. Поскольку анализы в настоящем исследовании нацелены на ЛОС, растворимые в моче, и основаны на наличии / отсутствии и относительном содержании ЛОС, влияние образцов разного возраста должно быть незначительным.Образцы переносили в полипропиленовые центрифужные пробирки (Corning, Inc., Тьюксбери, Массачусетс) и замораживали при -20 ° C сразу после сбора до обработки, которая проводилась с марта по октябрь 2015 г.

Всего было собрано и использовано для анализа 317 проб мочи. Это соответствует в среднем 26,42 ± 7,00 (стандартное отклонение) образцов на человека.

Подготовка проб и ГХ-МС

Подготовка и анализ образцов подробно описаны ранее [59]. Вкратце, каждый образец мочи анализировали в трех экземплярах; три аликвоты по 1 мл были внесены пипеткой в ​​10 мл чистые стеклянные флаконы с чистым стеклом вместе с хлоридом натрия степени чистоты ACS до насыщения и 153 нг нафталина-d8 в качестве внутреннего стандарта для нормализации площадей пиков между образцами.

Образцы были проанализированы методом твердофазной микроэкстракции (SPME) в газовом хроматографе-масс-спектрометре 7890A-5975C (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния), оборудованном роботизированной системой подготовки и ввода проб CombiPAL (Autosampler Guys, Александрия, Вирджиния). . CombiPAL нагревает и перемешивает образец при 37 ° C в течение 30 минут, чтобы уравновесить образец с свободным пространством, затем в течение 45 минут, чтобы уравновесить свободное пространство с помощью 1 см 50/30 мкм дивинилбензол-карбоксен-поли (диметилсилоксана) (DVB / CAR / PDMS) стабильно-гибкое волокно SPME (Sigma-Aldrich, St.Луис, Миссури). Волокно SPME и колонка нагревали до максимальной температуры между образцами для предотвращения уноса. Управление прибором и системой автосэмплера осуществлялось с помощью программного обеспечения MSD Chemstation версии E.02.02 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния). Хроматографическое разделение осуществляли с использованием колонки SUPELCOWAX 10 длиной 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм и пленкой 0,25 мкм (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури). Масс-спектрометр работал в режиме полного сканирования с диапазоном от 40 до 350 m / z.

Сбор и группировка пиков

Файлы необработанных данных в MassHunter.Формат D были преобразованы в формат.mzXML для этапов обработки данных с помощью инструмента MSConvert ProteoWizard [62]. Файлы из копий каждого образца обрабатывались вместе с помощью пакета xcms R [63] с использованием R ver 3.6.1. Пакет xcms содержит функции для идентификации ионных пиков, группировки одних и тех же ионных пиков в репликах, коррекции дрейфа времени удерживания с помощью алгоритма Обиварпа [64], а затем использования скорректированного времени удерживания для перегруппировки ионных пиков в репликах. Затем были заполнены отсутствующие пики ионов.Затем алгоритм деконволюции в пакете камеры R [65] распределял пики ионов в соединения. Ионы с одинаковыми формами пиков при одинаковом времени удерживания были отнесены к одной и той же группе для создания соединения, состоящего из составляющих ионов. Этот конвейер анализа данных с открытым исходным кодом является надежным, бесплатным и легкодоступным, позволяя анализировать сотни или тысячи образцов, содержащих миллионы ионных пиков, на персональном компьютере. Таким образом, этот же конвейер анализа данных можно легко распространить на другие виды или области исследования ЛОС.Затем площади пиков ионов усредняли по трем повторам каждого образца, создавая одно среднее значение на образец мочи для каждого иона. Внутри каждой группы соединений сохранялась только площадь пика количественного иона (иона с наибольшей средней площадью). Это значение отражает содержание ЛОС в этом образце.

Нормализация и масштабирование

Обработанные данные были проанализированы с использованием веб-платформы MetaboAnalyst ver. 4.0 [66]. Количественные пики ионов были выровнены по образцам (допуск m / z = 0.25, допуск RT = 1 с). Отсутствующие данные (т.е. ЛОС, которые не были обнаружены в данном образце) были заменены низким значением площади пика, равным 1/5 минимального наблюдаемого значения в общем наборе данных [67]. Необработанные содержания ЛОС были нормализованы к содержанию внутреннего стандарта с использованием нормализации вероятностного частного [68], а затем обобщенного логарифмического преобразования [69] и масштабирования по Парето [70] перед статистическим анализом.

Обильные летучие органические соединения

Наличие / отсутствие и содержание сырых ЛОС были проанализированы, чтобы определить, какие ЛОС были обнаружены наиболее часто и в наибольшем количестве в 317 пробах.Для каждой группы (самцы, самки, кастрированные самцы) рассчитывались среднее значение и стандартное отклонение необработанной численности, а также процент образцов в группе, показавших ЛОС. Сообщается о десяти наиболее распространенных ЛОС, присутствующих не менее чем в 70% проб этой группы.

Статистический анализ и классификация

Чтобы определить, какие ЛОС были выражены по-разному, нормализованное, преобразованное и масштабированное содержание каждого ЛОС сравнивали по группам с использованием t-критериев независимых выборок.Были проведены сравнения: самец с самкой, интактный самец с кастрированным, парный и непарный самцы и самки. Необработанные значения P были скорректированы для множественного тестирования на основе частоты ложных обнаружений (FDR) и считались значимыми при скорректированном FDR P -значении <0,001. Затем было рассчитано log ₂ -кратное изменение, сравнивая нормализованное, преобразованное и масштабированное содержание каждого ЛОС по группам, чтобы понять величину различия. ЛОС с абсолютным значением логарифма ₂ -кратное изменение> 2.0 считались значимыми. Для ЛОС, отвечающих критериям значимости, данные представлены как среднее ± стандартное отклонение нормализованного, преобразованного и масштабированного содержания каждого ЛОС.

Дискриминантный анализ методом частичных наименьших квадратов (PLS-DA) был использован для определения того, способствовали ли наблюдаемые ЛОС классификации образцов как происходящих из разных групп. PLS-DA — это контролируемый подход, который использует количество каждого ЛОС для максимального разделения между различными группами по нескольким первым параметрам (скрытые переменные) [71, 72].Эти скрытые переменные ранжируются по тому, насколько хорошо они объясняют дисперсию групп. Для проверки моделей был рассчитан параметр Q ² как мера способности предсказания класса с использованием 10-кратной перекрестной проверки [73, 74]. Затем значение Q ² сравнивали с распределением значений Q ² , полученных из моделей тех же данных с использованием случайных перестановок групповых меток. Таким образом, с помощью 1000 перестановочных тестов была получена статистическая значимость (значение P ) данной классификационной модели [73, 74].

Чтобы определить, какие ЛОС были наиболее ответственны за классификацию, для каждого ЛОС была рассчитана переменная значимость в прогнозе (VIP) [75, 76]. ЛОС с более высоким VIP вносят больший вклад в модель классификации PLS-DA. VIP рассчитывается как взвешенная сумма квадратов корреляций между латентными переменными PLS-DA и исходной переменной [75, 76]. Веса соответствуют проценту вариации, объясняемой скрытой переменной PLS-DA в модели. Это исследование является первым применением надежных статистических данных к химической коммуникации гривистых волков, и эти методы могут служить примером для будущих семиохимических исследований других видов.

Идентификация летучих органических соединений

Дифференциально экспрессируемые ЛОС были идентифицированы путем сопоставления экспериментальных спектров со спектрами известных аутентичных стандартов, если таковые имеются. Когда подлинные стандарты были недоступны или их было невозможно получить, соединения были идентифицированы путем экспорта деконволюции спектров из программного обеспечения Автоматизированной системы масс-спектральной деконволюции и идентификации (AMDIS, версия 2.73) в NIST MS Search (версия 2.3) и поиск по Wiley Registry 11 ^th Edition / NIST 2017 объединенная масс-спектральная библиотека (John Wiley and Sons, Inc., Хобокен, штат Нью-Джерси; Национальный институт стандартов и технологий, Гейтерсбург, Мэриленд). Когда соответствие библиотеки было неоднозначным, вероятные структуры ЛОС были нарисованы в ACD-ChemSketch (версия 14.01) и экспортированы в NIST MS Interpreter (версия 3.4b), где масс-спектральные пики и нейтральные потери были сопоставлены с фрагментами структуры. Когда были учтены все основные спектральные пики, ACD-ChemSketch создала нотации SMILES и провела поиск в онлайн-базе данных PubChem NIH на предмет наименования. Соединения, которые не могли быть идентифицированы с помощью этого процесса, были помечены как «неизвестные» с указанием количества иона и времени удерживания.В семи случаях соединения были идентифицированы как загрязнители (утечка из колонки или пластификаторы) и были исключены из дальнейшего анализа.

Результаты

Обильные летучие органические соединения

Всего в 317 образцах мочи было выровнено 113 пиков, каждый из которых представляет ЛОС. В 100% проб были обнаружены два ЛОС: 2,5-диметилпиразин и 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин. В пробах самцов гривистых волков (n = 6 особей, 141 проба) наиболее распространенными ЛОС были 2,5-диметилпиразин, 2-метил-6- (1-пропенил) пиразин и 2-этенил-6-метил- пиразин.В образцах самок гривистого волка (n = 6 особей, 161 образец) наиболее распространенными ЛОС были 2,5-диметилпиразин, 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин и 3-этил-2,5-диметил. пиразин. Кастрированный самец (n = 1 особь, n = 15 выборок) показал гораздо более низкую среднюю необработанную численность в целом. У этого человека наиболее распространенными ЛОС были 2,5-диметилпиразин, 4-гептанон и 2-этенил-6-метилпиразин (таблица 2).

Различия между ЛОС в моче у мужчин и женщин

После процедур отбора и группирования пиков 76 пиков, каждый из которых представляет ЛОС, были проанализированы на предмет дифференциальной экспрессии между мужчинами (n = 6 человек, 141 образец) и женщинами (n = 6 человек, 161 образец).Было обнаружено, что пятнадцать летучих органических соединений в моче значительно различаются ( Adj , P <0,001 и | log ₂ -кратное изменение |> 2,0) между мужчинами и женщинами (Таблица 3). Из них двенадцать ЛОС были выше в количестве у мужчин, чем у женщин, а остальные три показали более высокое содержание у женщин, чем у мужчин. В PLS-DA 76 ЛОС были сокращены до пяти латентных переменных PLS с хорошей способностью различать мужчин и женщин (Q ² = 0,90, перестановка P <0.001) (рис. 1А). Первая скрытая переменная составляет 13,9% объясненной дисперсии и связана с половыми различиями. Соединения, которых было больше в женской моче, имели отрицательную нагрузку, в то время как соединения, которых было больше в мужской моче, имели положительную нагрузку. Наибольшее влияние на классификацию оказали соединения: дельта-декалактон, дельта-додекалактон, бис (пренил) сульфид, пренилбромид и изопрениловый спирт (рис. 1B).

Рис. 1. Классификация образцов мочи мужчин и женщин на основе содержания 76 ЛОС.

(a) Баллы по первым двум скрытым переменным из частичного дискриминантного анализа методом наименьших квадратов показаны для женских выборок (n = 161) серыми кружками и мужских выборок (n = 141) в черных треугольниках. Дисперсия, объясняемая каждой скрытой переменной, показана в скобках. (b) Переменное влияние на оценки проекции (VIP) на скрытую переменную 1 методом наименьших квадратов показано для 15 ЛОС со статистически значимой дифференциальной экспрессией. Прямоугольники справа показывают логарифм ₂ -кратное изменение содержания каждого ЛОС в образцах самцов (n = 141) по сравнению с образцами самок (n = 161).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0256388.g001

Различия между ЛОС в моче интактных и стерилизованных мужчин

После процедур отбора и группирования пиков 98 пиков, каждый из которых представляет ЛОС, были проанализированы на предмет дифференциальной экспрессии между интактными самцами (n = 6 человек, 141 образец) и кастрированным самцом (n = 1 человек, 15 образцов). Было обнаружено, что из этих 98 пиков 62 ЛОС в моче значительно различались ( Adj . P <0.001 и | log ₂ -кратное изменение | > 2,0) между интактным самцом и кастрированным самцом (таблица 4). Из них 26 ЛОС были выше в количестве у интактных самцов, чем у кастрированных, а остальные 36 показали более высокое содержание в образцах стерилизованных самцов, чем в образцах интактных самцов. 98 ЛОС были сокращены до пяти латентных переменных PLS с хорошей способностью различать интактных самцов и кастрированных самцов (Q ² = 0,93, заменено P <0,001) (рис. 2A). Первая скрытая переменная, составляющая 22.9% объясненной дисперсии, относящейся к разнице между интактными самцами и кастрированными особями. Соединения, которых было больше в образцах мочи кастрированного мужчины, имели отрицательные нагрузки, в то время как соединения, которых было больше в моче интактных самцов, имели положительные нагрузки. Наибольший вклад в классификацию внесли следующие соединения: 3-этил-2,5-диметилпиразин, 2-метил-6- (1-пропенил) пиразин, тетрагидро-2-изопентил-5-пропилфуран, пренол и пренилбромид ( Рис 2B).Из десяти соединений с наибольшим вкладом в классификацию девять были значительно более распространены в моче интактных мужчин.

Рис. 2. ЛОС с наибольшей переменной важностью при классификации образцов мочи интактных и стерилизованных мужчин.

(a) Баллы по первым двум латентным переменным из частичного дискриминантного анализа методом наименьших квадратов показаны для стерилизованных образцов самцов (n = 15) серыми кружками и интактных образцов самцов (n = 141) в черных треугольниках. Дисперсия, объясняемая каждой скрытой переменной, показана в скобках.(b) Переменное влияние на оценки проекции (VIP) на скрытую переменную 1 методом наименьших квадратов показано для 15 ЛОС со статистически значимой дифференциальной экспрессией и наивысшим VIP. Прямоугольники справа показывают логарифм ₂ -кратное изменение содержания каждого ЛОС в образцах интактных самцов (n = 141) по сравнению с образцами кастрированных самцов (n = 15).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0256388.g002

Различия между парными и непарными особями

летучих органических соединений от самцов, спарившихся с размножающимся партнером (SB # 2660 и SB # 2844) (n = 44 образца), сравнивали с таковыми у самцов, содержащихся без племенного партнера (SB # 3206, SB # 3192, SB # 3195, SB # 2810) (n = 97 образцов).После процедур отбора и группирования пиков 73 пика, каждый из которых представлял ЛОС, были проанализированы на предмет дифференциальной экспрессии. Из этих 73 пиков четыре ЛОС в моче различались ( Adj . P <0,001 и | log ₂ -кратное изменение |> 2,0) у парных и непарных мужчин: дельта-додекалактон, 1- (5-метил-2 -пиразинил) -1-этанон, метиловый эфир бензойной кислоты и бис (пренил) сульфид (таблица S1). Из них двух ЛОС было больше у парных самцов, чем у непарных самцов (метиловый эфир бензойной кислоты и бис (пренил) сульфид), а два других показали более высокое содержание в непарных выборках самцов, чем у парных самцов (дельта-додекалактон и 1- (5-метил-2-пиразинил) -1-этанон).73 ЛОС были сокращены до пяти латентных переменных PLS, которые имели более низкую способность распознавания, чем другие анализы (Q ² = 0,57, перестановка P <0,001), демонстрируя, что эти две группы не были так легко различимы, как мужчины и женщины или интактные и кастрированные самцы.

Парных самок (SB № 2945 и SB № 3184) (n = 41 образец) сравнивали с непарными самками (SB № 3231, SB № 3232, SB № 2845) (n = 96 образцов). После процедур отбора и группирования пиков 78 пиков, каждый из которых представляет ЛОС, были проанализированы на предмет дифференциальной экспрессии.Из этих 78 пиков четыре ЛОС в моче различались между двумя группами ( Adj . P <0,001 и | log ₂ -кратное изменение |> 2,0): 1-гексанол, 1-октен-3-ол, бензил метилкетон и 3-этил-2,5-диметил-пиразин (таблица S2). Из них всех четырех ЛОС было больше у непарных самок, чем у парных самок. 78 ЛОС были сокращены до пяти латентных переменных PLS (Q ² = 0,76, переставлено P <0,001).

Обсуждение

Это исследование представляет собой наиболее полный на сегодняшний день анализ ЛОС в моче гривистого волка и является первым исследованием, посвященным дифференциальному выражению ЛОС в моче гривистого волка по полу, репродуктивному статусу самцов (интактный или кастрированный) и статусу пары.Благодаря использованию программного обеспечения для сопоставления химической структуры несколько гемитерпеноидных соединений, происходящих из мевалонатного пути, были точно идентифицированы. Два ЛОС были обнаружены во всех 317 образцах: 2,5-диметилпиразин и 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин. Пятнадцать летучих органических соединений значительно различались между мужчинами и женщинами, в то время как 62 летучих органических соединения различались между интактными мужчинами и кастрированными мужчинами. Некоторые летучие органические соединения, признанные здесь важными, участвуют в репродуктивной коммуникации у других млекопитающих. Основываясь на их дифференциальной экспрессии, несколько предполагаемых семиохимических веществ были идентифицированы как хорошие кандидаты для поведенческих биоанализов, в частности, дельта-декалактон и дельта-додекалактон.

Имеются убедительные доказательства того, что ЛОС в моче гривистых волков значительно различаются в зависимости от пола, причем самцы производят более высокие концентрации многих ЛОС. Из 15 летучих органических соединений, различающихся по полу, у мужчин 12 было больше, чем у женщин. Это подтверждает данные на грызунах [77] и приматах [78, 79], что самцы обычно производят больший репертуар и интенсивность запахов, возможно, играя роль в защите территории. Хотя есть несколько видов, которые не соответствуют этой тенденции (например, тамарин хлопковый, Sanguinus oedipus ) [79], этот эффект, вероятно, связан с предвзятым половым диморфизмом самцов в количестве и размере желез [78 , 79].

ЛОС, которые были наиболее сильными индикаторами пола, — это дельта-декалактон, дельта-додекалактон, бис (пренил) сульфид, пренилбромид и изопрениловый спирт. Все эти пять летучих органических соединений были выше по относительному содержанию у мужчин, а дельта-декалактон и бис (пренил) сульфид различались по статусу спаривания. Дельта-декалактон и дельта-додекалактон имеют сладкий кокосовый запах [80, 81] и являются основными компонентами запаха в секрете предупреждения игл дикобраза ( Erethizon dorsatum ) [82] и в маркировочной жидкости самца бенгальского тигра. ( Panthera tigris ) [83].Ссылки в литературе на бис (пренил) сульфид и пренилбромид в качестве соединений, передающих запах, у других видов не были обнаружены, однако бис (пренил) сульфид может быть результатом пренилирования белков, содержащих концевые сульфиды [84], а пренилбромид образует метилпенилсульфид [84]. 85], соединение, обнаруженное в образцах мочи гривистого волка в Goodwin et al. [47] и в настоящем анализе. Изопрениловый спирт входит в секрецию межпальцевых желез как самцов, так и самок красного хищника ( Alcelaphus buselaphus caama ) [86] и является феромоном у нескольких сотен видов насекомых [87, 88].Будущие исследования, изучающие производство этих соединений, коррелированное с экскрецией гормонов в течение года, позволят проводить сравнения между сезоном размножения и сезоном отсутствия размножения, что предоставит дополнительную поддержку их идентичности как полуохимических веществ у этого вида.

Важно отметить, что идентификация дельта-лактонов и пренилбромида была основана на поиске в спектральной библиотеке и проверена путем сопоставления ионных пиков в экспериментальном спектре со структурными фрагментами с использованием NIST MS Interpreter. Идентификация бис (пренил) сульфида, гемитерпеноидного тиоэфира, была основана на сопоставлении пиков ионных фрагментов с пиками пренилтиола, гемитерпеноидного тиолового соединения, ранее идентифицированного в моче гривистого волка [47].Спектр пренилтиола имеет почти те же фрагменты, что и экспериментальный спектр, за исключением дополнительного водорода. Затем экспериментальный спектр согласовывали со структурой (бис) пренилсульфида, и все ионные пики приходились на структурные фрагменты.

Разительные различия были отмечены между выборками от интактных самцов и кастрированных самцов. Из пяти летучих органических соединений, которые больше всего повлияли на классификацию как неповрежденные или кастрированные, все они были более многочисленными в образцах мочи интактных самцов по сравнению с образцами кастрированного самца.3-Этил-2,5-диметилпиразин, один из основных ЛОС в моче гривистых волков [47], представляет собой следовой феромон и аттрактант для нескольких видов Hymenoptera. [89]. 2-Метил-6- (1-пропенил) пиразин, также являющийся основным ЛОС мочи гривистого волка [47, 58, 59], был примерно в 7 раз меньше в образцах кастрированного самца по сравнению с образцами интактных самцов. Тетрагидро-2-изопентил-5-пропилфуран — это ЛОС, выделяемый свежей вишней ( Prunus avium lapins, ) [90]. Хотя в семиохимической литературе по млекопитающим не было найдено упоминаний о тетрагидро-2-изопентил-5-пропилфуране, фураны очень распространены в качестве компонентов запаха млекопитающих.Например, 2-метилфуран является ЛОС в моче серого волка [56], три фурана являются ЛОС в моче у африканской дикой собаки [39], а несколько фуранов более распространены у интактных самцов мышей по сравнению с кастрированными самцами [91]. . Пренол ранее был обнаружен в моче гривистого волка [47, 59], а также обнаружен в преорбитальном секрете голубого дукера ( Cephalophus monticola ) [92] и в секрете анальных желез норки ( Mustela vison ). [93].

Даже для человеческого носа моча кастрированного самца совсем не пахла, в то время как пробы мочи интактных самцов были довольно острыми.Из десяти наиболее значимо различающихся ЛОС девять были более распространены у интактных мужчин по сравнению с образцами от кастрированных мужчин, что позволяет предположить, что эти соединения могут зависеть от тестостерона. Гормонально-опосредованное образование запаха хорошо изучено у других видов. У серого волка выработка летучих органических соединений с мочой, обычно связанных с интактными самцами, была вызвана обработкой тестостероном кастрированных самцов [57]. У приматов противозачаточное лечение самок изменяет профиль ее генитального запаха, делая ее запах менее характерным [94].У мелких грызунов кастрированные самцы теряют многие формы поведения, связанные с мочевыми феромонами. Способность привлекать самок (у мышей, Mus musculus ) [95, 96], исследовать аногенитальную область самок и совокупляться (у сирийских хомяков, Mesocricetus auratus ) [97], ускорять половое созревание у самок (в прериях). voles, Microtus ochrogaster ) [98, 99], а предотвращение имплантации (у мышей) [100] — феромональные эффекты. Когда кастрированные самцы проходят гормональное лечение, такое поведение восстанавливается [99, 100].Лечение нашего кастрированного мужчины тестостероном во время этого исследования было невозможно, но, безусловно, привело бы к важным открытиям о тестостероновой зависимости этих ЛОС.

Было обнаружено, что тринадцать ЛОС значительно различаются в обоих анализах по полу и репродуктивному статусу. Из них десять были выше по численности у самцов, чем у самок, и больше у интактных самцов, чем у кастрированных самцов: дельта-декалактон, дельта-додекалактон, бис (пренил) сульфид, пренилбромид, изопрениловый спирт, геранилнитрил, 3-бутил- 2,5-диметилпиразин, 2-этенил-6-метилпиразин, пренилтиол и изопренилметилсульфид.Разумно предположить, что эти летучие органические соединения указывают на «мужественность» или наличие тестостерона. Поведенческие биотесты с этим набором ЛОС помогут дополнительно выяснить их биологическую роль в гривистом волке. Самки в период течки должны проявлять больший поведенческий интерес к ЛОС, модулируемым тестостероном, чем к ЛОС, которые присутствуют в моче гривистого волка, но не связаны с воспроизводством.

Это исследование обеспечивает отличную основу для выбора ЛОС для биотеста, которые могут играть роль в индукции овуляции у гривистого волка.В частности, дельта-декалактон и дельта-додекалактон заслуживают более пристального внимания в биотестах, поскольку нормализованная численность каждого из них была в четыре раза выше у самцов, чем у самок, у интактных самцов выше, чем у кастрированных самцов, и они являются известными сигнальными соединениями у других млекопитающих [82 , 83]. Некоторые соединения гемитерпеноидов заслуживают дальнейшего изучения. Бис (пренил) сульфид имел в 4 раза более высокую нормированную численность у самцов по сравнению с самками и в 8 раз больше нормализованной численности у интактных самцов по сравнению с кастрированным самцом и в 2 раза выше у парных самцов по сравнению с непарными самцами.Уровень пренилбромида был в 6 раз выше у мужчин по сравнению с женщинами и в 10 раз выше у интактных мужчин по сравнению с кастрированной особью. Изопрениловый спирт был в 2 раза более распространен у самцов по сравнению с самками и в 5 раз выше у интактных самцов по сравнению с кастрированным самцом, и, наконец, геранилнитрил был в 6 раз выше у самцов по сравнению с самками и в 11 раз больше у интактных самцов, чем у кастрированных самцов. кастрированный кобель. Эти пренильные соединения синтезируются мевалонатным путем, который начинается с изопентенилдифосфата и диметилаллилдифосфата, строительных блоков холестерина и стероидных гормонов [101].Из-за их связи с репродуктивными гормонами идентификация этих соединений как дифференциально экспрессируемых у гривистых волков в зависимости от пола и репродуктивного статуса особенно интригует и заслуживает биологического анализа. Будущее исследование, изучающее корреляцию изменений летучих органических соединений в моче с гормональными и поведенческими изменениями в течение года, дополнительно прояснит роль этих соединений.

Как и три предыдущих исследования летучих органических соединений в моче гривистых волков, настоящее исследование показало, что соединения пиразина являются одними из самых распространенных [47, 58, 59].Goodwin et al. сообщает о высокой распространенности 2,5-диметилпиразина, 2-метил-6- (1-пропенил) пиразина, 2-этенил-6-метилпиразина и 3-этил-2,5-диметилпиразина [47], всех которые были обнаружены в более чем 70% мужских и женских проб в настоящем исследовании, хотя, что примечательно, преобладали только 2,5-диметилпиразин и 2-этенил-6-метилпиразин (более 70% проб и 10 лучших в среднем сырое обилие) в выборках кастрированных самцов. Все эти пиразины были также идентифицированы во всех 103 образцах мочи гривистого волка в Kester et al.[59]. Чайлдс-Сэнфорд идентифицировал 2,5-диметилпиразин и 2-метил-6- (1-пропенил) -пиразин как химические компоненты, обнаруженные в высоких концентрациях в семи образцах мочи [58]. Пиразины являются обычными семиохимическими веществами среди насекомых [102], а также являются сигнальными соединениями у некоторых таксонов млекопитающих, в том числе в качестве компонентов мочи серого волка, вызывая замораживание у мышей [103–105]. Полученные здесь данные подтверждают предыдущие гипотезы о том, что пиразины ответственны за характерный резкий запах мочи гривистого волка [47, 58].

Терпеноидные соединения широко распространены в природе как ароматические соединения [106]. Кроме того, они преобладают в виде летучих органических соединений с мочой у гривистых волков [47, 59]. В настоящем исследовании метил пренилсульфид и пренол преобладали как в мужских, так и в женских образцах. Примечательно, что ни один из них не был идентифицирован как преобладающий в образцах от кастрированного самца. Метилпренилсульфид имеет неприятный запах и, помимо его преобладания в ЛОС в моче гривистых волков, также является сигнальным соединением у видов насекомых [85].Терпеноидные соединения были очень важны для классификации образцов по полу: бис (пренил) сульфид, пренилбромид, изопрениловый спирт, геранилнитрил, пренилтиол и изопренилметилсульфид значительно более распространены у мужчин, чем у женщин. Пренол, пренилбромид, (бис) пренилсульфид и геранилнитрил были важны для классификации образцов по мужскому репродуктивному статусу; всех четырех ЛОС было больше в образцах от интактных самцов по сравнению с образцами от кастрированных самцов.Кроме того, (бис) пренилсульфид было больше в моче парных самцов по сравнению с образцами непарных самцов. Происхождение терпеноидных соединений происходит через продукты мевалонатного пути пренилпирофосфат и изопентенилпирофосфат [107]. Пренилпирофосфат образует гемитерпеноидные пренильные соединения, такие как пренилбромид, метилпенилсульфид и бис (пренил) сульфид. Пренилпирофосфат и изопентенилфосфат дают монотерпеновое геранильное соединение геранилнитрил [107].Мевалонатный путь играет критическую роль в производстве гормонов и феромонов у насекомых [107], поэтому идентификация такого количества терпеноидных ЛОС, которые по-разному выражаются в зависимости от пола, репродуктивного статуса и статуса пары, интригует.

Заключение

Несмотря на усилия по сохранению в дикой природе, сохранение вида часто требует поддержания здоровых, ex situ популяций в дополнение к сокращающимся in situ популяциям, просвещению общественности об этом виде и изучению базовой биологии видов, чтобы улучшить усилия по сохранению [6, 108].Таким образом, исследование видоспецифичных аспектов воспроизводства диких животных, особенно с упором на определение новых и уникальных репродуктивных механизмов, является наивысшим приоритетом современных исследований дикой природы [109, 110].

Эти результаты добавляют ценную информацию к растущему объему знаний о семиохимии и репродуктивных механизмах млекопитающих. Гривистый волк — только пятый вид (из 36) среди Canidae и единственный вид одиночных собак, подлежащий исследованию на предмет содержания летучих органических соединений в моче. Немногие из существующих исследований на собачьих пытались проанализировать дифференцированную экспрессию по полу (за исключением [39, 40, 56, 57]), и ни одно из них не сделало этого на одиноком гривистом волке, который полагается на индуцированную семиохимическими веществами индуцированную овуляцию для репродуктивного успеха.Новое программное обеспечение для структурного сопоставления позволило идентифицировать несколько пренильных соединений как преобладающих или дифференциально выраженных в зависимости от пола или репродуктивного статуса и подтвердило идентичность метилпенилсульфида в моче гривистого волка. Эта работа закладывает важную основу для семиохимических открытий у этого вида и устанавливает надежный конвейер анализа данных с открытым исходным кодом, который может быть широко использован для улучшения дифференциального анализа у других видов, чтобы ответить на биологически важные вопросы.

Благодарности

Авторы хотели бы выразить сердечную благодарность сотрудникам зоопарка Бердсли, зоопарка Буффало, Центра дикой природы Fossil Rim, зоопарка Филадельфии, Смитсоновского института биологии охраны природы и Центра охраны природы Белого дуба за их невероятные усилия по сбору такого богатства образцы. База данных Pherobase по феромонам и семиохимическим веществам предоставила отличный ресурс для изучения того, у каких видов ранее было идентифицировано то или иное соединение.Мы благодарны разработчикам автосэмплера и Инго Кристу за предоставленные компоненты системы SPME и советы.

Ссылки

1. 1. Dietz JM. Chrysocyon brachyurus . Виды млекопитающих. 1985; 234: 1–4.
2. 2. Паула Р.К., ДеМаттео К.Э. Chrysocyon brachyurus . (исправленная версия опубликована в 2016 г.). 2015. № отчета: e. T4819A88135664. Доступно: http://www.iucnredlist.org/details/4819/0
3. 3. Emmons LH. Гривистые волки национального парка Ноэль Кемпфф Меркадо.Вашингтон, округ Колумбия: Вклад Смитсоновского института в зоологию; 2012.
4. 4. De Melo LFB, Sábato MAL, Magni EMV, Young RJ, Coelho CM. Тайная жизнь гривистых волков ( Chrysocyon brachyurus Illiger 1815): как показывают ошейники слежения GPS. J Zool. 2007. 271: 27–36.
5. 5. Dietz JM. Экология и социальная организация гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ). Вашингтон, округ Колумбия: Пресса Смитсоновского института; 1984. Отчет №: 392.
6. 6.Songsasen N, Родден MD. Роль плана выживания видов в сохранении гривистого волка Chrysocyon brachyurus . Int Zoo Yearb. 2010. 44: 136–148.
7. 7. Songsasen N, Rodden M, Brown JL, Wildt DE. Паттерны метаболитов фекальных гонадных гормонов гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ). Териогенология. 2006; 66: 1743–1750. pmid: 16513162
8. 8. Родден, доктор медицины, Соренсон Л.Г., Шерр А., Клейман Д.Г. Использование поведенческих мер для оценки репродуктивного статуса у гривистых волков ( Chrysocyon brachyurus ).Zoo Biol. 1996; 15: 565–585.
9. 9. Songsasen N, Johnson AE, Reiter LE, Rodden MD. Размножение и факторы, влияющие на репродуктивный успех гривистого волка. Экология и сохранение гривистого волка: мультидисциплинарные перспективы. Бока-Ратон, Флорида: CRC Press; 2014. с. 322.
10. 10. Родден М.Д., Бейкер Б., Барбье Р., Буш М., Коллетт Дж., Гофф Д. и др. Руководство по выращиванию гривистых волков. План выживания гривистых волков; 2007.
11. 11. de Gier J, Kooistra HS, Djajadiningrat-Laanen SC, Dieleman SJ, Okkens AC.Временные отношения между плазменными концентрациями лютеинизирующего гормона, фолликулостимулирующего гормона, эстрадиола-17β, прогестерона, пролактина и α-меланоцитстимулирующего гормона во время фолликулярной, овуляторной и ранней лютеиновой фазы у суки. Териогенология. 2006. 65: 1346–1359. pmid: 16197989
12. 12. Concannon PW, Castracane VD, Temple M, Montanez A. Эндокринный контроль функции яичников у собак и других плотоядных животных. Anim Reprod. 2009. 6: 172–193.
13. 13. Concannon PW.Репродуктивные циклы домашней суки. Anim Reprod Sci. 2011; 124: 200–210. pmid: 21055888
14. 14. Печать США, Plotka ED, Packard JM, Mech LD. Эндокринные корреляты воспроизводства у волка. I. Прогестерон, эстрадиол и ЛГ в сыворотке крови во время эстрального цикла. Биол Репрод. 1979; 21: 1057–1066. pmid: 574776
15. 15. Аса С.С., Бауман К., Каллахан П., Бауман Дж., Фолькманн Д.Х., Йохле В. Вызывание фертильной течки агонистом гонадолиберина при естественном спаривании или искусственном оплодотворении с последующим рождением детенышей у серых волков ( Canis lupus ).Териогенология. 2006; 66: 1778–1782. pmid: 16469367
16. 16. Уокер С.Л., Уодделл В.Т., Гудроу К.Л. Репродуктивные эндокринные паттерны у содержащихся в неволе самок и самцов рыжих волков ( Canis rufus ), оцененные с помощью анализа фекалий и сыворотки на гормоны. Zoo Biol. 2002; 21: 321–335.
17. 17. Карлсон Д.А., Гесе Э.М. Репродуктивная биология койота ( Canis latrans ): интеграция брачного поведения, репродуктивных гормонов и цитологии влагалища. J Mammal. 2008. 89: 654–664.pmid: 32287378
18. 18. Monfort SL, Wasser SK, Mashburn KL, Burke M, Brewer BA, Creel SR. Метаболизм стероидов и подтверждение неинвазивного эндокринного мониторинга у африканской дикой собаки ( Lycaon pictus ). Zoo Biol. 1997. 16: 533–548.
19. 19. Ван дер Вейде Л.К., Мартин ГБ, Ежевика Массачусетс, Груен В., Харланд А., Парижский MCJ. Репродуктивный гормональный фон у беременных, псевдобеременных и ациклических содержащихся в неволе африканских диких собак ( Lycaon pictus ). Anim Reprod Sci.2015; 156: 75–82. pmid: 25818522
20. 20. ДеМаттео К.Е., Портон И.Дж., Клейман Д.Г., Аса К.С. Влияние самца кустарниковой собаки ( Speothos venaticus ) на репродуктивный цикл самок. J Mammal. 2006; 87: 723–732.
21. 21. Mondain-Monval M, Dutourne B, Bonnin-Laffargue M, Canivenc R, Scholler R. Активность яичников во время анэструса и репродуктивного сезона рыжей лисы ( Vulpes vulpes L. ). J Steroid Biochem. 1977; 8: 761–769. pmid: 563492
22. 22.Maurel D, Lacroix A, Boissin J. Сезонные репродуктивные эндокринные профили у двух диких млекопитающих: рыжей лисы ( Vulpes vulpes L. ) и европейского барсука ( Meles meles L. ), считающихся короткодневными млекопитающими. Acta Endocrinol Cph. 1984; 105: 130–138.
23. 23. Möller OM. Концентрация прогестерона в периферической плазме голубой лисицы ( Alopex lagopus ) во время беременности и во время эстрального цикла. J Endocrinol. 1973; 59: 429–438. pmid: 4761680
24. 24.Reiter LE. Понимание плохой репродуктивной способности гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ) проведено ex situ . Магистерская работа, Университет Джорджа Мейсона. 2012. Доступно: http://digilib.gmu.edu/jspui/handle/1920/7971
25. 25. Johnson AEM, Freeman EW, Colgin M, McDonough C, Songsasen N. Индукция активности яичников и овуляции в индуцированном овуляторе гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ) с использованием агониста GnRH и рекомбинантного LH. Териогенология.2014; 82: 71–79. pmid: 24742964
26. 26. Джонс М.К., Рейтер Л.Е., член парламента Гилмор, Фриман Е.В., Сонгсасен Н. Физиологические последствия содержания гривистых волков ( Chrysocyon brachyurus ) на родственниках женского пола или неродственных самцах. Gen Comp Endocrinol. 2018. pmid: 29913172
27. 27. Аса К.С., Бауман Дж. Э., Кунан Т. Дж., Грей ММ. Доказательства индуцированной течки или овуляции у псовых, островных лисиц ( Urocyon littoralis ). J Mammal. 2007. 88: 436–440.
28. 28.Майя О.Б., Гувейя AMG. Рождение и гибель гривистых волков Chrysocyon brachyurus (Illiger, 1811) в неволе. Braz J Biol. 2002; 62: 25–32. pmid: 12185920
29. 29. Morè L. Основные белки мочи мыши вызывают овуляцию через сошник и нос. Chem Senses. 2006; 31: 393–401. pmid: 16510842
30. 30. Келлихер KR, Wersinger SR. Обонятельная регуляция сексуального поведения и репродуктивной физиологии лабораторных мышей: эффекты и нейронные механизмы.ИЛАР J. 2008; 50: 28–42.
31. 31. Ичимару Т., Моги К., Окура С., Мори Ю., Окамура Х. Контакт с бараньей шерстью стимулирует активность генератора импульсов гонадотропин-высвобождающего гормона у самок коз. Anim Reprod Sci. 2008. 106: 361–368. pmid: 17573212
32. 32. Бедос М., Флорес Дж. А., Фитц-Родригес Дж., Келлер М., Мальпо Б., Пойндрон П. и др. Четырех часов ежедневного контакта с сексуально активными самцами достаточно, чтобы вызвать фертильную овуляцию у анестезированных коз. Horm Behav. 2010. 58: 473–477.pmid: 20457159
33. 33. Хардер Дж. Д., Джексон Л. М.. Химическая коммуникация и размножение у серого короткохвостого опоссума ( Monodelphis domestica ). Витамины и гормоны. Эльзевир; 2010. С. 373–399. https://doi.org/10.1016/S0083-6729(10)83016-X
34. 34. Баккер Дж., Баум MJ. Нейроэндокринная регуляция высвобождения гонадолиберина в индуцированных овуляторах. Фронт нейроэндокринол. 2000. 21: 220–262. pmid: 10882541
35. 35. Бреннан PA, Keverne EB.Нервные механизмы обонятельного обучения млекопитающих. Prog Neurobiol. 1997; 51: 457–481. pmid:
02
36. 36. Мюллер-Шварце Д. Химическая экология позвоночных. Кембридж, Великобритания: Издательство Кембриджского университета; 2006.
37. 37. Денхард М. Полохимические вещества млекопитающих: понимание феромонов и сигнатурных смесей для лучшего зоотехнического животноводства и их сохранения. Int Zoo Yearb. 2011; 45: 55–79.
38. 38. Gese EM, Ruff RL. Обоняние койотов, Canis latrans : влияние социальных и экологических факторов.Anim Behav. 1997; 54: 1155–1166. pmid: 9398369
39. 39. Паркер М.Н. Территориальность и поведение африканских диких собак по запаху в северной Ботсване. Докторская диссертация, Университет Монтаны. 2010.
40. 40. Приложения P, Mmualefe L, McNutt JW. Идентификация летучих веществ из секретов и экскрементов африканских диких собак ( Lycaon pictus ). J Chem Ecol. 2012; 38: 1450–1461. pmid: 23129124
41. 41. Джордан Н.Р., Голабек К.А., Приложения П.Дж., Гилфиллан Г.Д., МакНатт Дж.В.Идентификация запаховых меток и поведение по запаховым меткам у диких африканских собак ( Lycaon pictus ). Яник В., редактор. Этология. 2013; 119: 644–652. https://doi.org/10.1111/eth.12105
42. 42. Asa CS, Mech LD, Seal US. Использование мочи, фекалий и секрета анальных желез в маркировке запаха волком в неволе ( Canis lupus ). Anim Behav. 1984; 33: 1034–1036.
43. 43. Градецкий П. Возможная феромонная регуляция размножения у диких хищников.J Chem Ecol. 1985; 11: 241–250. pmid: 24309850
44. 44. Asa CS, Mech LD, Seal US, Plotka ED. Влияние социальных и эндокринных факторов на маркировку мочи волками в неволе ( Canis lupus ). Horm Behav. 1990; 24: 497–509. pmid: 2286365
45. 45. Pal SK. Маркировка мочи собаками на свободном выгуле ( Canis knownis ) в зависимости от пола, времени года, места и положения тела. Appl Anim Behav Sci. 2003. 80: 45–59.
46. 46. Джексон CR, Макнатт JW, Apps PJ.Управление дальнобойным поведением африканских диких собак (Lycaon pictus) с помощью перемещенных по запаху меток. Wildl Res. 2012; 39: 31.
47. 47. Goodwin TE, Songsasen N, Broederdorf LJ, Burkert BA, Chen CJ, Jackson SR и др. Гемитерпеноиды и пиразины в пахучей моче гривистого волка ( Chrysocyon brachyurus ). В: East ML, Dehnhard M, редакторы. Химические сигналы у позвоночных 12. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Спрингер; 2013. С. 171–184.
48. 48. Уилсон С. Р., Кармак М., Новотный М. В., Йоргенсен Дж. В., Уиттен В. К..3-Изопентилметилсульфид. Новый терпеноид в аромате красной лисы ( Vulpes vulpes ). J Org Chem. 1978; 43: 4675–4676.
49. 49. Йоргенсен Дж. В., Новотный М. В., Кармак М., Копленд Г. Б., Уилсон С. Р.. Химические компоненты запаха в моче красной лисицы ( Vulpes vulpes L. ) в зимний период. Наука. 1978; 199: 796–798. pmid: 17836296
50. 50. Whitten WK, Wilson MC, Wilson SR, Jorgensen JW, Novotny MV, Carmack M. Индукция маркировочного поведения у диких рыжих лисиц ( Vulpes vulpes L.) синтетическими компонентами мочи. J Chem Ecol. 1980; 6: 40–55.
51. 51. Preti G, Muetterties EL, Furman JM, Kennelly JJ, Johns BE. Летучие компоненты анального мешка собаки ( Canis ownis ) и койота ( Canis latrans ). J Chem Ecol. 1976; 2: 177–186.
52. 52. Schultz TH, Flath RA, Stern DJ, Mon TR, Teranishi R, Kruse SM, et al. Летучие вещества в моче эстрального организма койота. J Chem Ecol. 1988. 14: 701–712. pmid: 24276012
53. 53. Гудвин М., Гудинг К.М., Ренье Ф.Половой феромон у собаки. Наука. 1979; 203: 559–561. pmid: 569903
54. 54. Круз С.М., Ховард В.Е. Исследования собачьих сексуальных аттрактантов. J Chem Ecol. 1983; 9: 1503–1515. pmid: 24408806
55. 55. Шульц TH, Kruse SM, Flath RA. Некоторые летучие компоненты мочи суки. J Chem Ecol. 1985. 11: 169–175. pmid: 24309843
56. 56. Раймер Дж. Х., Вислер Д., Новотный М. В., Аса К. С.. Летучие компоненты мочи волка ( Canis lupus ) в зависимости от пола и времени года.Experientia. 1984; 40: 707–709. pmid: 6745399
57. 57. Раймер Дж., Вислер Д., Новотны М., Аса С., Сил США, Мех ЛД. Химические компоненты запаха в моче волка ( Canis lupus ) и их зависимость от репродуктивных гормонов. J Chem Ecol. 1986; 12: 297–314. pmid: 24306418
58. 58. Чайлдс-Сэнфорд С. Пленный гривистый волк ( Chrysocyon brachyurus ): соображения по питанию с упором на лечение цистинурии. Магистерская работа, Мэрилендский университет.2005.
59. 59. Кестер М.Э., Фриман Е.В., Сонгсасен Н., Хафф ТБ. Автоматическая твердофазная микроэкстракция ЛОС из мочи одиннадцати гривистых волков ( Chrysocyon brachyurus ): рекурсивный рабочий процесс для анализа ГХ-МС. В: Шульте Б.А., Гудвин Т.Е., Феркин М.Х., редакторы. Химические сигналы у позвоночных 13. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Спрингер; 2014. С. 477–498.
60. 60. Beauchamp GK. Диета влияет на привлекательность мочи у морских свинок. Природа. 1976; 263: 587–588.pmid: 988483
61. 61. Schellinck HM, West AM, Brown RE. Крысы могут различать запахи мочи генетически идентичных мышей, содержащихся на разных диетах. Physiol Behav. 1992; 51: 1079–1082. pmid: 1615047
62. 62. Чемберс М.С., Маклин Б., Берк Р., Амодей Д., Рудерман Д.Л., Нойман С. и др. Кроссплатформенный набор инструментов для масс-спектрометрии и протеомики. Nat Biotech. 2012; 30: 918–920. pmid: 23051804
63. 63. Таутенхан Р., Патти Г.Дж., Райнхарт Д., Сюздак Г.XCMS Online: веб-платформа для обработки нецелевых метаболомных данных. Anal Chem. 2012; 84: 5035–5039. pmid: 22533540
64. 64. Prince JT, Marcotte EM. Хроматографическое выравнивание наборов протеомических данных ESI-LC-MS с помощью упорядоченного биективного интерполированного деформирования. Anal Chem. 2006. 78: 6140–6152. pmid: 16944896
65. 65. Kuhl C, Tautenhahn R, Böttcher C, Larson TR, Neumann S. КАМЕРА: интегрированная стратегия для извлечения спектров соединений и аннотации наборов данных жидкостной хроматографии / масс-спектрометрии.Anal Chem. 2012; 84: 283–289. pmid: 22111785
66. 66. Чонг Дж., Вишарт Д.С., Ся Дж. Использование MetaboAnalyst 4.0 для комплексного и комплексного анализа данных метаболомики. Curr Protoc Bioinforma. 2019; 68: e86. pmid: 31756036
67. 67. Де Ливера AM, Ольшанский М, Скорость ТП. Статистический анализ данных метаболомики. В: Ресснер У., Диас, редакторы. Инструменты метаболомики для методов открытия природных продуктов в молекулярной биологии (методы и протоколы). Тотова, Нью-Джерси: Humana Press; 2013.
68. 68. Дитерле Ф., Росс А., Шлоттербек Г., Сенн Х. Нормализация вероятностного коэффициента как надежный метод учета разбавления сложных биологических смесей. Применение в метабономике ¹ H ЯМР. Anal Chem. 2006; 78: 4281–4290. pmid: 16808434
69. 69. Дурбин Б.П., Хардин Д.С., Хокинс Д.М., Рок Д.М. Преобразование, стабилизирующее дисперсию, для данных микромассивов экспрессии генов. Биоинформатика. 2002; 18: S105–110. pmid: 12169537
70. 70. ван ден Берг Р.А., Хефслот ХК, Вестерхейс Я.А., Смилде А.К., ван дер Верф М.Дж.Центрирование, масштабирование и преобразования: повышение биологической информативности данных метаболомики. BMC Genomics. 2006; 7: 1. pmid: 16403227
71. 71. Ся Дж., Вишарт Д.С. Веб-вывод о биологических паттернах, функциях и путях на основе метаболомных данных с использованием MetaboAnalyst. Nat Protoc. 2011; 6: 743–760. pmid: 21637195
72. 72. Баркер М., Райенс В. Метод наименьших квадратов для дискриминации. J Chemom. 2003. 17: 166–173.
73. 73. Westerhuis JA, Hoefsloot HCJ, Smit S, Vis DJ, Smilde AK, van Velzen EJJ и др.Оценка перекрестной проверки PLSDA. Метаболомика. 2008; 4: 81–89.
74. 74. Уорли Б., Пауэрс Р. Многомерный анализ в метаболомике. Curr Metabolomics. 2012; 1: 92–107. pmid: 26078916
75. 75. Wold S, Sjöström M, Erikkson L. PLS-регрессия: основной инструмент хемометрики. Chemom Intell Lab Syst. 2001. 58: 109–130.
76. 76. Чонг Ай-Джи, Джун Ч-Х. Выполнение некоторых методов выбора переменных при мультиколлинеарности. Chemom Intell Lab Syst.2005. 78: 103–112.
77. 77. Blaustein AR. Половой отбор и обоняние млекопитающих. Am Nat. 1981; 117: 1006–1010.
78. 78. Albone ES. Семиохимия млекопитающих: исследование химических сигналов между млекопитающими. Чичестер, Великобритания: Wiley; 1984. https://doi.org/10.1007/BF00399923 pmid: 24253274
79. 79. Drea CM. D’scent of man: сравнительный обзор хемосигналов приматов в зависимости от пола. Horm Behav. 2015; 68: 117–133. pmid: 25118943
80. 80.Valim MF, Rouseff RL, Lin J. Газовая хроматография-ольфактометрическая характеристика ароматических соединений в двух типах нектара из яблок кешью. J. Agric Food Chem. 2003. 51: 1010–1015. pmid: 12568564
81. 81. Энкарна Гомес, Ledbetter CA Hartsell PL. Летучие соединения абрикоса, сливы и их межвидовых гибридов. J. Agric Food Chem. 1993; 41: 1669–1676.
82. 82. Ли Джи, Розе У, Локк, округ Колумбия. Предупреждающий запах североамериканского дикобраза ( Erethizon dorsatum ).J Chem Ecol. 1997; 23: 2737–2754.
83. 83. Burger BV, Viviers MZ, Bekker JPI, Roux M, Fish N, Fourie WB и др. Химическая характеристика территориальной маркировочной жидкости самца бенгальского тигра, Panthera tigris . J Chem Ecol. 2008. 34: 659–671. pmid: 18437496
84. 84. Гамблин Д.П., ван Кастерен С., Бернардес Дж. Л., Чалкер Дж. М., Олдхэм, штат Нью-Джерси, Фэрбенкс А.Дж. и др. Химическое сайт-селективное пренилирование белков. Мол Биосист. 2008. 4: 558–561. pmid: 18493653
85. 85.Сюй С., Эррабели Р., Уилл К., Ариас Э., Аттигалле А.Б. 3-Метил-1- (метилтио) -2-бутен: компонент защитной секреции с неприятным запахом двух видов Ceroglossus (Coleoptera: Carabidae). Химиоэкология. 2019; 29: 171–178.
86. 86. Reiter B, Burger BV, Dry J. Экзокринные выделения млекопитающих. XVIII: химическая характеристика межпальцевой секреции красного Hartebeest, Alcelaphus buselaphus caama . J Chem Ecol. 2003. 29: 2235–2252. pmid: 14682509
87. 87.Биргерссон Г., Шлайтер Ф., Лёфквист Дж., Бергстрём Г. Количественное изменение компонентов феромона в еловом короеде Ips typographus на разных фазах атаки. J Chem Ecol. 1984; 10: 1029–1055. pmid: 24318847
88. 88. Pajares JA, Álvarez G, Ibeas F, Gallego D, Hall DR, Farman DI. Идентификация и полевая активность феромона агрегации, продуцируемого самцами, у соснового пилильщика, Monochamus galloprovincialis . J Chem Ecol. 2010; 36: 570–583.pmid: 20437083
89. 89. Эль-Сайед А. 2,5-Диметил-3-этилпиразин. Pherobase: база данных феромонов и семиохимических веществ; 2020. Доступно: http://www.pherobase.com/database/compound/compounds-detail-2me5me-3-ethylpyrazine.php?isvalid=yes
90. 90. Мехериук М., Жирар Б., Мойлс Л., Беверидж Х. Дж. Т., Маккензи Д. Л., Харрисон Дж. И др. Упаковка черешни «Lapins» в модифицированной атмосфере. Food Res Int. 1995; 28: 239–244.
91. 91. Soini HA, Wiesler D, Koyama S, Féron C, Baudoin C, Novotny MV.Сравнение запахов мочи двух родственных видов мышей: Mus spicilegus и Mus domesticus . J Chem Ecol. 2009; 35: 580–589. pmid: 193
92. 92. Burger BV, Pretorius PJ. Исследования феромонов млекопитающих. VI. Соединения предглазничной железы голубого дукера, Cephalophus monticola . Z Für Naturforschung C. 1987; 42: 1355–1357.
93. 93. Schildknecht H, Birkner C, Krauss D. Struktur und wirkung der musteliden-ökomone II.Erweiterte analysis des analbeutelsekretes des nerzes Mustela vison L . Chem Ztg. 1981; 105: 273–286.
94. 94. Кроуфорд Дж. С., Буле М., Дреа К. М.. Неправильный запах: гормональные контрацептивы у лемуров изменяют важные сигналы запаха самок. Proc R Soc B Biol Sci. 2011; 278: 122–130. pmid: 20667870
95. 95. Джемиоло Б., Альбертс Дж., Сочински-Виггинс С., Харви С., Новотный М.В. Поведенческие и эндокринные реакции самок мышей на синтетические аналоги летучих соединений в моче самцов.Anim Behav. 1985; 33: 1114–1118.
96. 96. Чжан Дж-Х, Сунь Л., Чжан Дж-Х, Фэн З-Й. Ароматические соединения, влияющие на пол и гонады, и 3 феромона самцов у крысы. Chem Senses. 2008. 33: 611–621. pmid: 18515819
97. 97. Вуд Р.И., Ньюман С.В. Интеграция хемосенсорных и гормональных сигналов важна для спаривания у самца сирийского хомяка. J Neurosci. 1995; 15: 7261–7269. pmid: 7472480
98. 98. Лепри Дж. Дж., Ванденберг Дж. Дж. Половое созревание сосновых полевок, Microtus pinetorum , и влияние хемосигналов на воспроизводство самок.Биол Репрод. 1986; 34: 370–377. pmid: 3513855
99. 99. Петрулис А. Хемосигналы, гормоны и размножение млекопитающих. Horm Behav. 2013; 63: 723–741. pmid: 23545474
100. 100. Thorpe JB, deCatanzaro D. Лечение эстрадиолом восстанавливает способность кастрированных самцов вызывать эффекты Ванденберга и Брюса у мышей ( Mus musculus ). Репродукция. 2012; 143: 123–132. pmid: 22016382
101. 101. Гольдштейн JL, Браун MS. Регуляция мевалонатного пути.Природа. 1990; 343: 425–430. pmid: 1967820
102. 102. Брофи Дж. Пиразины, полученные от насекомых: их источник, идентификация, синтез и функции. Исследования в области химии натуральных продуктов. Амстердам, Нидерланды: Эльзевир; 1989. С. 221–293.
103. 103. Бойер М.Л., Джемиоло Б., Андреолини Ф., Вислер Д., Новотны М. Профили летучих мочевых образований сосновой полевки, Microtus pinetorum , и их эндокринная зависимость. J Chem Ecol. 1989; 15: 649–662. pmid: 24271806
104. 104.Ямада К., Ито Р., Охта А. Влияние производных пиразина на день открытия влагалища у молодых самок крыс. Jpn J Pharmacol. 1989; 49: 529–530. pmid: 2724691
105. 105. Osada K, Kurihara K, Izumi H, Kashiwayanagi M. Аналоги пиразина — активные компоненты волчьей мочи, которые вызывают у мышей поведение избегания и замораживания. Болхуис Дж. Дж., Редактор. PLoS ONE. 2013; 8: e61753. pmid: 23637901
106. 106. Гершензон Дж., Дударева Н. Функция терпеновых натуральных продуктов в мире природы.Nat Chem Biol. 2007; 3: 408–414. pmid: 17576428
107. 107. Vandermoten S, Santini S, Haubruge É, Heuze F, Francis F, Brasseur R и др. Структурные особенности, придающие пренилтрансферазе тли двойную геранил / фарнезилдифосфатсинтазную активность. Насекомое Biochem Mol Biol. 2009. 39: 707–716. pmid: 19720147
108. 108. Джудженов К., Сонгсасен Н. Воспроизводство и успехи в исследованиях репродукции хищников. В: Холт В. В., Браун Дж. Л., Комиццоли П., редакторы. Репродуктивные науки в охране животных: достижения и отчеты.Нью-Йорк, Нью-Йорк: Спрингер; 2014.
109. 109. Пукаженты Б.С., Вильдт Д.Е. Какие репродуктивные технологии наиболее подходят для изучения, управления и сохранения дикой природы? Reprod Fertil Dev. 2004; 16: 33–46. pmid: 14972101
110. 110. Комиццоли П., Кросье А., Сонгсасен Н., Гюнтер М.С., Ховард Дж., Уайлдт Д. Достижения в области репродуктивной науки для сохранения диких хищников. Reprod Domest Anim. 2009; 44: 47–52. pmid: 19754535

Транскриптомный анализ и мутационный статус IDh2 при парной первично-рецидивирующей внутрипеченочной холангиокарциноме | BMC Genomics

1.

Bragazzi M, Cardinale V, Carpino G, Venere R, Semeraro R, Gentile R, Gaudio E, Alvaro D. Холангиокарцинома: эпидемиология и факторы риска. Перевод Gastrointest Cancer. 2012; 1: 21–32.

CAS Google ученый

2.

Альваро Д., Крочетти Е., Ферретти С., Брагацци М.С., Капокачча Р., Комитет AC. Описательная эпидемиология холангиокарциномы в Италии. Dig Liver Dis. 2010; 42: 490–5.

Артикул PubMed Google ученый

3.

Kim HJ, Kim JS, Joo MK, Lee BJ, Kim JH, Yeon JE, Park JJ, Byun KS, Bak YT. Гепатолитиаз и внутрипеченочная холангиокарцинома: обзор. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2015; 21: 13418–31.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

4.

Чайтеракидж Р., Джуран Б.Д., Абоэльсуд М.М., Хармсен В.С., Мозер С.Д., Джама Н.Х., Аллотей Л.К., Меттлер Т.А., Байчу Э., Чжан Х и др. Связь между вариантами воспаления и генами, связанными с раком, а также риском и выживаемостью холангиокарциномы.Cancer Med. 2015; 4: 1599–602.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

5.

Tao LY, He XD, Xiu DR. Вирус гепатита B связан с клиническими особенностями и выживаемостью пациентов с внутрипеченочной холангиокарциномой. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2016; 40: 682–87.

6.

Ван З, Шэн YY, Донг QZ, Цинь LX. Вирус гепатита В и вирус гепатита С играют разные прогностические роли при внутрипеченочной холангиокарциноме: метаанализ.Мир Дж. Гастроэнтерол. 2016; 22: 3038–51.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

7.

Улаханнан С.В., Рахма О.Е., Даффи А.Г., Макарова-Рушер О.В., Куртоглу М., Ливер Д.Д., Штейнберг С.М., Гретен Т.Ф. Идентификация режимов активной химиотерапии при запущенной карциноме желчных путей: обзор испытаний химиотерапии за последние два десятилетия. Hepat Oncol. 2015; 2: 39–50.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

8.

Ян Р., Ван Б., Чен Ю. Дж., Ли Х. Б., Ху Дж. Б., Цзоу СК. Эффективность препаратов гемцитабина и платины при раке желчных путей: метаанализ. Противораковые препараты. 2013; 24: 871–7.

Артикул PubMed CAS Google ученый

9.

Park HM, Yun SP, Lee EC, Lee SD, Han SS, Kim SH, Park SJ. Исходы для пациентов с рецидивирующей внутрипеченочной холангиокарциномой после операции. Энн Сург Онкол. 2016; 23: 4392–400.

10.

Йошикава Д., Одзима Х., Ивасаки М., Хираока Н., Косуге Т., Касаи С., Хирохаши С., Шибата Т. Клинико-патологическое и прогностическое значение экспрессии EGFR, VEGF и HER2 при холангиокарциноме. Br J Рак. 2008; 98: 418–25.

Артикул PubMed CAS Google ученый

11.

Накадзава К., Добаши Ю., Сузуки С., Фуджи Х, Такеда Ю., Оои А. Амплификация и сверхэкспрессия c-erbB-2, рецептора эпидермального фактора роста и c-met при раке желчевыводящих путей.J Pathol. 2005; 206: 356–65.

Артикул PubMed CAS Google ученый

12.

Zhu AX, Borger DR, Kim Y, Cosgrove D, Ejaz A, Alexandrescu S., Groeschl RT, Deshpande V, Lindberg JM, Ferrone C, et al. Геномное профилирование внутрипеченочной холангиокарциномы: уточнение прогноза и определение терапевтических целей. Энн Сург Онкол. 2014; 21: 3827–34.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

13.

Sia D, Hoshida Y, Villanueva A, Roayaie S, Ferrer J, Tabak B, Peix J, Sole M, Tovar V, Alsinet C и др. Интегративный молекулярный анализ внутрипеченочной холангиокарциномы выявил 2 класса, которые имеют разные результаты. Гастроэнтерология. 2013; 144: 829–40.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

14.

Андерсен Дж. Б., Спее Б., Блехач Б. Р., Авиталь И., Комута М., Барбур А., Коннер Е. А., Гиллен М. С., Роскамс Т., Робертс Л. Р. и др.Геномная и генетическая характеристика холангиокарциномы определяет терапевтические мишени для ингибиторов тирозинкиназы. Гастроэнтерология. 2012; 142: 1021–31. e1015

Артикул PubMed CAS Google ученый

15.

Chong DQ, Zhu AX. Пейзаж таргетной терапии холангиокарциномы: текущее состояние и новые цели. Oncotarget. 2016; 19: 46750–767.

16.

Накамура Х., Арай Й., Тотоки Й., Широта Т., Эльзавари А., Като М., Хама Н., Хосода Ф., Урушидате Т., Охаши С. и др.Геномные спектры рака желчных путей. Нат Жене. 2015; 47: 1003–10.

Артикул PubMed CAS Google ученый

17.

Симболо М., Фассан М., Рузцененте А., Маффицини А., Вуд Л. Д., Корбо В., Мелизи Д., Маллео Г., Вичентини С., Мальпели Г. и др. Мультигенное мутационное профилирование холангиокарцином позволяет выявить действенные молекулярные подгруппы. Oncotarget. 2014; 5: 2839–52.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

18.

Гарбер К. Онкометаболит? Открытия IDh2 открывают возможность новых мишеней метаболизма при раке мозга и лейкемии. J Natl Cancer Inst. 2010; 102: 926–8.

Артикул PubMed CAS Google ученый

19.

Штурм Д., Витт Х., Ховестадт В., Хуонг-Куанг Д.А., Джонс Д.Т., Конерманн С., Пфафф Э., Тоньес М., Силл М., Бендер С. и др. Мутации горячих точек в h4F3A и IDh2 определяют отдельные эпигенетические и биологические подгруппы глиобластомы.Раковая клетка. 2012; 22: 425–37.

Артикул PubMed CAS Google ученый

20.

Гоял Л., Говиндан А., Шет Р.А., Нарди В., Блашковски Л.С., Фарис Дж. Э., Кларк Дж. У., Райан Д. П., Квак Е. Л., Аллен Дж. Н. и др. Прогноз и клинико-патологические особенности пациентов с мутантом изоцитратдегидрогеназы (IDH) на поздней стадии и внутрипеченочной холангиокарциномой дикого типа. Онколог. 2015; 20: 1019–27.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

21.

Borger DR, Tanabe KK, Fan KC, Lopez HU, Fantin VR, Straley KS, Schenkein DP, Hezel AF, Ancukiewicz M, Liebman HM, et al. Частые мутации изоцитратдегидрогеназы (IDH) 1 и IDh3 при холангиокарциноме идентифицированы с помощью широкого генотипирования опухолей. Онколог. 2012; 17: 72–9.

Артикул PubMed CAS Google ученый

22.

Saha SK, Parachoniak CA, Bardeesy N. Мутации IDH в пластичности клеток печени и раке желчевыводящих путей.Клеточный цикл. 2014; 13: 3176–82.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

23.

Saha SK, Parachoniak CA, Ghanta KS, Fitamant J, Ross KN, Najem MS, Gurumurthy S, Akbay EA, Sia D, Cornella H, et al. Мутантный IDH ингибирует HNF-4α, блокируя дифференцировку гепатоцитов и провоцируя рак желчных путей. Природа. 2014; 513: 110–4.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

24.

Saha SK, Gordan JD, Kleinstiver BP, Vu P, Najem MS, Yeo JC, Shi L, Kato Y, Levin RS, Webber JT, et al. Мутации изоцитратдегидрогеназы вызывают гиперчувствительность к дазатинибу и зависимость от SRC при внутрипеченочной холангиокарциноме. Рак Discov. 2016; 6: 727–39.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

25.

Эрколани Дж., Ветроне Дж., Граци Г.Л., Арамаки О, Сескон М., Равайоли М., Серра С., Брэнди Дж., Пинна А.Д.Внутрипеченочная холангиокарцинома: первичная резекция печени и агрессивное мультимодальное лечение рецидива значительно продлевают выживаемость. Ann Surg. 2010; 252: 107–14.

Артикул PubMed Google ученый

26.

Смит Г.К. Линейные модели и эмпирические байесовские методы для оценки дифференциальной экспрессии в экспериментах с микрочипами. Stat Appl Genet Mol Biol. 2004; 3: Статья 3.

Артикул PubMed Google ученый

27.

Johnson WE, Li C, Rabinovic A. Регулировка пакетных эффектов в данных экспрессии микрочипов с использованием эмпирических байесовских методов. Биостатистика. 2007. 8: 118–27.

Артикул PubMed Google ученый

28.

Бенджамини Ю., Хохберг Ю. Контроль уровня ложных открытий: практичный и эффективный подход к множественному тестированию. Королевское статистическое общество. 1995; 57: 12.

Google ученый

29.

Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, Mukherjee S, Ebert BL, Gillette MA, Paulovich A, Pomeroy SL, Golub TR, Lander ES, Mesirov JP. Анализ обогащения набора генов: основанный на знаниях подход к интерпретации профилей экспрессии в масштабе всего генома. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2005; 102: 15545–50.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

30.

Джен Ч., Ян Т.П., Тунг Ц.Й., Су Ш, Лин Ч., Сюй М.Т., Ван Х.В. Инструмент оценки сигнатуры (SET): инструмент на основе Java для оценки и визуализации способностей распознавания образцов сигнатур экспрессии генов.BMC Bioinformatics. 2008; 9: 58.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

31.

Гао Дж., Аксой Б.А., Догрусоз У., Дрезднер Дж., Гросс Б., Шумер С.О., Сан Й., Якобсен А., Синха Р., Ларссон Э и др. Интегративный анализ сложной геномики рака и клинических профилей с использованием cBioPortal. Sci Signal. 2013; 6: пл1.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

32.

Cerami E, Gao J, Dogrusoz U, Gross BE, Sumer SO, Aksoy BA, Jacobsen A, Byrne CJ, Heuer ML, Larsson E, et al. Портал cBio по геномике рака: открытая платформа для изучения данных многомерной геномики рака. Рак Discov. 2012; 2: 401–4.

Артикул PubMed Google ученый

33.

Ли Ч., Ван Х., Сео Си, Ким Ш, Ким И. Х, Ким Ш., Ли ST, Ким Д. Г., Хан МК, Ли СО. Связанные с раком генные изменения могут быть обнаружены с помощью секвенирующего анализа желчи нового поколения при холангиокарциноме диффузно инфильтрирующего типа.Опыт Мол Патол. 2016; 101: 150–6.

Артикул PubMed CAS Google ученый

34.

Брэнди Г., Фариоли А., Астолфи А., Биаско Г., Таволари С. Генетическая гетерогенность холангиокарциномы: основная проблема для таргетной терапии. Oncotarget. 2015; 6: 14744–53.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

35.

Ивахаси С., Шимада М., Уцуномия Т., Имура С., Морин Й, Икемото Т., Такасу С., Сайто Ю., Ямада С.Гены, связанные с эпителиально-мезенхимальным переходом, связаны с агрессивным локальным рецидивом гепатоцеллюлярной карциномы после радиочастотной абляции. Cancer Lett. 2016; 375: 47–50.

Артикул PubMed CAS Google ученый

36.

Суреш Р., Али С., Ахмад А., Филип П.А., Саркар Ф.Х. Роль раковых стволовых клеток в рецидивирующем и лекарственно-устойчивом раке легких. Adv Exp Med Biol. 2016; 890: 57–74.

Артикул PubMed Google ученый

37.

Kubelt C, Hattermann K, Sebens S, Mehdorn HM, Held-Feindt J. Переход от эпителия к мезенхиме в парных первичных и рецидивирующих глиобластомах человека. Int J Oncol. 2015; 46: 2515–25.

Артикул PubMed CAS Google ученый

38.

Чжоу Ю.С., Ян М.Х. Факторы, связанные с эпителиально-мезенхимальным переходом в солидной опухоли и гематологических злокачественных новообразованиях. J Chin Med Assoc. 2015; 78: 438–45.

Артикул PubMed Google ученый

39.

Савагнер П. Эпителиально-мезенхимальные переходы: от клеточной пластичности к понятию эластичности. Curr Top Dev Biol. 2015; 112: 273–300.

Артикул PubMed Google ученый

40.

Зекри А.Р., Эль-Кассас М., Саад Y, Бахнасси А., Эль-Дин Х.К., Дарвиш С.К., Абдель Хафез Х., Эсмат Г. Каспасе домены найма. Новые потенциальные маркеры для диагностики гепатоцеллюлярной карциномы, связанной с ВГС, у пациентов из Египта. Ann Hepatol. 2013; 12: 774–81.

PubMed CAS Google ученый

41.

Nakamura S, Matsumoto T, Yada S, Hirahashi M, Suekane H, Yao T., Goda K, Iida M. Сверхэкспрессия домена рекрутирования каспазы (CARD), мембраносвязанная гуанилаткиназа 1 (CARMA1) и CARD9 в первичная В-клеточная лимфома желудка. Рак. 2005; 104: 1885–93.

Артикул PubMed CAS Google ученый

42.

Tan W, Hildebrandt MA, Pu X, Huang M, Lin J, Matin SF, Tamboli P, Wood CG, Wu X.Роль экспрессии связанных с воспалением генов в развитии светлоклеточной почечно-клеточной карциномы и клинических исходах. J Urol. 2011; 186: 2071–7.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

43.

Yang M, Shao JH, Miao YJ, Cui W, Qi YF, Han JH, Lin X, Du J. Передача сигналов CARD9, активируемая опухолевыми клетками, вносит вклад в ассоциированную с метастазами поляризацию макрофагов. Смерть клетки отличается. 2014; 21: 1290–302.

Артикул PubMed PubMed Central CAS Google ученый

44.

Guerreiro AS, Fattet S, Kulesza DW, Atamer A, Elsing AN, Shalaby T., Jackson SP, Schoenwaelder SM, Grotzer MA, Delattre O, Arcaro A. Сенсибилизированный экран интерференции РНК определяет новую роль изоформы PI3K p110γ в медуллобластоме пролиферация клеток и химиорезистентность. Mol Cancer Res. 2011; 9: 925–35.

Артикул PubMed CAS Google ученый

45.

Бао Дж., Ван С., Гюнтер Л.К., Китаджири С., Ли К., Сакамото Т.Связывающий актин белок TRIOBP-4 и -5 способствует подвижности раковых клеток поджелудочной железы. Cancer Lett. 2015; 356: 367–73.

Артикул PubMed CAS Google ученый

46.

Seipel K, O’Brien SP, Iannotti E, Medley QG, ​​Streuli M. Tara, новый связывающий F-актин белок, связывается с фактором обмена триогуаниновых нуклеотидов и регулирует организацию цитоскелета актина.