Статусы в вк нормальные: Короткие статусы в ВК

Взгляни на мир и на это яйцо, ты видишь, что мир похож на яйцо в котором развивается птенец, видишь взаимосвязь с жизнь человека, что он рождается лишь после смерти.

Мусин Алмат Жумабекович

Самые популярные страницы:

Главная засветы девушек видео бесплатно Статус офника статус в вк для подростка статус в вк для подростка статус для оффника cтатусы для офников подпись фото в 16 лет подпись к фото с собакой Коды смайлов для Вк

Источник: status-vk.srgt.ru

Статусы с юмором 2021

Ищу умную, красивую, ухоженную, сексуальную, заботливую девушку для создания серьёзных отношений по четвергам.

Wikipedia: Я знаю всё! Google: Я найду всё! ВКонтакте: Я знаю всех! Internet: Без меня вы ничто! Электричество: Молчать, суки!

-Лапшу мне на уши вешает, вешает… — А ты что в ответ? — А я ему эту лапшу на рога наматываю, наматываю..

Скажи, что у тебя есть хламидомонада — и никто не поверит, что это — обычная зеленая водоросль.

Да плюньте вы на свои бицепсы, нормальные пацаны давно уже качают нефть!))

Песенка кота:Я иду по комнате словно чумачечий!Потому что я нагадил в тапок человечий!

Прежде чем спасти мир — нужно сбежать из лечебницы :)))

Трудно найти человека,с которым у вас в голове тараканы одного вида.

Почему в автобусах призывают уступать место только пожилым, беременным и с детьми… А как же девушки на 14-сантиметровых шпильках?

99% детей из «Соломки» делают сигареты.

xx: Какой у тебя номер телефона?? yy: Такой же, как у тебя, только цифры другие.

Непонимаю одноклассников, уже пятый урок, а они все еще спрашивают «Какое сегодня число?»

В гостях у студента: «А у меня из чая есть только кофе и то соседский»)))

бляя…люди..таак хорошо…в темноте сижу в пледу, пью чаёк и смотрю ужастик на компе…вот она пятница )) идеальная разгрузка после трудовой недели)

… на 100 % уверен, что ты сейчас читаешь мой статус

Быстрее бы отрос мой натуральный цвет волос, чтобы снова покрасится.

Когда я пел — оркестр плакал=)

Мама нашла у меня презервативы и сигареты,что ей сказать? -скажи,что после секса нужно покурить.©

Доктор, а шестилетняя девочка может забеременеть? -Ну, что ты, Вовочка, конечно же нет. -Ууу, шантажистка!..

Среди поэтов практически не встречаются люди с именем Антон, потому что ненависть к рифмованию у них заложена с детства.

Списать куда проще , чем самому решать как не крути, а я задолбалась выбирать сложные пути.

3D фильмы, 3D бритва, 3D журналы что потом?? 3D трусы? одел очки и ваау ты в трусах!

Мне надело искать тебя в списке друзей-чтобы зайти на твою страницу… давай поставим СП чтобы мне быстрее было ?

Где-то на белом свете, там, где всегда мороз. Трутся спиной медведи, чешется, небось.

Статусы с юмором в контакте встречаются буквально на каждом шагу. Они могут быть абсолютно на любую тему, например, про жизнь, любовь, школу, сессию, студентов, блондинок, дружбу, женщин, мужчин, про различных персонажей фильмов или мультфильмов и т.д . Особенно в наше время популярны статусы про конец света, политику и кризис (шутки про курсы валют и др.).

Статусы с юмором на Одноклассниках встречаются весьма разнообразные. Добавляя к себе свежие шутки, каждый стремится сделать свою страничку увлекательной и интересной. Чаще всего тематика статуса соответствует наболевшим проблемам людей на работе или в семье, к которым они стараются отнестись с иронией.

Статусы с юмором в аське уже давно пользуются огромной популярностью среди пользователей. Весьма удобно найти какую-нибудь шутку, будь то новый анекдот или уже всеми известная истина, «прошитая» тонким юмором, и поделиться ею с друзьями и знакомыми, чтобы посмеяться вместе с ними и поднять друг другу настроение.

про жизнь, про дружбу, про любовь

Нет интересных мыслей для статуса? Не теряйся. Выбери себе классный статус из подборки статусов для парней. Всего пару строк, и все узнают, какое у тебя сейчас настроение. Готов ли ты к общению, либо лучше тебя не беспокоить.

• Главное ведь не кольца, главное с невестой не ошибиться.
• Кровь это не то что течёт в твоих жилах. Это то что брат отдаст за брата!
• — Девушка, ваши документы? — Вот. — А где техпаспорт??? — Каких тех? я одна еду!
• Вчера лег около 2х – не выспался. Сегодня лягу около одной!
• Сидел на паре, кушал Twix, и тут мне одногруппница кричит: «Кинь мне палочку!». Я чуть не подавился.
• Ненавижу когда девушки пишут “меня трудно найти и легко потерять”! Вы чё, носки?
• женщины трогательные существа….трогал бы и трогал…!)
• Всё чаще понимаю, что корень слова “влюбляться”, далеко не “люб”, а “бля”
• Подойдешь к девушке — подумает «очередной бабник», не подойдешь — «очередной тормоз»…
• Мужчина любит ненавидеть, вот что нас отличает от женщин…
• пап гляди, а дядьки пьют пиво с раками, да нет …это у них морды такие…
• Брат может не быть другом, но друг всегда брат…
• В голове её опилки, не-бе-да! А вот в лифчике — бумага… это да(
• Держи нож при себе для защиты, а не для брата…
• В пятьдесят лет мужчина более опасен, чем во всяком другом возрасте, ибо обладает дорогостоящим опытом и часто состоянием.
• Делай с другими то же, что они собираются сделать с тобой: бей первым
• Самый лёгкий способ отмазаться от девушки: «Прости, я тебя не достоин»…
• Верить в наше время нельзя никому. Даже себе. Мне — можно
• Первая машина должна быть отечественного производства. Её бесконечные поломки помогут тебе разобраться во всех механизмах.
• Давать советы всегда плохо, но хорошего совета вам никто не простит
• — Ты лицемер, эгоист и засранец! — Я всегда так этим гордился.
• Сбили с ног — сражайся на коленях!
• Встать не можешь — лёжа наступай!
• Верность для мужчины – как клетка для тигра. Она противна его природе.
• Мы поколение людей, у которых частота сердцебиения зависит от имени, высветившегося на дисплее телефона…
• Нет ничего сексуальнее, чем наличие у девушки мозга, который ещё и функционирует.
• Мы в ответе за тех, кого напоили…
• Ты мне нужна совсем чуть-чуть: всего лишь очень сильно, слишком часто и каждый день)
• Стыдно не обижать, стыдно быть обиженным!!
• Я думаю, что брюки важнее для мужчины, чем жена. Есть много мест, куда можно спокойно отправиться без жены. А куда можно пойти без брюк?
• Или голова в кустах, или грудь в крестах
• И ты дала, а я просил только прикурить…
• Пришел,увидел… посмотрел на всех особым взглядом и все подумали что ты победитель!На корпоративной вечеринке все так сильно напились, что я случайно переспал с женой.
• Если долго хранить верность, она может испортиться!
• Если девушка задает вопрос «как на личном?», значит ты ей небезразличен.
• Сексом сыт не будешь! Ды и борщем не натрахаешься! Как быть?
• Любовь — это заблуждение, будто одна женщина отличается от другой.
• Борьба есть условие жизни: жизнь умирает, когда оканчивается борьба…
• Слабые мужчины любят сильных женщин. Сильные мужчины любят слабых женщин… И только настоящий мужчина любит женщину такой, какая она есть.
• Пусть ненавидят, лишь бы боялись…
• — Куда это твоя? — Да не парься, она на шпильках, далеко не убежит.
• Нас не сбить с пути – нам похеру куда идти.
• Когда все ещё любишь бывшую, то любого порвёшь за неё, даже того с кем она сейчас!
• Обидеть меня – раз плюнуть! Вот только плевать придется кровью…
• Сегодня мне показалось, что я скучаю по тебе. Но потом я вспомнила, что ты мудак, и всё сразу стало нормально.
• Уж полночь близится, а близости все нет.
• — Я сегодня не выспался… — А причина? — Причина тоже не выспалась…
• Женщина – как любимый свитер, ты его любишь, но на хрена он тебе в Турции!
• Я не бабник, я просто люблю женщин.
• Наше дело не рожать сунул вынул и бежать!
• Без тебя сегодняшние чувства были бы лишь обрывками вчерашних.
• Не покоряйся беде, но смело иди ей на встречу…
• Учитесь разговаривать с мужчинами. Не клянчить, не дуть губки, не устраивать истерики, а разговаривать. Это почти так же хорошо, как минет!
• Вот смотрю я на тебя и думаю — еще выпить или ты мне уже нравишься…
• Я не прошу много просто пусть все будет по моему!
• Во у кого железная выдержка! Бабушки торгующие семечками… Просто гиганты силы воли, сидеть перед семечками и не есть их!
• Счастье не в тех женщинах, с которыми хочется спать, а в тех, с которыми хочется просыпаться.
• Живи, люби, кради, гуляй, купи весь мир потом отдай! всегда лишь помни вещь одну не забывай свою братву!
• Меня невозможно сбить с пути. Мне пох*ю, куда идти.
• Если вы думаете, что женщины слабый пол, то посмотрите как они закрывают двери в маршрутке…
• Подари мне букву “И”. Она классная. Ей можно соединить все, что хочешь: небо и землю, день и ночь, тебя и меня…
• Как всякий мужчина, я ношу при себе орудие насилия!
• Только настоящий друг может терпеть слабости своего друга…..
• Простите, девушка, вы случайно не знаете, что едят девственницы на завтрак? – Без понятия. – Я так и думал!
• Она была восхитительное, красивое пустое место.
• Не говорю прости, не говорю прощай… по-прежнему люблю тебя, ты всегда это знай…
• Невозможно всегда быть героем, но всегда можно оставаться человеком…
• Ничто так не будит по утрам, как чувство, что сейчас обоссышься…
• Когда выхода нет, иди на крайние меры. Не теряй веры не первый ты, не последний ты.
• Да твоими бы устами да х*й сосать часами…
• Брат прикроет тылы, ты будь готов прикрыть брата.
• Никогда не ставь грустные статусы… Ведь каждая скотина мечтает увидеть, как тебе паршиво…
• Любишь трахаться — люби и сумерки смотреть.
• Я твою верность мне блюл, блюду, и блюд буду…
• Если вы ощущаете тяжесть в желудке, значит, слишком много женщин ищет путь к вашему сердцу.
• Ты не первый не последний в схватке но помни всегда с тобой твоя братва!
• Современный студент вместо подготовки к сессии ищет в сети красивый афоризм про п*здец, чтобы поставить в статус…
• Кто не признал поражения, тот не побежден.
• Единственная девушка за которой я буду бегать, будет кричать убегая:» Пап догоняй!».
• Бывает в жизни так тоскливо, что даже чай не лезет в глотку
• А лезет в глотку только пиво, которым запиваешь водку…
• Налево пойду — домой не попаду. Направо пойду — налево не успею.
• — Мне тебя не хватает! — Правда?! — Да, солнышко… Пора ещё одну бабу заводить.
• Какая разница между свиньей и мужчиной? Свинья НЕ превращается в мужчину после пьянки
• Сука, да тебя даже послать некуда – везде уже была…
• Ищу не пьющую, не курящую, по ночям не гуляющую, и походу не существующую…
• Каждому своё, а что своё то не каждому!
• Кто любит горячих парней?.. у меня 39 и 9
• Бессонница – это когда рядом спит девушка в одних трусиках, но ты пообещал не приставать.
• Лучше гнать чем быть гонимым!
• И не говори мне, что ты ночевала у своих подруг! Я ночевал у твоих подруг, тебя там не было!
• Мужчинам давно пора понять, что только снежным бабам противопоказано много тепла.
• Помнишь, как на хате пили дешевый виски? Я был самым близким, а теперь в черном списке.
• «Не льстите себе, переспав с крутой фотомоделью. Может, ей просто интересно? Как это? С лохом?!»)))
• Раньше в моей квартире тоже происходили странные вещи: билась посуда, я слышал ужасные крики по ночам, а потом развелся и все прошло…
• Мужчины как туфли — либо удобно, либо эффектно..и то и другое вместе — никогда!)))
• Живу с девушкой. Раньше всё валялось на своих местах, а теперь аккуратно сложено неизвестно где.
• Мужчины как унитаз, то весь в говне, то вечно занят…
• — Дима, мы не подходим друг другу, извини. — Ты тоже считаешь, что ты меня недостойна?
• Не пью, Не курю,матом Не ругаюсь…ой бл* бычок чуть в рюмку не уронил…
• — Понимаешь, она такая… такая… — Ну какая такая? — Вот увидел её — и в штанах сразу стало тесно… — Спереди или сзади?
• Настоящий мужчина считает носки не одеждой, а обувью…
• — Ты красивая, но не в моем вкусе. — Это как понять? — Я бы с тобой переспал, но не влюбился бы.
• — Истеричка. — Я не истеричка! — Да, а кто ты? Пока я спал, ты со мной поссорилась.
• Мужчины любят красивых и недоступных…..пойду накрашусь и запрусь в сейфе….))
• Девушки, браво! Выкрутитесь из любой жопы! Еще и нас заставите извиняться!…
• Мужчина — как клубок: когда женщина выпускает его из рук, он распускается, а когда берет его в руки, он сматывается…
• Я пью не больше ста граммов, но, выпив сто грамм, я становлюсь другим человеком, а этот другой пьет очень много.
• Идеальный мужчина не пьёт, не курит, не играет в азартные игры, не смотрит на других женщин, никогда не спорит и ……
• Когда мужчины молчат, они руководствуются 2-мя принципами: 1. «Все и так понятно, хуле тут говорить». 2. «Хуле говорить, если нихера непонятно».
• Объявление.Отдам парня в хорошие руки. 20 лет, не пьет, не курит, матом не ругается, звонит каждый день, выгуливать
• Каждый мужчина хочет, чтобы у него была умная, добрая, верная и красивая девушка. Но все это заканчивается, когда умная узнает о доброй, а верная о красивой.
• Раньше мужчины при встрече снимали шляпы… А теперь вытаскивают из уха наушник..)
• Хотел взяться за ум, но оказалось, что слишком поздно. Ум успел одичать и в руки не даётся.
• Мужчины как…Тушь…Они также смываются при первом проявлении эмоций…
• Дорогие девушки! У вас сухая кожа? Редеющие волосы? Кривые ноги? Приходите к нам, у нас темно и мы уже пьяные)
• А уходить мужчина должен красиво, как и приходить… То есть навсегда…
• Если женщина мнётся, надо её погладить.
• Я не отдам тебя никому! Даже Господу Богу! Я такую устрою войну – к тебе все забудут дорогу!
• Лечу от месячных, гарантия 9 месяцев!

Я тоже был ей другом. Пока не зашло слишком глубоко. Ну то есть далеко…

Если вас трамвай задавит… вы конечно вскрикнете! Раз задавит, два задавит… а потом привыкнете!

Обычный мужчина заставляет свою девушку нервничать из-за других женщин. Настоящий Джентльмен заставляет других женщин нервничать из-за его девушки!

Когда я вижу красивую девушку в старой и дешевой машине, я всегда думаю – что же у нее в жизни пошло не так?

Отец семерых дочерей в отчаянии назвал восьмую Серегой.

Ну, как такое возможно – женщины могут вылить себе горячий воск на ногу и отодрать вместе с волосами, но при этом боятся пауков?

Настоящий друг – это тот, кто на фразу:” я убил” отвечает:”где труп?”.

Если женщина не хочет заниматься сексом, то у неё болит голова. Если мужчина не хочет заниматься сексом, то он бездушная сволочь.

Я обожаю людей, которые кидают понты и выставляют себя напоказ. Я с 6 лет в цирке не был, но этих клоунов вижу регулярно.

Влюбился с первого взгляда. Потом понял, что надо было посмотреть хотя бы дважды…

Женские стринги похожи на колючую проволоку – не дают проникнуть, но дают возможность смотреть!

В холодильнике холостяка есть все, чтобы приготовить пельменную яичницу с пивом.

Коротко о себе: недостаточно хорош для тех, кого хочу я. Слишком хорош для тех, кто хочет меня.

Ты хамишь так, как будто у тебя в кармане лежит запасная челюсть…

Фраза о которой порой мечтает каждый мужчина: хватит романтики, трахни меня!

Жизнь как зебра: полоса черная, полоса белая, полоса черная и… жопа.

То, что у писсуара неудачный дизайн понимаешь, только когда одет в шорты и босоножки…

Смех над своими ошибками может продлить тебе жизнь, а вот смех над ошибками жены – укоротить!

90% мужчин, узнав об измене жены, собирают вещи и уходят к любовнице.

Женская логика: если девушке нравится парень, то она не будет ничего делать по этому поводу, а только ждать когда он волшебным способом вдруг поймет это сам и сделает первый шаг!

Бесят те, кто говорит: «Я люблю дождь, в нём можно спрятать свои слёзы», а я люблю душ — в нём можно поссать!

Я настолько смелый и дерзкий, что могу ходить в туалет по большому в гостях!

Ничто так не бодрит с утра, как чашечка кофе, пролитая на живот!

Я лежу на диване не потому, что я ленивый, просто шестое чувство подсказывает мне, что по телевизору вот-вот объявят что-то важное!

Уверен, что есть только две вещи, с которыми согласятся все мужчины – сиськи!

Если мама считает, что вы много едите и много спите, значит, это не ваша мама, а её мама.

Женщину надо любить за ее личность. У каждой есть не менее 10, так что есть из чего выбрать.

А Вам не кажется, что вы худеете без буквы «д»?

Однажды ты спросишь, что я люблю больше: борщ или минет. Я скажу «тебя!». Я – хитрый.

Холостяцкая яичница: открыл холодильник, почесал яйца, закрыл холодильник.

Ну, как можно строить честные отношения с девушкой, которая носит лифчик пуш-ап?

Как бы так сделать, чтоб я был таким же привлекательным для женщин, как для комаров?

Фотография жены в моём бумажнике напоминает мне о том, что на этом месте могли бы быть деньги.

«Ты был прав!» – как утверждает статистика эту фразу еще не произнесла ни одна женщина.

Пиво — это еще одно доказательство того, что Господь любит нас и хочет, чтоб мы были счастливы.

Купил камаз и не жалею. Никого не жалею…

Семочки как секс, пока не кончишь не успокоишься!

Научный факт – девушки, если парень запомнил цвет ваших глаз после первого свидания, это означает только то, что у Вас маленькая грудь!

Лифчики пуш-ап очень похожи на пачку чипсов – открываешь, а внутри почти ничего!

Папа Карло посадил дерево, из дерева вырастил сына, а из сына построил дом. Вот это мужик!

Узнать, что твоя бывшая девушка набрала 20 кг, все равно, что найти 20 евро в кармане – жизнь не изменит, но настроение точно поднимет!

Жена просила НОРКУ. Три дня копал. Надеюсь, понравится.

Самый быстрый способ привлечь внимание девушки – перестать обращать на нее внимание!

Если девушка утром вам прислала смку «Милый ты лучший», значит этой ночью она вас с кем то сравнивала.

Уровень разводов среди моих носков иногда приводит меня в ужас!

Считается, что в социальных сетях больше времени проводят женщины, и так называемые мужские статусы — это тоже их рук дело. Однако многие из них попадают в самую точку, а кто их написал на самом деле — уже вещь второстепенная. Несмотря на все это, многие высказывания, отражающие мужскую точку зрения, являются интересными и заставляют задуматься, а иногда просто улыбнуться.

Мужские статусы

Некоторые статусы могут носить достаточно феминистский характер, быть грубоватыми и беспардонными. Другие могут быть более лирическими и воодушевляющими. Мужские статусы разные, как и сами мужчины. Вот некоторые из них:

• Если бы мужчины встали и были мужчинами, то женщины бы сели и там бы и оставались.
• Для мужчин, которые думают, что «женское место на кухне»: просто помните, что там ножи хранятся!
• Есть разница между желанием и необходимостью. Я хочу хотеть тебя, а не нуждатья в тебе.
• Нет проблем с поиском девушки, есть проблема с поиском человека.
• Если бы Бог хотел, чтобы мужчина был над женщиной, он бы сделал ее из кости ноги. Вместо этого он сделал ее из ребра, чтобы держать близко к сердцу.
• Мужчины иногда спрашивают: «Что случилось?», хотя они в действительности не хотят услышать ответ.

Про отношения

• Мое отношение основано на том, как ты относишься ко мне.
• Пожалуйста, не прерывай меня, пока я тебя игнорирую.
• Моя жизнь, мои правила, мое отношение.
• Людям со статусом не нужен статус…

• Я — горячий парень с прохладным отношением.
• У меня есть новая теория в жизни: что другие люди думают обо мне — это действительно не мое дело!
• Это не мое отношение, это мой стиль.
• Будь лучшей версией себя…

• Не надо ненавидеть, просто узнайте меня получше.
• Печально, но правдиво, что некоторые люди просто стареют, а не растут.
• Я не оскорбляю людей, я их описываю.

Великие мужчины о смысле жизни и не только

Мужские статусы про жизнь со смыслом не вертяться лишь вокруг самого мужчины и его отношений с женщинами, многие их них являются достаточно серьезными, а иногда и мудрыми. Можно их сочинять самому, а можно взять на вооружение мысли известных и великих людей своего времени, которые до сих пор не утратили своей актуальности.

• Жизнь без ошибок — это как образование без книг.
• Все люди, которые добились многого, были великими мечтателями.
• Почти все мужчины способны выдержать удары судьбы, но если вы хотите проверить характер человека, дайте ему власть. (Авраам Линкольн)
• Великие вещи случаются, когда мужчины и горы встречаются. (Уильям Блейк)
• Мудрость, сострадание и мужество — три общепризнанных моральных качества мужчины. (Конфуций)
• Повехностные люди верят в удачу. Сильные и серьезные — в причину и следствие. (Ральф Уолдо Эмерсон)
• Женщины и кошки будут делать, как им заблагорассудится, а мужчины и собаки должны расслабиться и привыкнуть к этой мысли. (Роберт А. Хайнлайн)
• Наши научные силы превзошли наши духовные силы. У нас есть управляемые ракеты и обманутые люди. (Мартин Лютер Кинг-младший)

Про любовь

Каким бы самодостаточным ни был мужчина, ему для настоящего счастья все равно нужна женщина. Чтобы добиться избранницы, одних только слов недостаточно, но и лишними они не бывают. Вот некоторые романтичные мужские статусы про любовь к девушке:

• Если я и знаю, что такое любовь, то только из-за тебя.
• Я люблю тебя не за то, кто ты есть, а за то, кто я рядом с тобой.
• Когда мы влюблены, мы совершенно не те, кем мы были раньше.
• Любовь — это когда все, что вы хотите, чтобы этот человек быть счастливым, даже если вы не часть его счастья.
• Лучше любить и потерять, чем не любить вообще.
• Искусство любви — это во многом искусство настойчивости.
• Фортуна и любовь благоприятствует храбрым.
• Люди дышат кислородом, а я — тобой.

В сети полно статусов на любой вкус и цвет, их с каждым днем становится больше. Человеческая мудростьи фантазия поистине не имеет границ и пределов. Наверное, прикольные мужские статусы сочиняют женщины, которые часами просиживают в социальных сетях. По меньшей мере, так говорят мужчины…

Крутым парням — крутые статусы!

***
Мужчина должен быть как дорогой коньяк — недоступный и неподходящий для всех. Его крепость и вкус должны знать единицы, если знают его на вкус многие, то это уже не коньяк — это пиво разливное…

***
Всё будет путём, а виноватых найдём…

***
Парню проще сказать ***шлюха***чем ***я завидую тому, кто её может себе позволить***

***
Мужчина любит ненавидеть, вот что нас отличает от женщин…

***
— Вам кофе в постель? – Нет, мне в кружку.

***
Мужчинам давно пора понять, что только снежным бабам противопоказано много тепла.

***
Только тогда парень поймет,как дорога ему девушка,когда увидит ее с другим…

***
Мужчины как часы-нужно заводить каждый день

***
Уходя на тот свет, не забудь выключить этот.

***
Когда мы умрем в один день, я тебя в рай на руках отнесу!

***
А уходить мужчина должен красиво, как и приходить… То есть навсегда…

***
Ну и парни сейчас пошли…звони первая,пиши первая…может домой заехать и цветочки занести???

***
Мужчины делятся на два вида: Сволочь обыкновенная и Сволочь необыкновенная!

***
Пусть всё проходит мимо, кроме любви, денег и интима!

***
Пусть мужики думают, что они умнее нас. Пусть думают, что талантливее, способнее, удачливее, зарабатывают больше. Пусть. Но сиськи, сиськи-то У НАС!

***
Как довести девушку до сумасшествия? дать ей кучу денег и закрыть все магазины!

***
Он просто наглец! Когда я сказала ему, что не хочу его видеть, он взял и выключил свет…

***
Слушай сюда,жертва нетрезвой акушерки!

***
Родной, в какое место тебе засунуть сникерс, чтоб ты реально перестал тормозить?!

***
Самая тяжелая работа у носков… они реально целый день на ногах!)

***
Я все объясню на пальцах… видишь, средний…

***
Почти каждый парень, знакомя свою девушку с друзьями, под фразой»Знакомьтесь, это моя девушка» подразумевает другой смысл слов. «Это все мое, пацаны. Ну-ка оцените» —— статусы

***
Если мужчина назвал женщину стервой, значит он потерял всякую надежду назвать ее дурой

***
Водки не обещаю, но погуляем на славу. Иван Сусанин.

***
Твои голубые глаза напоминают мне бескрайний океан, в который так приятно нырнуть и забыть обо всех проблемах.

***
В конце концов, среди концов найдешь конец ты, наконец.

***
Помни: чем симпатичнее парень, тем меньше ему можно доверять. Это закон!

***
Первое правило настоящего мужчины: не ленись стирать носки и смски…

***
Оторвал таракану все лапки,сказал «беги!» – не бежит.

Месяц назад женился. Сегодня жена готовит борщ. Первый борщ в её жизни! — Главное, чтобы не последний в твоей. =)

Статусы про брата — красивые, грустные, прикольные и смешные статусы для ВК

Статусы про брата — Если братишка рядом, то враги падают градом.

— Все люди-братья! — Точно! И живут так, будто делят между собой наследство.

Мне иногда кажется, что брата воспитывали не мои родители: как—то чересчур не похожи наши воспитания!

Как хорошо, что по известному мне адресу живет человек, которому можно позвонить в любой момент и на вопрос «Ты меня любишь?» услышать «Конечно, сестренка!».

Брат — это не временное понятие, временное — это ваши ссоры с ним!

Если в детстве нас с братом считали заядлыми врагами, то теперь нас смело можно назвать закадычными друзьями!

Брат может быть не прав, но от этого он не перестает быть братом.

Исповедуюсь я только брату: он хоть и не всегда ангел, зато всегда поддержит и поймет.

Хоть в детстве с братом все время воевали, теперь мы выросли и стали лучшими друзьями! Приятно и весело вспоминать былое!

Иногда я думаю, что брат – это слившиеся воедино ангел и черт… причем мои же!

— Друг лучше или брат? — Брат, когда он и друг, — лучше.

Мой брат вырос и переехал от нас. Даже за компьютер теперь сажусь без удовольствия!

Папа научил быть гордой, мама научила быть леди, а брат ничему не учил, он просто сказал: «Обидят — порву!»

Самый лучший друг и личный охранник, который никогда не оставит и конечно поддержит в трудную минуту – родной братик.

Если от некоторых слово «братан» звучит приятно, но от других — противно!

Брата забрали в армию. Так одиноко стало и грустно, как будто от тебя оторвали какую-то важную часть.

Братишка, будь сильным, ведь в жизни много препятствий, которые нужно преодолевать.

В мире есть только два нормальных парня, но один мой папа, а другой брат.

Он никогда меня не обижал, на мой День рожденья покупал мне цветы и любимые конфеты, с ним я могу откровенно поговорить обо всём, просто это мой любимый братик!

Держитесь друг за друга, брат за брата, и будет все пи*дато!

Родители меня учили быть всегда кроткой и нежной девушкой, однако они не предусмотрели один вариант: с братом быть такой порой очень сложно!

Больше всего на свете люблю старшего брата! мы с ним живем душа в душу, кулак в глаз, пятка в ухо!

Хочу получать от своего любимого столько же любви и заботы, как от родного брата!

Кто-нибудь еще ревнует своего брата к его подружкам?

Одиночество — это когда понимаешь, что кроме маленького братика тебя никто слушать и не будет..

Друзья часто появляются в твоей жизни и исчезают, а брат – это навсегда! Приятно это осознавать! Цените друг друга!

Брат сестре: — Ты чего плачешь? — Песня грустная — Скажи своему певцу — увижу голову оторву!!!

Брат в детстве меня много пугал. Теперь сам не рад этому. А я ведь ему говорила, что я быстро учусь…!

Он никогда не изменял мне, всегда говорит о том что я красивая, обнимает меня всегда, покупает мне мороженое и разные сладости, носит на ручках и просто любит меня! Он мой брат!

Отборные злые статусы вк. Злые цитаты Злые статусы про жизнь

Самые злые цитаты и фразы

• Если убить убийцу, количество убийц не изменится.
• Образование делает хорошего человека лучше, а плохого — хуже. (Фуллер)
• У короткого ума — длинный язык. (Аристофан)
• — Мне наплевать, что вы обо мне думаете. Я о вас не думаю вообще. (Коко Шанель)
• Вами управляет тот, кто вас злит. (Лао-Цзы)

Некоторые люди – просто злые, и лишь самые сильные из них становятся такими по своей воле. Об этом и не только – в злых статусах Вк.

Любое зло – от недостатка любви

1. Статистика подтверждает, что любой кусок какашки обязательно строит из себя конфетку Рафаэлло.
2. Некоторым людям так и хочется… сварить травяной настой на травах. А некоторых просто хочется этими травами отдубасить.
3. Если тебя пытаются затоптать, подумай, стоит ли обижаться. Может, у человека вообще нет больше никаких способов возвыситься.
4. Человеку так сложно просто сделать что-то для другого. Но если припугнуть кармой – то запросто.
5. Молчание – золото. Но как же дорого оно стоит…
6. Люди, обещавшие написать, и мирно сидящие в онлайне, попадают в ад вне очереди.
7. Я никогда не держу в душе зла: просто отдаю его кому-нибудь другому.
8. Вот можно встать не с той ноги, а можно родиться. Улавливаешь разницу?!
9. Не сквернословь, если не знаешь, как это делать красиво.

Самый страшный человек – друг, ставший предателем

Справедливость может постичь каждого из нас. Её ни в коем случае нельзя оставлять безнаказанной: нужно по максимуму использовать злые статусы Вк.

1. Думая над тем, что ты для меня сделал, замечаю, что несколько лет за убийство – не так уж много.
2. Предатели имеют свойство появляться тогда, когда всё плохо и без них.
3. Одиночество – это когда даже кот не хочет спать в ногах.
4. За моё «хамство» вы ещё поблагодарите: я ведь бесплатно составляю вам описание.
5. Я бы хотел каждое утро просыпаться вместе с любимой, но пока просыпаюсь только с желанием умереть.
6. Я не буду утешать себя мыслью тем, что меня обсуждают только ограниченные. Если узнаю – ограничу их ещё больше.
7. Да я и не жду, что вы меня поймёте. Без мозгов-то этого не сделаешь…
8. Ты можешь выучить хоть все боксёрские приёмы, но на вопрос «Чё ты такой дерзкий» найти ответ обязан.

Уметь портить жизнь – талант

Злые статусы про жизнь расскажут про боль, невезение и неудачи совсем другими словами. Возможно, тогда все они окажутся не такими значимыми…

1. Моё поведение, может, и не приводит в восторг, но многих заставляет заткнуться.
2. Если мне надо – я точно буду мило улыбаться. Но брань, которой я ругаюсь при этом в уме, неизвестна очень многим.
3. На твоё «прости» могу лишь сказать «Ничего страшного». Точнее – написать. Ещё точнее – гвоздём на твоих дверях.
4. Задумайтесь, ведь каждый из нас немного испортил жизнь другому.
5. Я очень легко обижаюсь, очень легко «отхожу», и очень долго выстраиваю планы мести.
6. Может, добро и побеждает зло, но точно у кого-то другого.
7. Люди, страдающие по моей воле, знайте: в тот миг я просто была голодная.
8. Как только Елена поняла, что ей мешает не что иное, как её совесть, она сразу же от неё избавилась. И ой как не пожалела!

Зло не дремлет

Плохого, как и хорошего, в нашей жизни хватает. Главное – брать для себя нужное. А всё плохое – оставить в злых статусах про жизнь со смыслом.

1. Люди так расслабленно бросают слова на ветер, что я когда-нибудь тоже расслаблюсь, и брошу в них чем-нибудь потяжелее.
2. Бойтесь полных женщин на диете – они уже злые и ещё могут хорошо дать по башке.
3. Тот, кто криво составляет расписание в универах – попадает в ад без очереди.
4. Ты просто высказал своё мнение, на которое имеешь полное право. А я просто купил бензопилу и запомнил твой адрес.
5. Я вот не пойму, то ли пойти покормить голубей, то ли кого-нибудь пристрелить…
6. Он хотел свободных отношений, но крайне удивился, когда был послан на три буквы. Вывод: мечты сбываются.
7. В общем, я человек тихий, но одно кривое слово о моей маме – и я готов убивать.
8. Если я пытаюсь создать хорошее впечатление, то я не обязательно буду продолжать это делать, когда меня обижают.

Следить за тем, что говоришь – выгодно

Прожить жизнь, не встретив ни одного нехорошего человека – нереально. Для каждого из них необходимо держать злые короткие статусы.

1. Особые приметы: слушает музыку через динамик.
2. Растаял снег и показался бывший.
3. Психанул, и вместо ручки реально забыл голову.
4. Ветра перемен на тебя нету.
5. Нервному человеку точно не нужен дорогой телефон.
6. Застенчивость хуже бестактности.
7. Я не плачу, просто имитирую фонтан.
8. Это ты виноват в том, что скучаю.

Слова, на которые обычно отвечают уже не словами

Для того чтобы конфликт был исчерпан, его необходимо вовремя закончить. И, конечно же, закрепить очень злыми статусами.

1. Не стоит брать всё так близко, может у обидчика просто скудная сексуальная жизнь или вообще – её отсутствие.
2. Смотрю на вас и чувствую, как у меня возникает комплекс полноценности.
3. На самом деле парни боятся связываться с хорошими девушками. Понимают, гады, что одно место сразу слипнется.
4. Я вовсе не жалею, что ты ушёл: просто каждой тряпке нужна своя швабра.
5. Не учите меня жизни, и я не буду учить вас правилам правописания.
6. Да что вы, мне до вас ещё долго опускаться…
7. Я знаю, что ты говоришь это чисто из-за комплексов. Но ты знай: я завтра тебя прощу, а комплексы с тобой так и останутся.
8. Запомните, девочки: каждая курица должна кудахтать в своём курятнике.

Наполняйте статусную строку интересными фразами.

Иногда статус “злой” и хмурый смайлик могут больше поведать о настроении и жизненной ситуации человека, чем все слова в мире. Но иногда нужно дать людям понять, о чём вы думаете и на что злитесь: читайте самые злые статусы про жизнь в этой статье.

Злые статусы про жизнь

1. Самый раздражающий тип людей – это те, которые всегда спрашивают «Что нового», хотя понятия не имеют, что у меня было старого.
2. Запомните пожалуйста! Когда вам говорят, что вы далеко пойдёте, они подразумевают, чтобы вы проваливали!
3. Я очень люблю людей вокруг меня. Но ещё больше я люблю врать о том, что я люблю людей вокруг меня.
4. Мужчины делятся на три вида: те, которые разбивают сердце, те, которые разбивают душу, и те, которые разбивают лицо.
5. Хотите меня обидеть? Это раз плюнуть. Только плеваться придётся кровью.
6. Меня считают злопамятным, но это не правда. Я просто злой, с хорошей памятью.
7. Любовь — это надолго. Но ненависть — это навсегда
8. Я давно простила всех своих врагов и желаю, чтоб у каждого из них было по три машины: скорая помощь, полиция и пожарная.
9. Прости меня за все эти бессмысленные ссоры из-за того, что ты тупая дура.
10. Моё настроение делится на две части: “Меня никто не любит!” и “Я вас всех ненавижу…”.
11. Вся моя жизнь в двух словах: порвать новые джинсы, потянувшись за упавшей монеткой.
12. Я никогда не хамлю — просто даю понять, кто вы есть.
13. Я могу простить, но забыть — никогда.
14. Те, кто на плевки в спину философски отмечают, что зато они впереди, просто никогда не пробовали обернуться и сломать твари нос.
15. Интересно, почему все уроды в мире так ополчились именно на меня?

Злобные статусы про людей и про жизнь

Мы часто злимся на работу, на окружающих нас людей, на свою жизнь и даже на самих себя. Иногда это получается оформить в виде короткого высказывания, иногда – нет. Здесь мы привели самые злые статусы про жизнь со смыслом, которые 100% выразят ваше эмоциональное состояние.

1. У меня вопрос ко всем тем, кто сверлит стены по утрам в выходные — вы ненавидите всех людей, живущих с вами в одном доме, или персонально меня?
2. Когда хороший человек делает хороший поступок, это воспринимают как само собой разумеющееся и никак не поощряют. Когда плохой человек делает хороший поступок, это воспринимают как чудо и осыпают золотом. Тогда интересно: почему, когда хороший человек делает плохой поступок, ему прилетает сильнее, чем плохому?
3. Времена меняются, сменяются дни, годы и целые эпохи, приближая нас к светлому будущему. А моя жизнь как была говном, так и остаётся, и будет говном тоже.
4. Когда я получаю зарплату за месяц, где-то смеётся один олигарх.
5. Мне кажется, что цены на услуги ЖКХ специально выставлены таким образом, чтобы у человека после их оплаты не осталось денег на покупку автомата калашникова.
6. Люди делятся на два типа — те, у которых есть время, но нет мозгов, и те, у которых нет даже времени.
7. Прости за все проблемы, которые я тебе принесла. Нет, нет, спасибо — можешь не возвращать!
8. Вы как обычно ошибаетесь насчёт меня. Так что, пожалуйста, закройте ваш ошибальник!
9. Работа — п***ец, настроение — п***ец, в личной жизни — п***ец, погода на улице — тоже п***ец. Одно хорошо — стабильность.
10. Попробуйте некоторое время не писать и самолично не навязаться людям, и вы с удивлением обнаружите, что, в общем-то, никому вы особенно нафиг и не нужны.
11. Я могла бы закрыть глаза, притвориться, что все в порядке. Но к сожалению я не смогу жить с закрытыми глазами.
12. Когда вокруг много людей, я ненавижу их. Когда я остаюсь в одиночестве, я ненавижу себя. Поэтому, пусть уж лучше вокруг будут люди, чтобы я могла их ненавидеть.
13. Бывает, обидишь человека, и вроде сначала стыдно, грустно. А через пару часов плевать.
14. Мне бы хотелось чтобы все, кто говорит, что расставаться с человеком больно, попробовали бы удариться локтем об косяк. Вот это — боль!
15. Читаю порой новости и кулаки сами собой сжимаются от злости… а потом разжимаются, меня-то это не касается!
16. Когда я вижу всех этих хозяев жизни на дорогих машинах, проезжающих на красный, у меня в голове вертится только один вопрос — неужели вас 1917 год вообще ничему не научил?
17. Бесит, когда переписываешься с кем-то и ответ приходит только через минут пятнадцать. Я в таких случаях назло отвечаю только через полчаса.
18. Вот вы говорите про снижение рождаемости, падение демографии… А вы бы сами хотели родиться в стране, где есть такие как вы?
19. Некоторым людям даже в ответ на смайлик таки и хочется сказать: “ну чё ты лыбишься?”
20. Наши чиновники любят отдыхать и покупать недвижимость в Европе, потому что это одно из немногих мест, где у власти нет наших чиновников.
21. Раньше родители говорили мне, что я слишком много гуляю и слишком мало учусь. Теперь они говорят, что я слишком много работаю и слишком мало отдыхаю.
22. Если бы мои коллеги знали, что я о них думаю, они бы рассказали, что думают обо мне. Поэтому я молчу.
23. Ничего так не понижает самооценку, как прогулка по вечернему парку, заполненному влюблёнными парочками.
24. — И тогда я слегка приобниму тебя, немножко наклонюсь к твоему уху и нежно прошепчу: «Пошёл на**й»…
25. Честно говоря, от необдуманных действий меня спасает только понимание, что если я сяду в тюрьму за убийство, мою кошку будет некому кормить.

Короткие, злые статусы

Читайте лучшие статусы — злые, короткие и токсичные. Это лучшая подборка коротких ядовитых высказываний, цитат, а также афоризмов, которую только может предложить интернет.

1. Надеюсь, что где-нибудь в параллельном мире кошки топят людей. И правильно делают.
2. Самое ценное, что есть в людях? Внутренние органы, за них по крайней мере можно что-то выручить.
3. Когда уже люди поймут, что главным синонимом к слову “влюблённый” является слово “идиот”?
4. В этом мире все люди делятся на два типа — те, кому на вас плевать, и те, кто вас не знает.
5. Жизнь — это когда ты всю жизнь стремишься к свету, а потом бьёшься головой об фонарь.
6. У людей с плохим запахом изо рта всегда есть куча историй, которыми они хотели бы поделиться по секрету.
7. Почему до сих пор нет закона, запрещающего дышать моим воздухом без моего ведома?
8. Всегда хотелось увидеть человека, который после фразы “слышь, успокойся!” действительно успокаивается.
9. Если не получается выбросить человека из головы, попробуйте окно.
10. Больше всего раздражают постоянно улыбающиеся люди. Такое чувство, что они и пулю в лоб бы всадили с улыбкой.
11. Иногда я забываю, что ненавижу этих людей, но потом мы снова встречаемся.
12. Я конечно не шаман, но если в бубен е*ну — мало не покажется!
13. Мужчина конечно может разбить девушке сердце, зато женщина может в ответ разбить ему яйца.
14. Сегодня ты помогаешь человеку, а завтра он не помогает тебе.
15. Я обещаю, что после твоей смерти я не буду плакать… разве что от смеха.
16. Я никогда не рассказываю людям о собственных проблемах. Не хочу поднимать им настроение и делать счастливыми.
17. Пожалуйста, не ломайте мои нервные клетки! А то вы освободите моих нервных тигров.
18. Каждую ночь, перед нем как заснуть, я думаю о тебе, мразь.
19. Я не параноик, я просто слишком хорошо знаю, чего от тебя ждать.
20. Добрым бывает только сок, все нормальные люди — злые.
21. Скажи мне, кто твой враг и скажу тебе где можно найти ствол.
22. Позвонить в скорую? хм.. а ты уже усвоил урок?
23. Опыт подсказывает, что самые наглые люди — это те, кто прикидывается скромным.
24. Настроение такое, что хочется съездить куда-нибудь. Например в морду!
25. — Знаете, я вас где-то уже видел. Это не ваше лицо изображено на банке с тушёнкой?

Парные статусы для лучших подруг

Ты моя лучшая подруга навсегда — ты слишком много знаешь.

Пусть судьба ломала нас и била, Не сломать нас и не запугать! Мы с тобой, подруга, вместе – сила, Вместе мы сумеем устоять! – Марина Гаврина

Мне плевать на принца. Мне плевать на всех парней. Но мне не наплевать на тебя. Мне очень нужна подруга.

Ты одна у меня такая, И тебе повторения нет. Не осудишь меня, упрекая, Не посмотришь завистливо вслед. – Татьяна Аванесова

Я не сильная, она не сильная, но вместе с подругой мы сильнее всех на свете.

— Мне плевать на принца. Мне плевать на всех парней. Но мне не наплевать на тебя. Мне очень нужна подруга.

Да, мы ненавидим друг друга. Но это не мешает нам быть лучшими подругами.

В подруге ты обнаруживаешь саму себя

Настоящая подруга – это та, которая ненавидит твоих бывших больше, чем ты.

ПОДРУГА-это служба новостей, ликёроводочный магазин и центр психологической поддержки!

Для преданной подруги нельзя сделать слишком много.

Мужчины приходят и уходят, а подруги остаются.

Бывает такое, что сестра не становится лучшей подругой, а подруга наоборот становится сестрой.

Мы милые. Красивые. Счастливые. Любим шоколад. И иногда плачем по ночам. Улыбаемся. Сме­емся. Мы вместе. Мы подруги

В подруге ты обнаруживаешь саму себя.

Имей всего одну подругу, но настоящую.

Берегите лучших подруг, близких друзей, хреново, когда не с кем выйти в туалет или просто позвонить, пока идёшь в магазин.

С лучшей подругой можно и помолчать, но только НЕ на уроке.

Есть нормальные, адекватные люди? А ещё есть я и моя лучшая подруга.

Женская компания намного лучше мужской — подруга всегда поймёт и примет всё то, что представитель сильной половины посчитает незначительной мелочью.

Лучшая подруга – это когда у вас есть такие слова, услышав которые вы вдвоём начинаете истерически смеяться, а все остальные смотрят на вас как на идиоток…

Лучшая подруга – это та, кто знает твой цвет трусов не неделю вперед…

Без тебя бы меня не было

Третья подруга нужна для того… чтобы две другие могли её обсуждать!

Ты — небо, я — земля. Ты — сама серьезность, я легкомысленна. Но в одном мы похожи: мы любим друг друга и не хотим расставаться

Самая лучшая в мире Такой подруги как у меня никому не найти. Она такая одна красивая, милая, добрая скромная, и просто она самая, самая

– А ты не подарок! – Да и ты не праздник!

Лучшая подружка в мире. После неё!

Мое сердце навсегда отдано тебе. Оно бьется только в твоих руках

Дружба до первого понравившегося парня — это никакая нафиг не дружба

Я была нормальной. Честно. До тех пор, пока не встретила эту психопатку, которую я называю своей лучшей подругой!!

Такой подруги я даже врагу не пожелаю… она мне и самой понадобится!

Найти счастье не просто, а потерять его можно за считанные минуты

Люди пришли, люди ушли. Какая разница? Главное смотреть, кто остается, а остаются единицы, которые по-настоящему тебя любят и дорожат тобой

Подруга не та, кто прыгнет за тобой из окна, а та, кто скажет, что выход из квартиры в другой стороне.

Ты же в курсе, что ты ужасный человек? Конечно, я сама сатана!

Ты — моя душа, ты — мое сердце

Никогда не бросай старых друзей! Ты никогда не найдешь кого-то, кто заменит их. Дружба – как … : чем она старше, тем лучше

Лучшая подруга знает твое прошлое, верит в твое будущее, а сейчас принимает тебя такой, какая ты есть.

В жизни каждой порядочной девушки должна быть подруга, которой море по колено.

Расстаться легко, а вот забыть то, что было, и жить дальше очень сложно

Мы разные, тут споры неуместны. Иной снаружи монстр, а в душе дитя, кто-то за решеткой, с сердцем честным, а кто-то с сердцем подлым, а судья!

Моя подруга так много обо мне знает, что мне придется либо уехать из города, либо дружить с ней всю жизнь.

Серьёзные проблемы требуют серьёзных решений. И бутылку винишка…

Пока мы вместе, мы сможем добиться всего

Коньяк прошептал: “Он не стоит ваших слез!”, ликер подтвердил: “Ты конечно еще будешь счастлива!”, а водка закричала: “И ты дура, и твой мужик – дебил. Поплачем, бабёнки, поплачем!

Настоящая подруга не позволит тебе совершать глупости в одиночку!

Любая хорошая девочка может выпить за раз десяток шотов и отбиться от насильника в тёмном переулке, но в туалет в одиночестве никогда не отойдёт!

Самая большая ошибка для нас — потерять друг друга!

Мы — дождь и радуга, море и суша, солнце и луна! Такие разные, но не можем друг без друга

Другой подруги не ищу, Ты лучше всех на всей планете, Ты солнца луч, когда грущу. Как тонко чувствуем друг друга, Одна душа.

Решили с подружкой поставить классные парные статусы в ВК для лучших подруг… вот, так ничего и не придумали.

Наш девиз: безграничная преданность, взаимное доверие

Ты — самая большая награда за все пережитые прежде испытания

Очень трудно найти лучшую подругу – ведь самая лучшая уже моя.

Две идиотки и одна бутылка вина… что может пойти не так?

Ты — мой лучший друг

Давай не будем разрушать то, над чем так долго работали!

Ревность лучшей подруге к нашей общей подруге – самая ужасная ревность.

Я – её лучшая подружка, а она – мой ходячий штопор…

Просто прости. Просто протяни мне руку. Просто взгляни в мои глаза и ты увидишь, как мне плохо без тебя

Раньше казалось, что попросить прощения сложно. Но теперь я знаю: если человек дорог по-настоящему, готов просить прощения с утра до ночи!

Как здорово иметь настоящую подругу. Когда устаешь от предательства, от очередной боли, от целого мира можно просто прийти к ней без слов, упасть на кровать и молча закрыть глаза.

Я хорошая! Правда! Просто моя подруга немного сумасшедшая, а это заразительно…

Мы — две детали одной головоломки. Собрать которую можем только мы сами

Найти настоящую подругу непросто, а потерять можно за считанные минуты

Лучшая подруга бывает только раз в жизни. Хоть иногда она тебя бесит, и ты хочешь её убить. Но ты понимаешь, что кроме неё, никого так не полюбишь.

У меня есть отличная подружка, ведь она моя подушка!

Когда мы рядом, кажется, что солнце светит ярче, даже если его не видно за облаками

Я отдам свою подругу только в те руки, которые будут её любить больше, чем я.

Мы как две конфетки разных цветов. Одна белая, а другая психопатка!

Только вместе мы можем позволить себе снимать маски и быть собой

Лучшая подруга-эта та, которой звонишь, а у нее занято. И ты ужасно психуешь, а оказывается, что она звонила тебе

Лучшая подруга нужна для того, чтобы на её фоне выглядеть сногсшибательно…

Я буду ждать, когда ты простишь меня, даже если это займет месяцы и годы

Порой мне так приятно общаться с некоторыми людьми, что я хочу забрать их к себе домой и никому не отдавать.

Как не крути, но без лучшей подруги жизнь-не жизнь!

Два кусочка одной сладкой булочки!

Совместные безумия сближают больше, чем общие взгляды на мир!

Подруг много не бывает, но есть настоящая, которая никогда тебя не кидает

Мне нравится, что можно быть смешной, распущенной, и не играть словами…

Только подруга понимает все с одного взгляда.

Чтобы найти настоящую подружку – придётся не одну сотню перебрать…

Дружить нужно так, чтобы потом еще наши дети дружили.

Лучшая подруга нужна, чтобы было на кого облокотиться, когда ты поскользнулась. Ну и поржать немного, конечно!

Подружки – это навсегда. Подружки в беде не бросают, а нагружают ещё и своими бедами!

Обзор ролей, статусов и должностей — ChapterWeb

Как роли, статусы и должности работают вместе в ChapterWeb? Хороший вопрос.

Роли

Когда вы думаете о ролях в ChapterWeb, подумайте о разрешениях, которые вы предоставляете участнику для выполнения определенных задач. На самом верхнем уровне у вас есть администратор. Администратор имеет возможность читать, писать, удалять и редактировать на всем веб-сайте. В большинстве глав эта роль отводится 2-3 важным людям в своей организации, отвечающим за веб-сайт.

С другой стороны, у вас есть самая основная роль, которую в зависимости от вашей организации можно называть по-разному (например, родитель, тренер, мама, молодые люди, ребенок, член и т. Д.). У этого человека есть самый базовый уровень разрешений на сайте. Фактически, чтобы даже войти на сайт, человеку должна быть назначена как минимум эта роль.

У некоторых участников будет несколько ролей. Например, если вы являетесь администратором, вы, скорее всего, также станете базовым участником (например,g., родитель, тренер и т. д.). Это сообщает системе, что при входе в систему у вас есть разрешения на редактирование на всем веб-сайте, а также на все, что может делать обычный пользователь (регистрировать часы работы, просматривать календарь, читать файлы). Без этой базовой настройки участников вы бы не увидели своих связанных пользователей в таких местах, как вкладка Часы работы или регистрация в календаре.

Главное, что нужно помнить о ролях:

• Это разрешения, которые вы хотите, чтобы участники имели на сайте.
• Участник ДОЛЖЕН иметь по крайней мере одну назначенную ему роль для входа на сайт.
• Создание новой роли не дает автоматически человеку тех же прав, что и базовый пользователь. Пожалуйста, обратитесь в нашу службу поддержки, прежде чем кардинально менять свои роли.
• Вы можете создавать новые роли, но у этих участников не будет специальных разрешений на сайте. Создавайте новые роли только тогда, когда вы хотите сгруппировать определенных людей (например, членов правления). Когда вы создаете новые роли, они автоматически заполняются на веб-сайте, так что вы можете легко отправлять по электронной почте или показывать файлы людям с определенными ролями.

Статусы

Статусы следует рассматривать как статус, который человек имеет в своей организации. Например, кто-то может быть Родителем (роль) и Активным (статус), если он состоит в Национальной благотворительной лиге или в Молодом человеке (роль) и закончил (статус). Статусы не влияют на права участников, установленные на сайте.

Помните: разделение статусов и ролей важно для того, чтобы ваша организация оставалась организованной, а обслуживание вашего каталога участников было минимальным.

Что важно помнить о статусах:

• Специальных разрешений на сайте не дают.
• Они полностью доступны для редактирования администратором.
• Участников со статусом «Завершено» не отключаются автоматически с веб-сайта, это второй шаг, который вам нужно сделать.
• Сохранение статусов отдельно от ролей поможет вашей организации легко фильтровать участников и сохранять организованность.

Должности

Должности важны тем, что помогают вашей организации отслеживать работу, которую участник выполнял в течение всего времени, пока он был участником.Если вы еще этого не сделали, ознакомьтесь с нашими инструкциями по настройке или обновлению позиций. Это поможет вам начать создавать и поддерживать списки позиций. Помните, что это могут редактировать только администраторы — обычные участники не могут редактировать должности или добавлять должности в свои профили.

Что важно помнить о должностях:

• Специальных разрешений на сайте не дают.
• Вы можете отслеживать историю должностей, которые участник выполнял за все время работы в организации.

санитарная грамотность среди участников из районов с разным социально-экономическим статусом в южном регионе Венгрии: пилотное исследование | BMC Public Health

Было проведено перекрестное исследование для изучения уровня HL среди людей с низким социально-экономическим статусом и выявления корреляций между посещением и удовлетворенностью отделениями неотложной помощи, знанием о системе сортировки и медицинскими привычками пациентов.

Популяция исследования

Участники были набраны Управлением по развитию здравоохранения в Селлье в период с апреля по май 2019 г.Для удобства выборки респонденты были из двух сел и одного города Бараньинского района. В исследовании приняли участие сто восемьдесят шесть человек. Все они были старше 18 лет. Были исключены те, кто страдал психическим заболеванием, находился на социальной опеке или не соответствовал всей анкете. Все участники получили информативный документ о протоколе обследования и сборе данных, в том числе о сборе анамнестических данных, жизненно важных параметрах, знаниях о системе здравоохранения, особенно знаниях об экстренной помощи и уровне HL.

Сбор данных

Сбор данных проводился с помощью следующей серии тестов, состоящей из двух основных частей. Вначале социально-экономическая часть состояла из вопросов о возрасте, поле, уровне образования, уровне медицинского образования, статусе поселения, семейном положении и доходе домохозяйства. Что касается состояния здоровья участников, мы измерили их артериальное давление, пульс, сатурацию кислорода, массу тела и рост, а также задавали вопросы для записи истории болезни и сбора информации об их хронических заболеваниях и лекарствах.Нормальным значением ИМТ считалось от 18,5 до 24,99 [28]. Что касается уровней знаний, возникло несколько вопросов о системе сортировки.

Шкала Лайкерта использовалась для измерения удовлетворенности системой неотложной помощи, работниками и информационной системой. Посещения дежурных семейных врачей были исключены из этой части исследования.

Во второй части анкеты использовалась анкета HLS-EU-Q47 для оценки уровня HL. HLS-EU-Q47 имеет 4 индекса, то есть комплексный индекс HL (cHL) и 3 субиндекса конкретных параметров: субиндексы здравоохранения (HC), профилактики заболеваний (DP) и укрепления здоровья (HP).Для характеристики уровня ВУ респондентов используются четыре категории: неадекватный, проблемный, достаточный и отличный [2, 4]. Этот вопросник был ранее проверен в Венгрии [6] и показал хорошую внутреннюю надежность (альфа Кронбаха для индекса cHL: 0,97; альфа Кронбаха для субиндекса HC: 0,92; альфа Кронбаха для субиндекса DP: 0,92; и альфа Кронбаха для субиндекса DP: 0,92; и альфа Кронбаха для субиндекса HC: 0,92). для субиндекса HP: 0,93) [6].

Сначала проверялась достоверность субиндексов, поскольку ответы каждого участника можно было рассматривать только в том случае, если участник предоставил менее 4 ответов «Я не знаю».На вопросы 1–16 (субиндекс HC) и на вопросы 17–31 (субиндекс DP) разрешался только 1 ответ «Я не знаю», а на вопросы разрешалось 2 ответа «Я не знаю». 32–47 (субиндекс HP). Тридцать четыре процента участников дали один ответ «Я не знаю» для субиндекса HC, 22,7% ответили один ответ «Я не знаю» для субиндекса DP и 34,8% ответили один «Я». не знаю »ответ на субиндекс HP.

Согласованность между вопросами по индексу cHL и субиндексам была высокой, а значения альфа Кронбаха были следующими: индекс cHL: 0.976, HC: 0,933, DP: 0,937 и HP: 0,919.

Во-вторых, были измерены описательные значения индекса cHL и субиндекса. Уровень HL участников от 0 до 25 баллов считался недостаточным, от 26 до 33 баллов считался проблемным, от 34 до 42 баллов считался достаточным и от 43 до 50 баллов считался отличным. Считалось, что участники неадекватных и проблемных групп имеют ограниченный уровень ВУ. Статистический анализ этой части опроса проводился, как описано в предыдущих исследованиях [2, 6].

Все участники должны были заполнить анкету вместе с интервьюером, который был медработником и знал правила заполнения анкеты. Интервьюер находился в отдельной комнате с участниками, они не могли слышать друг друга во время ответа. Сначала измеряли антропометрические даты, после чего отвечали на вопросы.

Статистический анализ

Для описания образца использовался описательный статистический анализ (среднее значение, стандартное отклонение, процентное значение, режим).Математический статистический анализ (ANOVA, критерий chi ² , корреляции Пирсона, двухвыборочный t-критерий) использовался для определения отношений между номинальными переменными (например, пол, уровень образования) и непрерывными переменными (например, уровень HL). Односторонний дисперсионный анализ ANOVA и t-тест применялись для проверки связи между уровнем HL, знаниями (знаниями о системе сортировки), удовлетворенностью посещениями отделения неотложной помощи и демографическими характеристиками (пол, уровень образования, тип поселения, экономический статус санитарного просвещения, семейное положение, санитарное просвещение, дети бытовые).Корреляция Пирсона применялась для проверки уровня HL (например, уровень HL по сравнению с возрастом). Для анализа данных использовалось статистическое программное обеспечение SPSS 24.0. Отношения считались значимыми на уровне p <0,05.

Как изменяется статус правомочности в соответствии с ACA, когда сотрудник переключается с полного рабочего дня на неполный?

Однако были вопросы, на которые труднее ответить, например:

Этот ответ не так однозначен по причинам, о которых мы поговорим позже. Основной ответ: Работодатель должен повторно протестировать этого сотрудника из последнего завершенного периода оценки, чтобы определить соответствие критериям для этого сотрудника.Если сотрудник не проработал достаточное количество часов в течение последнего завершенного периода измерения, работодатель больше не обязан продолжать страховое покрытие в рамках спонсируемого работодателем плана и должен предложить расширить покрытие на сотрудника в рамках COBRA.

Однако, если работник проработал достаточное количество часов в течение периода измерения, работодатель должен соблюдать статус права на полный рабочий день до конца периода стабильности. В конце текущего периода измерения работодатель должен снова протестировать сотрудника на основании часов, отработанных в течение текущего периода измерения.

В связи с этим мы рекомендуем работодателям проявлять осторожность в этой ситуации, например, в интересах сотрудников, чтобы избежать потенциальных судебных разбирательств и штрафов за несоблюдение. Мы полагаем, что если IRS даст рекомендации в этой области, они потребуют от работодателей соблюдения статуса приемлемости, как если бы работник проходил тестирование с другими сотрудниками с переменной продолжительностью рабочего времени в течение последнего административного периода.

Обоснование этого подхода состоит в том, что работодатель должен измерять количество сотрудников с переменной продолжительностью рабочего дня, чтобы определить, являются ли они сотрудником «полный рабочий день». Если сотрудник будет работать полный рабочий день, он должен продлить предложение страхового покрытия. В правилах нет четкого разграничения между «назначенным штатным сотрудником» и сотрудником, «определенным» как штатный на основе часов, отработанных в течение периода измерения.

Определение IRS штатных сотрудников для соответствия требованиям ACA

2014-49 описывает связанные сценарии, связанные с изменениями сотрудников, которые могут привести к другому периоду оценки для сотрудника.В этом уведомлении ясно, что когда IRS ссылается на «штатного» сотрудника, они имеют в виду сотрудника, который определен как штатный на основании часов, отработанных в течение периода измерения. Кроме того, IRS ясно дало понять в информации «Выявление штатных сотрудников», что определение штатного сотрудника выглядит следующим образом:

• • Ежемесячный метод измерения и

  • Метод ретроспективного измерения

Границы | Отсутствие явного клинического иммунодефицита, несмотря на иммунные биологические аномалии у пациентов с конституциональным дефицитом восстановления несоответствия

Введение

Двуаллельные мутации зародышевой линии в гене репарации ошибочного спаривания (MMR) приводят к состоянию, известному как синдром дефицита репарации конституционального несоответствия (CMMRD; OMIM # 276300).Этот редкий, разрушительный синдром предрасположенности к раку частично совпадает с аутосомно-рецессивной формой синдрома Тюрко, состоянием, характеризующимся одновременным возникновением множества аденоматозных полипов толстой кишки с повышенным риском колоректального рака и опухолей головного мозга (1). Кроме того, люди с CMMRD имеют очень высокий риск развития гематологических и других злокачественных новообразований, начиная с раннего детства [см. (2)]. Часто у пациентов с CMMRD наблюдаются пятна кофе с молоком (CALM) и другие признаки, напоминающие нейрофиброматоз 1 типа (NF1), что имеет диагностическое значение (3).Для клинической диагностики CMMRD и наблюдения за опухолями у пораженных пациентов недавние согласованные отчеты содержат полезные диагностические баллы и рекомендации по скринингу (4–7).

Основная функция системы MMR — исправление ошибок репликации, которые ускользают от корректирующей активности полимераз [см. (8)]. Кроме того, система MMR участвует (i) в рекомбинации с переключением классов иммуноглобулинов (CSR) в том смысле, что она распознает вызванное активацией цитидиндезаминазное (AID) превращение цитидинов в уридины в областях переключения ДНК и (ii) соматическую гипермутацию. (SHM) [рассмотрено в работе.(9)]. Оба процесса необходимы для созревания В-клеток и для диверсификации и спецификации репертуара иммуноглобулинов млекопитающих. Дефекты CSR являются молекулярной основой синдромов гипер-IgM, которые представляют собой первичные иммунодефициты (PIDs) с преобладающим дефектом образования антител, связанным со снижением IgG, IgA и IgE, а также нормальными или повышенными концентрациями IgM (9–11). Благодаря этим функциям система MMR является связующим звеном между иммунной системой и подавлением опухоли (12).

Различные уровни иммунодефицита были обнаружены у отдельных пациентов с CMMRD или небольших серий пациентов, что подтверждает гипотезу о том, что механизм MMR способствует развитию CSR и SHM иммуноглобулинов. Дефицит IgA или общий вариабельный иммунодефицит (CVID) впервые был зарегистрирован у одного MSH3- и трех MSH6-дефицитных пациентов (13-15). Дальнейший анализ был сфокусирован на дефектах, связанных с CSR, и позволил идентифицировать трех лиц с дефицитом PMS2 и восьми MSH6 с двуаллельными мутациями потери функции, которые имели различную степень гипер-IgM-подобных свойств и явные дефекты CSR in vitro. и in vivo (16, 17).Кроме того, более широкий скрининг однонуклеотидных полиморфизмов в генах MMR в отобранных когортах пациентов с дефицитом IgA или с ОВИН привел к идентификации определенных моноаллельных вариантов MSH5, MLh2 и MSh3 , которые могли быть связаны с этими PID (18, 19). В совокупности результаты этих исследований показали, что CMMRD неизменно влечет за собой ВЗОМТ.

Риск злокачественных новообразований выше при большинстве первичных иммунодефицитных и нарушений регуляции (ВЗОМТ), но механизмы и частота злокачественной трансформации различаются в зависимости от различных категорий ВЗОМТ (20).При CMMRD любое нарушение иммунной системы может иметь решающее значение для развития злокачественных новообразований, поскольку оно может поставить под угрозу иммунный надзор за опухолью, что может ускорить онкогенез в дополнение к значительно увеличенной частоте мутаций, присущих клеткам с дефицитом MMR. Поскольку в предыдущих исследованиях сообщалось о различной степени иммунодефицита у пациентов с CMMRD, что может сделать их менее чувствительными к онкологической иммунной терапии, такой как, например, ингибирование контрольных точек, выяснение того, страдали ли пациенты CMMRD от PID, имеет потенциальные последствия для будущих стратегий лечения онкологического иммунитета.С другой стороны, единообразный набор клинических симптомов, таких как предупреждающие признаки, указывающие на ВЗОМТ или лабораторные иммунологические аномалии, может облегчить раннюю диагностику CMMRD. Кроме того, у этих людей может усугубляться вторичный иммунодефицит после химиотерапии, что требует дополнительной осторожности и поддерживающих мер.

Настоящий систематический анализ PID в CMMRD касается in vivo клеточных, гуморальных и клинических иммунных фенотипов пациентов с CMMRD из Европы и Ближнего Востока.

Результаты

В это исследование были включены пятнадцать последовательных неродственных пациентов с генетически подтвержденным диагнозом CMMRD из девяти стран (11 женщин, 4 мужчин; возраст на момент включения: 1–38 лет, средний возраст 9 лет; возраст первого злокачественного новообразования: 0,7– 22 года, средний возраст 5 лет). Пятеро из этих пациентов были включены в предыдущие исследования, тогда как данные по оставшимся 10 пациентам ранее не публиковались. В таблице 1 приведены генотипы, клинические проявления и семейные истории пациентов.

Таблица 1 . Характеристики 15 пациентов с CMMRD.

В соответствии с предыдущими наблюдениями, гомозиготные ( n = 7) или компаунд-гетерозиготные ( n = 1) PMS2 мутации зародышевой линии присутствовали более чем у половины пациентов; о кровном родстве сообщили пять родителей (Таблица 1). У двух из четырех новых пациентов с дефицитом PMS2 (P5 и P12) были усекающие мутации, затрагивающие оба аллеля PMS2 , а два других (P9 и P16) были гомозиготными по сплайсинговым мутациям, приводящим к аберрантным транскриптам вне рамки считывания.Шесть пациентов с дефицитом PMS2 недавно имели в анамнезе злокачественную глиому высокой степени, а у одного недавно была лимфома Беркитта. У одного пациента с глиобластомой, острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), а у другого, Т-клеточная неходжкинская лимфома (Т-НХЛ) предшествовала опухоли головного мозга на 1 и 5 лет соответственно. У двух пациентов были метахронные LS-ассоциированные карциномы, а у трех пациентов также были аденомы кишечника.

У пяти пациентов было мутаций MSH6 . Два пациента от предположительно кровных родителей были гомозиготными по усекающей мутации MSH6 .Три пациента были компаунд-гетерозиготными по двум различным мутациям MSH6 . Интересно, что у одного из этих пациентов (P13) была мутация de novo , которая отсутствовала у обоих генетически подтвержденных родителей, в то время как вторая мутация была наследственной по материнской линии. В то время как у этого пациента были две разные усекающие мутации, у двух других пациентов (P2 и P14) была одна усекающая мутация и одна миссенс-мутация. Обе мутации missense MSH6 (p.Asp439Gly и p.Tyr994Asn) пока не зарегистрированы, но могут быть классифицированы как вероятные патогенные, по крайней мере, в контексте CMMRD в соответствии с рекомендациями ACMG (25).Спектр опухолей у пациентов с дефицитом MSH6 включал опухоль Вильмса, две медуллобластомы и две НХЛ, которые рецидивировали у одного пациента и предшествовали В-клеточному ОЛЛ у другого пациента (таблица 1). Один из пациентов с дефицитом MSH6 имел аденомы кишечника в 10-летнем возрасте. При среднем возрасте 6,5 (диапазон 4–7) лет ни у одного из других пациентов не было аденом кишечника или опухолей, связанных с LS.

Один из двух пациентов с двуаллельными мутациями в MLh2 был от кровных родителей. Этот пациент (P8) несет известную миссенс-мутацию p.Ala111Val классифицирован Комитетом по интерпретации вариантов InSiGHT как вероятный патогенный. Другой пациент (P7) был составным гетерозиготным по известной миссенс-мутации p.Ala21Glu, классифицированной Комитетом по интерпретации вариантов InSiGHT как патогенный, и миссенс-варианту p.Val716Met, который классифицирован Комитетом по интерпретации вариантов InSiGHT как доброкачественный. Следует отметить, что оба пациента (P7 и P8) показали в тесте микросателлитной нестабильности зародышевой линии (gMSI) повышенные соотношения gMSI, как и все пациенты с дефицитом PMS2, испытанные на эту особенность, и что является высокоспецифичным для CMMRD (26).Хотя мы не можем исключить, что не обнаруженный вариант p.Val716Met, а другая мутация MLh2 ответственна за CMMRD у пациента P7, примечательно, что этот вариант уже ранее обсуждался как потенциально ответственный в сочетании с остановкой. мутация колоректального рака у 12-летнего мальчика (27). Оба пациента с дефицитом MLh2 (P7 и P8) имели Т-НХЛ в очень раннем возрасте (8 месяцев и 1 год), а у P7 развилась другая лимфома (B-NHL) в 12 лет, пограничная филлоидная опухоль в 16 лет и старше. глиобластома в 21 год.Также ей удалили множественные аденомы кишечника.

Два пациента (P3 и P10) были из семей с ранее диагностированными пациентами с CMMRD. У одного пациента (P11) диагностировали CMMRD до развития опухоли (24). Все 12 оставшихся индексных пациентов в семьях соответствовали критериям C4CMMRD для клинического подозрения на CMMRD, когда у них была первая опухоль, со средним значением 5,5 (диапазон 3–7) баллов по шкале C4CMMRD (5). Незлокачественные признаки, указывающие на CMMRD по системе баллов C4CMMRD, присутствовали у 13 из 15 пациентов.Два или более СПОКОЙНЫХ, гипер- и / или гипопигментированных участков кожи были отмечены у 13 пациентов, а церебральная кавернома / гамартома — у трех. Кроме того, сосудистые аномалии кожи (гемангиома и венокапиллярная мальформация) были зарегистрированы у трех пациентов, а у одного пациента была гемангиома печени. Родители восьми пациентов сообщили о кровном родстве. Семейные анамнезы LS или LS-ассоциированных карцином у родственников первой, второй или третьей степени родства были зарегистрированы у пяти пациентов, и у трех были родные братья и сестры с CMMRD-ассоциированным раком (таблица 1).

Чтобы определить клинический иммунодефицит, связанный с CMMRD, мы сначала оценили клинические иммунологические параметры. Данные истории болезни пациентов были получены с помощью вопросника исследования, который доступен в онлайн-хранилище (рисунок S1 в дополнительных материалах; см. «Пациенты и методы»). Данные были получены от 14 из 15 пациентов и не показали клинических признаков ВЗОМТ (таблица 2). Заполненная анкета не была доступна для P6, но ее история болезни, сообщенная врачом, не показала никаких признаков PID.Только у 2 из 14 пациентов (P2 и P3; в возрасте 4 и 6 лет) было зарегистрировано 4-7 инфекций ушно-носоглоточного тракта или простых вирусных инфекций в год, что находится в пределах физиологического диапазона в этом возрасте ( Таблица 2). Ни у одного из других пациентов не было зарегистрировано повышенного количества инфекций. У P3 в анамнезе была бронхиальная астма с уровнем IgE в пределах нормы (таблица 2).

Таблица 2 . История клинических признаков иммунодефицита или нарушения иммунной регуляции у 14 (из 15) ^и пациентов с CMMRD.

Затем мы попытались определить, есть ли какие-либо устойчивые отклонения, обнаруживаемые в рутинных параметрах клеточной иммунной системы. С этой целью был проведен анализ, напоминающий расширенную рутинную диагностику любого подозреваемого комбинированного иммунодефицита. Из-за роли аппарата MMR в CSR и SHM мы сосредоточились на стадиях созревания B-клеток. Но также были проанализированы подмножества Т-клеток и репертуар рецепторов Т-клеток. В таблицах 3 и 4 показаны необработанные данные для наиболее релевантных подмножеств B- и T-клеток вместе с соответствующими нормальными диапазонами (28, 29).Пациенты группируются в соответствии с их генотипом (т. Е. Мутированным геном MMR) и сортируются по возрасту. Важно отметить, что в клеточной иммунной системе пациентов с CMMRD в результате стандартного PID-диагностического анализа FACS, включая анализ субпопуляций B-клеток памяти, не было выявлено единого паттерна отклонения от нормы. В-клетки памяти с переключением классов были уменьшены в той или иной степени у 5 и в норме у 7 из 12 пациентов. Тем не менее, мы обнаружили четкую тенденцию к снижению плазмобластов CD38 ^hi IgM ^— (измерено как процент В-клеток у 12 пациентов: нормальное у 3 пациентов, уменьшение у 7, отсутствие у 2 и повышение ни у одного) и относительное увеличение CD21 ^low CD38 ^low (активированных) B-клеток у 6 из 12 пациентов по всем трем проанализированным генотипам (таблица 3).Как и ожидалось, значения следующих субпопуляций лимфоцитов не отличались незначительными, несогласованными вариациями: Т-клетки и субпопуляции Т-клеток, включая CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клетки, Т-клеточные рецепторы альфа / бета (TCRab) -положительные CD4 ^— CD8 ^— CD3 ⁺ двойные отрицательные Т-клетки, TCRgamma / дельта, а также наивные CD45RA ⁺ CD4 ⁺ (Таблица 4) и наивные CD8 ⁺ Т-клетки (не показаны), активированные Т-клетки ( не показаны), а также NK-клетки и моноциты (Таблица 4).Кроме того, результаты репертуара TCR (спектральное типирование), оцененные путем проведения количественного секвенирования 24 фрагментов семейства TCR Vbeta из Т-клеток CD4 и CD8, не были примечательными у всех испытуемых лиц ( n = 14; не показано). В целом, помимо уменьшения количества В-клеток памяти с переключением классов у 5 из 12 человек и плазмобластов с переключением классов, обнаруженных у большинства (9 из 12), среди них не было стабильно обнаружено никаких нарушений клеточной иммунной системы. Пациенты с CMMRD.

Таблица 3 . Количественная оценка субпопуляций B-клеток у пациентов с CMMRD.

Таблица 4 . Количественная оценка субпопуляций Т-клеток и других мононуклеарных клеток периферической крови пациентов с CMMRD.

Аномальные параметры гуморального иммунитета и функции В-клеток, такие как подкласс IgG или дефицит IgA, гипогаммаглобулинемия и синдром гипер-IgM, ожидаются при CMMRD, поскольку они, как было показано, возникают у пациентов с дефектной CSR (16, 30, 31).Таким образом, мы изучили результаты количественного анализа изотипов и подклассов иммуноглобулинов (рис. 1), а также специфической способности образования антител (таблица S1 в дополнительных материалах). Эти серологические анализы проводились в местных больницах, и не для всех пациентов. Результаты были довольно неоднородными, с большей частью нормальными, но у некоторых снизились, а у некоторых повысились концентрации иммуноглобулинов. Важно отметить, что мы не наблюдали последовательного снижения IgA, IgG или любого подкласса IgG, за исключением IgG4 (у четырех из семи протестированных пациентов).Однако интерпретация дефицита подкласса IgG4 ограничена, поскольку нормальные диапазоны указывают на то, что IgG4 может быть неопределяемым в дошкольном возрасте и все еще очень низким (0,05 г / л) даже у здоровых взрослых (32). Уровень IgG был умеренно или умеренно снижен у 4 из 12 протестированных пациентов, все из которых были ≥10 лет (рис. 1A). IgM был повышен у 3 из 12 протестированных пациентов (P2, P14, P16; Рисунок 1A). Из трех пациентов с повышенным уровнем IgM у одного (P2) также был дефицит IgA, а у двух (P2 и P14) наблюдалось пограничное снижение уровня IgG2.Третий пациент (P16) имел значительно повышенные значения IgM, но нормальные значения подкласса IgA и IgG. P14, у которого концентрации IgM были лишь незначительно увеличены, продемонстрировал заметное увеличение IgG1 и IgG3 (рис. 1). Следует отметить, что у трех пациентов концентрация IgM была снижена (P7, P13, P15; рис. 1A), а у шести пациентов концентрация IgM была в пределах нормы. IgE обнаруживался в пределах нормы у трех человек и почти отсутствовал или не определялся у четырех человек (не показано). Концентрации антител против вакцинных антигенов или детских инфекций (например, против дифтерийного токсина, столбнячного анатоксина, вируса гепатита B, рубеолы, морбиллов, полисахарида haemophilus influenza B, пневмококкового полисахарида, вируса ветряной оспы, вируса Эпштейна-Барра, цитомегаловируса; без недавнего терапевтического введения цитомегаловируса; иммуноглобулины) дали положительный результат по крайней мере на некоторые из протестированных антител у всех пациентов (таблица S1 в дополнительных материалах).Следует отметить, что у всех трех пациентов с повышенными концентрациями IgM обнаруживались уровни образования специфических антител против белковых и полисахаридных антигенов (P2, P14, P16; Таблица S1 в дополнительных материалах). Несмотря на ограничение, заключающееся в том, что истории вакцинации и инфекции не оценивались подробно, что ставит под угрозу интерпретацию конкретных концентраций антител, эти результаты не подтверждают наличие специфического дефекта образования антител у пациентов с CMMRD. Напротив, пациенты с известной историей инфекции или текущей инфекцией на момент анализа показали адекватно повышенную концентрацию специфических антител (Таблица S1 в дополнительных материалах).Результаты попытки обнаружить антинуклеарные антитела оказались безрезультатными: три пациента показали отрицательные результаты, а два (хотя и бессимптомных) пациента дали низкий положительный результат. Вместе эти данные не подтверждают гипотезу о том, что пациенты с CMMRD регулярно имеют клинически значимый гуморальный иммунодефицит.

Рисунок 1 . Концентрации иммуноглобулинов у пациентов с конституциональной недостаточностью восстановления несоответствия. Гуморальные иммунологические анализы проводились на месте в больницах пациентов, а результаты отправлялись в исследовательский центр.Ни один из пациентов не получал терапевтических (в / в или п / к) иммуноглобулинов в течение последних 6 месяцев до анализа. Результаты для пациентов с дефицитом PMS2 показаны в виде сплошных точек, для пациентов с дефицитом MSH6 — в виде открытых точек и для пациентов с дефицитом MLh2 — в виде открытого квадрата. Возрастные диапазоны нормы показаны серыми прямоугольниками. (A) Панели показывают сывороточные концентрации IgG, IgA и IgM в г / дл с возрастными нормальными диапазонами. (B) Графики показывают анализ подкласса IgG, доступный у семи пациентов, в зависимости от возрастных нормальных диапазонов для облегчения интерпретации.Из 15 пациентов серологические данные для P12 отсутствовали, а данные для P8 и P9 были исключены из-за того, что они ранее получали химио- или ритуксимаб.

После того, как В-клетки столкнулись с антигеном, они мигрируют в зародышевый центр, где подвергаются SHM, CSR и селекции. Чтобы изучить влияние дефицита MMR на эти процессы на молекулярном уровне, мы проанализировали репертуар B-клеточных рецепторов у пяти пациентов с CMMRD, используя секвенирование следующего поколения транскриптов IGHG и IGHA, полученных из антиген-отобранных B-клеток.Мы получили 253–568 уникальных перестроек тяжелой цепи иммуноглобулина (IGH) для каждого пациента и сравнили их с контрольной группой здоровых людей соответствующего возраста (HC) (Таблица S4 в дополнительных материалах). Интересно, что средняя частота SHM была значительно снижена в транскриптах IGHG и IGHA у всех пациентов (рис. 2А). Кроме того, мы проанализировали распределение подклассов в транскриптах IGHG и IGHA. Это распределение в транскриптах IGHG было изменено у четырех из пяти пациентов с CMMRD, у которых почти не было транскриптов IGHG, которые использовали подклассы IGHG2 или IGHG4 (рис. 2B).Кроме того, в транскриптах IGHA меньше транскриптов с подклассом IGHA2 присутствовало у четырех из пяти пациентов с CMMRD по сравнению с HC. Константные гены IGHG2 и IGHG4 расположены более дистально в локусе IGH, дальше от перестройки VDJ по сравнению с константными генами IGHG3 и IGHG1 и используются во время последовательного переключения во время одного иммунного ответа или после последовательного ответа зародышевого центра. Снижение этих подклассов часто наблюдается у пациентов с дефектом CSR, таких как пациенты с атаксией телеангиэктазии (33), и может указывать на дефект CSR или нарушенный иммунный ответ.Учитывая тот факт, что частота SHM также снижается, вероятно, что B-клетки в зародышевом центре не смогут пройти второй этап созревания аффинности и, следовательно, не доживут до переключения в сторону дистальных константных областей [см. Также Ref. (34)].

Рисунок 2 . Анализ соматической гипермутации (SHM) и рекомбинации с переключением классов (CSR) в перестройках рецепторов B-клеток. Подробный анализ реаранжировки В-клеточных рецепторов показал значительное снижение частоты SHM у пациентов с конституциональным дефицитом репарации несоответствий (CMMRD) по сравнению со здоровым контролем (HC) (A) .Кроме того, частота перестроек, которые имеют подкласс IGHG3, IGHG1 и IGHA1, была увеличена у пациентов с CMMRD, что указывает на возможный дефект в CSR (B) . Селекция против В-клеток с длинной комплементарной определяющей областью (CDR3) (C) и В-клеток, которые используют ген IGHV4-34 (D) , была нормальной у пациентов с CMMRD. Красные точки указывают на пациентов с дефицитом MSH6, а зеленые точки указывают на пациентов с дефицитом PMS2. ** P <0,01 и *** P <0.0005.

Когда В-клетки дифференцируются от наивных В-клеток к В-клеткам памяти, они сильно селектируются против В-клеток, которые имеют длинную комплементарную определяющую область (CDR3), и против В-клеток, которые экспрессируют ген IGHV4-34, потому что оба они связаны с аутореактивные В-клетки (35, 36). У пациентов с CMMRD как длина CDR3, так и частота реаранжировок, которые используют ген IGHV4–34, были нормальными (Рисунки 2C, D), предполагая, что отбор против аутореактивных B-клеток является нормальным и не зависит от дефицита MMR.

Обсуждение

Это исследование включало 10 ранее неопубликованных и 5 недавно зарегистрированных неродственных пациентов с CMMRD. В целом, генотипы и клинические проявления этих 15 пациентов в отношении характера злокачественных новообразований, возраста начала и спектра незлокачественных симптомов согласуются с предыдущими выводами. Интересно, что у двух пациентов были расширенные участки кожи с сосудистыми мальформациями, что (пока) не было включено в систему баллов C4CMMRD (5).Пациент P10 является вторым пациентом CMMRD, у которого была обнаружена опухоль Вильмса (нефробластома), а пациент P7 является первым пациентом CMMRD с опухолью филлоидной формы. Что касается потенциальных корреляций генотип-фенотип, следует отметить, что у двух пациентов с дефицитом MSH6 (P2 и P14) была медуллобластома. Поскольку шесть из десяти ранее опубликованных случаев CMMRD с медуллобластомой также были с дефицитом MSH6, и учитывая, что только примерно 20% пациентов с CMMRD вызваны двуаллельными мутациями MSH6 , это предполагает чрезмерную представленность медуллобластомы среди людей с дефицитом MSH6.Глиома высокой степени злокачественности была диагностирована у семи пациентов, шесть из которых несли двуаллельные мутации PMS2 . Среди пациентов с мутациями PMS2 у двоих (P1 и P6) был диагностирован колоректальный рак как первая злокачественная опухоль только в возрасте двадцати лет, что подтверждает представление о менее пенетрантных формах CMMRD, особенно у лиц с дефицитом PMS2. В соответствии с более высокой пенетрантностью двуаллельных мутаций MLh2 оба пациента с дефицитом MLh2 (P7 и P8) имели T-NHL в младенчестве.Тем не менее, одна из них (P7) пережила эту, а также еще три злокачественные опухоли. Мы также сообщаем здесь семейный анамнез и данные для первого пациента с CMMRD (P13) с одной наследственной и одной de novo мутацией MSH6 , которая отсутствует у обоих родителей.

В настоящем исследовании мы проверили, связана ли CMMRD с клинически значимым PID с преобладающим дефицитом антител или гипер-IgM-подобным синдромом и постоянным нарушением формирования B-памяти, легко обнаруживаемым с помощью сбора анамнеза, физического осмотра и рутинных процедур. иммунологические анализы.Эта гипотеза была основана на известной роли аппарата MMR в иммуноглобулиновом CSR и SHM у людей и мышей (8, 9, 11, 18, 37–44) и предыдущих открытиях у пациентов с CMMRD (13–17). В отличие от более ранних исследований, в которых гены MMR и их функция изучались в отобранных когортах пациентов с ВЗОМТ, мы использовали более клинический и беспристрастный подход, пытаясь подтвердить и описать или исключить явный и релевантный ВЗОМТ у ряда последовательно зарегистрированных пациентов с CMMRD. После этого систематического анализа в ходе расширенных рутинных анализов клеточной и гуморальной иммунной системы были обнаружены только противоречивые лабораторные отклонения, частично повторяющие предыдущие данные о людях и мышах, и в них отсутствовала какая-либо клиническая корреляция с точки зрения симптоматического синдрома ВЗОМТ.Ни у одного из 15 пациентов не было клинических признаков ВЗОМТ в соответствии с международными рекомендациями (45, 46). Хотя у 3 из 12 обследованных пациентов наблюдались умеренно или умеренно повышенные концентрации IgM (1,77–3,68 г / дл с широко варьирующимися возрастными нормальными диапазонами), их формирование IgG и специфических антител было неизменным, и только у двух из них был сопутствующий пограничный IgG2. снижение и один, дефицит IgA. С другой стороны, у 3 из 12 пациентов были снижены концентрации IgM, и у большинства наблюдались нормальные концентрации подклассов IgG и IgG, за исключением IgG4.К сожалению, полный иммунологический лабораторный анализ был проведен только у 12 из 15 пациентов. Недавняя химио- или иммуносупрессивная терапия помешала проведению лабораторных анализов у ​​трех пациентов, а расширенные серологические данные не могли быть получены в местной больнице для одного пациента. Хотя синдром гипер-IgM нельзя исключить только по гуморальным параметрам, очевидно, что у большинства проанализированных пациентов не было результатов серологических лабораторных исследований, которые предполагали бы синдром гипер-IgM (например,g., увеличение IgM и одновременно снижение IgG и / или IgA) или симптоматический дефект образования специфических антител. Тот факт, что концентрации IgG, по-видимому, чаще снижались у подростков и молодых людей (от 10 лет и старше; рис. 1А, верхняя панель), может указывать на возрастное субклиническое ухудшение лабораторного иммунного фенотипа. Напротив, у этих людей концентрации IgA были выше, чем у более молодых пациентов (рис. 1А, центральная панель). Эти результаты слишком противоречивы, чтобы поддержать, но могут соответствовать гипотезе о том, что долгоживущие плазматические клетки, продуцирующие IgG и / или IgA, приобретают актуальность с возрастом в этом контексте (9, 47).Кроме того, количество пациентов слишком мало, чтобы подтвердить эту наблюдаемую тенденцию возрастной зависимости или подозревать корреляцию генотип-фенотип, особенно потому, что пациенты старшего возраста в нашей когорте исследования включали больше людей с дефицитом PMS2, чем люди с другими дефицитами MMR. Соответственно, возможный вывод о более высокой степени иммунодефицита у пациентов с дефицитом PMS2 по сравнению с пациентами с дефицитом MSH6, как предполагают результаты предыдущих исследований, показывающие, что три из девяти пациентов с дефицитом PMS2 имели симптомы и нуждались в замене IgG по сравнению с ни одному из восьми лиц с дефицитом MSH6 (16, 17), не могут быть подтверждены нашими данными.Поскольку наше исследование включало неотобранную коллекцию пациентов, последовательно зарегистрированных в CMMRD в течение заданного периода времени, мы можем исключить смещение отбора в сторону или против иммунодефицита. Кроме того, в связи с модальностью пополнения в представленной когорте маловероятно наличие экологической или эпигенетической предвзятости. Тем не менее, несмотря на отсутствие клинических коррелятов, таких как бактериальные инфекции, которые можно было бы приписать дефициту антител в нашей когорте, наши данные подтверждают предыдущие исследования, поскольку у части пациентов с CMMRD были иммунные биологические аномалии, такие как снижение количества переключаемых классов и неклассовых — переключили В-клетки памяти и различные изменения в подтипах иммуноглобулинов, и мы обнаружили снижение количества плазмобластов CD38 ^hi IgM ^— с переключением классов у большинства людей, что в совокупности указывает на неоптимальную реакцию зародышевого центра.

Данные предполагают более избыточную роль отдельных компонентов системы MMR in vivo или механизма MMR в целом у человека, переключенного изотипа, образования специфических антител и дифференцировки B-клеток. Эти компоненты могут быть заменены, например, путем эксцизионной репарации оснований (9, 11), а не другими механизмами репарации ДНК, такими как комплекс MRE11 – RAD50 – NBS1 или ATM и NHEJ (10). Результаты в этой когорте пациентов с CMMRD напоминают иммунный фенотип пациентов с дефицитом XRCC4.XRCC4 является партнером связывания LIG4 и компонентом пути NHEJ. У людей с дефицитом XRCC4 обнаруживается дефект диверсификации иммуноглобулинов в соединении, но у них нормальные концентрации иммуноглобулинов и отсутствуют клинические признаки иммунодефицита (48).

Аутоиммунные заболевания являются типичными проявлениями у пациентов с синдромами комбинированного иммунодефицита, включая дефицит CD40 / CD40L (синдромы гипер-IgM типа 3 и 1 соответственно) и с преобладающими нарушениями образования антител, такими как ОВИН.Кроме того, системная красная волчанка (СКВ) часто встречается в подгруппе дефицита комплемента (49), а СКВ ранее описывалась по крайней мере у трех независимых пациентов с дефицитом MSH6 (17, 50, 51). Мы обнаружили антинуклеарные антитела у двух из пяти исследованных лиц в этой когорте (P6, 26 лет и P11, 7 лет), как с дефицитом PMS2, так и без симптомов в отношении аутоиммунитета. Из-за относительно высокой распространенности положительности антинуклеарных антител (ANA) (> 10%) в общей популяции детей и подростков (52) и небольшого числа пациентов с CMMRD, которые были протестированы на ANA до настоящего времени, эти результаты не должны быть подтверждены. переоценен.Тем не менее, связь между CMMRD и положительностью ANA и риском развития СКВ должна быть дополнительно исследована, и, по крайней мере, необходимо рассмотреть возможность проведения скрининга на исходные уровни ANA, начиная с подросткового возраста.

Восстановление несоответствия играет важную роль в разрешении урацил: гуаниновых несовпадений, которые появляются во время SHM и CSR. Хотя на клеточном уровне не было обнаружено различий в компартменте В-клеток, подробный молекулярный анализ перестроек рецепторов В-клеток, происходящих из отобранных по антигену В-клеток, показал явное снижение частоты SHM и изменений в распределении подклассов IGHG и IGHA. .Эти эффекты на SHM и CSR могут иметь несколько причин, например, дефект во взаимодействии T: B-ячеек или внутренний дефект в самом процессе SHM и CSR. Основываясь на предыдущих исследованиях, показывающих, что MMR играет роль в SHM и CSR, наиболее вероятно, что дефект, наблюдаемый у пациентов с CMMRD в SHM и CSR, вызван внутренним дефектом этих процессов. Однако это не привело к постоянным изменениям частоты В-клеток памяти, и только у 3 из 15 пациентов уровень IgM был повышен от умеренного до умеренного.

В сочетании с предыдущими результатами наши результаты показывают, что, хотя дефицит подкласса IgG2 / 4, дефицит IgA или, в редких случаях, более тяжелые фенотипы образования антител, переключение класса В-клеток, нарушения созревания и формирования памяти могут быть обнаружены у пациентов с CMMRD. , они не являются ни постоянными, ни обязательными диагностическими признаками этого синдрома и, как правило, не имеют клинической корреляции.

Пациенты и методы

Пациент и сбор данных

Идентификация пациентов была достигнута через сеть генетиков и (педиатрических) онкологов, работающих по всей Европе и на Ближнем Востоке, которые были проинформированы об исследовании на конференциях и через личное общение с 2014 по 2017 год.Большинство участвовавших врачей были партнерами консорциума «Care for CMMRD (C4CMMRD)». Из 19 пациентов, которые изначально были включены в анализ, поскольку они оценивались на CMMRD на основе их фенотипических и онкологических особенностей, четверых пришлось исключить, поскольку CMMRD был исключен. Двум из этих пациентов был поставлен диагноз синдрома Линча (у каждого была гетерозиготная мутация в PMS2 и MSh3 ), а у двоих были другие предрасположенные к раку состояния. Результаты трех пациентов пришлось исключить из некоторых анализов, потому что они недавно получали химио- и / или истощающую В-клетки (анти-CD20) иммунную терапию (P3, P8 и P9, соответственно).Важно отметить, что у всех других пациентов забор крови проводился перед химио-, стероидным или иммунодепрессивным лечением или до адекватного интервала после терапии, с готовностью обеспечить восстановление иммунитета, что частично отражается в нормальном общем анализе крови (не показано), моноцитах, NK , и анализы подгруппы Т-клеток (таблица 3), подтвержденные лечащим врачом перед лабораторными анализами. Ни один из пациентов не получал терапевтических иммуноглобулинов до включения и забора крови. Чтобы получить данные истории болезни с акцентом на иммунодефицит, мы разработали анкету, в которой исследуются наиболее важные факты, касающиеся истории болезни пациентов и клинического статуса, включая инфекции, в соответствии с «расширенными клиническими предупреждающими признаками для ВЗОМТ» (45, 46), в стационаре или внутривенно. лечение антибиотиками, замедление роста, признаки нарушения иммунной регуляции, такие как аутоиммунитет и воспаление и т. д.(Рисунок S1 в дополнительных материалах). Расширенные рутинные иммунологические лабораторные данные были получены путем проведения ретроспективных обзоров карт на основе анкеты исследования и путем сбора результатов рекомендованных иммунологических анализов, которые были обоснованы предыдущими отчетами о различной степени гуморального иммунодефицита и нарушении созревания В-клеток при дефектах CSR (16, 17, 30, 31, 53). Исследование было проведено в соответствии с действующими руководящими принципами надлежащей клинической практики и Хельсинкской декларацией с одобрением IRB (29-178 ex 16/17) Медицинского университета Граца (IRB00002556).

Генетические лабораторные анализы

Стандартное молекулярно-генетическое тестирование включено для всех новых пациентов, полностью или частично проанализированных в Отделении генетики человека Медицинского университета Инсбрука (P2, P7, P12, P13, P14 и P16), анализ мутаций и сопутствующий анализ gMSI ДНК лимфоцитов периферической крови как ранее описано Ingham et al. (26). Повышенные соотношения gMSI указывают на двуаллельные мутации в PMS2, MLh2 или MSh3 , в то время как двуаллельные мутации MSH6 не обнаруживаются с помощью этого анализа.Для анализа мутаций все кодирующие экзоны и фланкирующие интронные области MMR и гена EPCAM были обогащены с помощью панели TruSightCancer на основе гибридизации (Illumina) и секвенированы на платформе MiSeq (Illumina). Данные последовательности были проанализированы с помощью программного обеспечения SeqNext (JSI), и все варианты, присутствующие в ≥5% считываний, были классифицированы в соответствии с консенсусными рекомендациями Американского колледжа медицинской генетики (25) как (вероятные) патогенные (обозначенные мутации), неклассифицированные. , или (вероятные) нерелевантные варианты.Количественный анализ данных последовательности в отношении вариаций числа копий (CNV) был выполнен с помощью инструмента CNV программного обеспечения SeqNext (JSI) и параллельно с программным обеспечением CNV Detective cnMOPS (54). Пациенты с CMMRD с вариантом неизвестной значимости (VUS; или моноаллельная мутация) в одном из генов MMR были дополнительно проанализированы прямым секвенированием кДНК всей кодирующей последовательности для оценки потенциальных эффектов сплайсинга VUS и / или выявления / исключения (другие) мутации, которые не были обнаружены массовым параллельным секвенированием (55).Этот анализ пока не был возможен для пациента P7. Для обнаружения PMS2 CNV была проведена мультиплексная амплификация зонда, зависимая от лигирования (MLPA), с использованием SALSA MLPA-Kit P008-B1 (MRC Holland) в соответствии с Wernstedt et al. (56).

Анализ мутаций для пациентов P8, P9 и P10 был проведен в лаборатории наследственного рака при университетской клинике Doce de Octubre (Мадрид, Испания). Здесь все экзонное кодирование и фланкирующие интронные области генов MMR были амплифицированы с использованием специально разработанной панели праймеров с Ion AmpliSeq Library Kit 2.0 (ThermoFisher) и секвенировали в системе Ion PGM (ThermoFisher). Данные анализировали с использованием программного обеспечения Ion Reporter (ThermoFisher).

Все обнаруженные мутации были подтверждены во втором образце ДНК, который был извлечен из независимо извлеченного образца крови. Положения нуклеотидов были пронумерованы в соответствии с рекомендациями Общества вариаций генома человека (57) с A стартового кодона ATG в экзоне 1, представляющим положение нуклеотида c.1, с использованием ссылочных номеров NM_000249.3 для MLh2 , NM_000251.2 для MSh3 , NM_000179.2 для MSH6 и NM_000535.5 для PMS 2.

Лабораторные иммунологические анализы

Помимо рутинных лабораторных анализов химии и клинической иммунологии, в центре Граца, Австрия, были выполнены специальные иммунологические анализы, которые включали проточную цитометрию на проточном цитометре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния) с панелью моноклональных антител от Beckman Coulter. (Вена, Австрия), Becton Dickinson (Вена, Австрия), Dako (Глоструп, Дания) и Miltenyi Biotech (Вена, Австрия и Бергиш-Гладбах, Германия).Анализ разнообразия TCR V beta (спектральное типирование) выполняли следующим образом: РНК из обогащенных подмножеств экстрагировали с использованием RNeasy Protect Mini Kit (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Количество РНК определяли с помощью Eppendorf Biophotometer plus (Eppendorf, Гамбург, Германия). Наконец, концентрацию РНК 1 мкг использовали для обратной транскрипции с помощью набора для синтеза первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР AMV (Roche, Вена, Австрия), выполняемого в соответствии с инструкциями производителя.кДНК разводили 1: 5 для ПЦР с использованием ДНК-полимеразы AmpliTaq Gold ™ (Applied Biosystems, Вена, Австрия), 1 × PCR Gold Buffer (Applied Biosystems, Вена, Австрия), 2,5 мМ MgCl ₂ (Applied Biosystems, Вена, Австрия) ), 0,4 мМ смеси для полимеризации dNTP (GE Healthcare, Вена, Австрия), 0,5 мкМ TCR C β 5’FAM-меченного праймера (Ingenetix, Вена, Австрия) и 0,5 мкМ немеченого праймера TCR V β (Ingenetix, Вена, Австрия) в соответствии с Монтейро и др. (58). Это привело к 25 реакциям на образец.Условиями цикла были этап денатурации при 94 ° C в течение 6 минут, 35 циклов при 94 ° C в течение 1 минуты каждый, 59 ° C в течение 1 минуты и 72 ° C в течение 1 минуты, с заключительным этапом отжига при 72 ° C в течение 7 мин. После амплификации к 1 мкл продукта ПЦР добавляли 0,5 мкл стандарта размера GeneSCan ​​™ -500 ROX ™ (Applied Biosystems, Вена, Австрия) и 12 мкл формамида HI-DI (Applied Biosystems, Вена, Австрия). Электрофорез выполняли с использованием генетического анализатора 3130 (Applied Biosystems, Вена, Австрия) и программного обеспечения для сбора данных 3130.Анализы проводили с использованием программного обеспечения GeneScan ^® (Applied Biosystems, Вена, Австрия). Расчеты включали количество пиков (оценка сложности) и площадь одного пика в процентах от всей площади пика.

Секвенирование нового поколения репертуара B-клеток

Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли из периферической крови с использованием фиколла, и мРНК выделяли с использованием набора Gen-Elute Mammalian total RNA miniprep kit от Sigma Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). кДНК была создана из 2 мкг РНК с использованием набора обратной транскриптазы Superscript II от Invitrogen (Пейсли, Великобритания).Транскрипты IGH были амплифицированы в мультиплексной ПЦР с использованием прямых праймеров Vh2-6 FR1 (BIOMED-2) и обратного праймера CgCH или IGHA, которые были адаптированы с последовательностью мультиплексного идентификатора для возможности мультиплексирования продуктов ПЦР (59–61 ). Продукты ПЦР очищали экстракцией из геля (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США) и гранулами Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter, Фуллертон, Калифорния, США). Продукты ПЦР секвенировали на 454 GS junior с использованием набора Lib-A V2 (Roche). Необработанные данные были демультиплексированы, 40 нт обрезаны на 5′- и 3′-сторонах для удаления последовательности праймера и преобразованы в файлы fasta с помощью ARGalaxy (62).Файлы fasta были загружены в IMGT High-V-Quest (версия 1.5.6) (63) для выравнивания с эталонными последовательностями. Впоследствии выходные файлы IMGT были проанализированы с помощью ARGalaxy (62). Чтобы получить уникальные перестройки и уменьшить наличие ошибок в последовательностях, только последовательности, присутствующие два или более раз (на основе нуклеотидной последовательности CDR1 – CDR3), были включены в анализ один раз. Кроме того, были исключены неполные последовательности или последовательности, содержащие неоднозначное основание « n ». Поскольку данные пациентов с CMMRD были очень клональными (определялись с помощью Change-O) (64), мы включили в анализ только одну последовательность на клон.Образцы, содержащие менее 45 уникальных перегруппировок IGH, были исключены из анализа. Данные пациентов с CMMRD сравнивались с данными 10 HC (в возрасте 6–22 лет), которые были ранее опубликованы (36). Подробную информацию о количестве последовательностей, полученных после фильтрации, можно найти в таблице S2 в дополнительных материалах.

Представление данных

Из-за небольшого числа пациентов был проведен только описательный анализ данных. Рисунки были созданы с использованием Prism 7.0c (программа GraphPad, Ла-Холья, Калифорния, США).

Исследование было проведено в соответствии с действующими рекомендациями по надлежащей клинической практике и Хельсинкской декларацией с одобрением IRB (29-178 ex 16/17) Медицинского университета Граца (IRB00002556). Расширенные рутинные иммунологические лабораторные данные были получены путем проведения ретроспективных обзоров карт на основе вопросника исследования и путем сбора результатов рекомендованных иммунологических анализов, которые были подтверждены предыдущими отчетами о различной степени гуморального иммунодефицита и нарушении созревания В-клеток при дефектах рекомбинации с переключением классов (16, 17, 30, 31, 53).

Взносы авторов

MS и KW разработали исследование. KW, CC и LB организовали идентификацию пациентов и включение в исследование. В.Т. написал первый черновик рукописи и таблиц; Фигуры нарисовал М.С. MS и KW отредактировали окончательную версию рукописи, которую одобрили все авторы. MS, KW и VT организовали документирование клинических и лабораторных данных и передачу образцов крови в (справочные) лаборатории. MS, AR, WS, MK, HI и MB разработали и выполнили иммунологические лабораторные анализы, которые не проводились на местном уровне.KW, SW и JZ организовали и выполнили молекулярно-генетические тесты, которые не проводились на месте, и контрольные анализы. DR, CC, TR, DI, HI, HB, MN, MS, DJ-L, IR, AA, CB, ND-P, LA и LB заботились о пациентах, записывали их истории болезни, собирали лабораторные данные и активные партнеры сети «Care 4 CMMRD».

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы высоко оценивают сотрудничество участвующих пациентов и их семей, а также медицинского персонала в пунктах оказания помощи, который помог нам получить клинические и лабораторные данные. Биомедицинские помощники Барбара Эгнер и Барбара Леопольд (Грац) благодарим за проведение расширенных рутинных лабораторных анализов, а членов консорциума C4CMMRD — за критическое обсуждение данных. MS и исследовательское отделение детской гематологии и иммунологии частично финансируются Фондом помощи детям Штирии по борьбе с раком ( Steirische Kinderkrebshilfe ).Кроме того, авторы благодарят доктора Сару Крокетт за научное редактирование. Исследование для этой рукописи было (частично) выполнено за счет гранта программы исследований перевода Фонда Джеффри Моделла (MB).

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.01506/full#supplementary-material.

Список литературы

1. Гамильтон С. Р., Лю Б., Парсонс Р. Э., Пападопулос Н., Джен Дж., Пауэлл С. М. и др.Молекулярные основы синдрома Тюрко. N Engl J Med (1995) 332: 839–47. DOI: 10.1056 / NEJM199503303321302

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Виммер К., Эцлер Дж. Синдром дефицита репарации конституционального несоответствия: видели ли мы пока только верхушку айсберга? Hum Genet (2008) 124: 105–22. DOI: 10.1007 / s00439-008-0542-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Виммер К., Розенбаум Т., Мессиан Л.Связь между синдромом дефицита репарации конституционального несоответствия и нейрофиброматозом 1 типа. Clin Genet (2017) 91: 507–19. DOI: 10.1111 / cge.12904

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Васен HF, Ghorbanoghli Z, Bourdeaut F, Cabaret O, Caron O, Duval A, et al. Рекомендации по надзору за людьми с конституциональной недостаточностью восстановления несоответствия, предложенные европейским консорциумом «Уход за CMMR-D» (C4CMMR-D). J Med Genet (2014) 51: 283–93.DOI: 10.1136 / jmedgenet-2013-102238

CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Виммер К., Кратц С.П., Васен Х.Ф., Карон О., Колас С., Энтц-Верле Н. и др. Диагностические критерии синдрома дефицита репарации конституционального несоответствия: предложения Европейского консорциума «Care for CMMRD» (C4CMMRD). J Med Genet (2014) 51: 355–65. DOI: 10.1136 / jmedgenet-2014-102284

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Дурно К., Боланд С. Р., Коэн С., Доминиц Дж. А., Джардиелло Ф. М., Джонсон Д. А. и др.Рекомендации по надзору и лечению синдрома дефицита репарации двуаллельного несоответствия (BMMRD): консенсусное заявление межведомственной целевой группы США по колоректальному раку. Гастроэнтерология (2017) 152: 1605–14. DOI: 10.1053 / j.gastro.2017.02.011

CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Табори Ю., Хансфорд Дж. Р., Ахатц М. И., Кратц С. П., Плон С. Е., Фребур Т. и др. Рекомендации по клиническому ведению и надзору за опухолями унаследованного дефицита восстановления несоответствия в детстве. Clin Cancer Res (2017) 23: e32–7. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-17-0574

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. де Миранда Н.Ф., Бьоркман А., Пан-Хаммарстром К. Восстановление ДНК: связь между первичным иммунодефицитом и раком. Ann N Y Acad Sci (2011) 1246: 50–63. DOI: 10.1111 / j.1749-6632.2011.06322.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Whiteside D, Mcleod R, Graham G, Steckley JL, Booth K, Somerville MJ, et al.Гомозиготная мутация зародышевой линии гена MSh3 человека предрасполагает к гематологической злокачественности и множественным пятнам с молоком. Cancer Res (2002) 62: 359–62. DOI: 10.1111 / j.1399-0004.2007.00803.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Остергаард Дж. Р., Сунде Л., Оккельс Х. Нейрофиброматоз фон Реклингхаузена, фенотип типа I и раннее начало рака у братьев и сестер, гетерозиготных по мутациям в MSH6. Am J Med Genet A (2005) 139A: 96–105; Обсуждение 196.DOI: 10.1002 / ajmg.a.30998

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Скотт Р.Х., Мансур С., Причард-Джонс К., Кумар Д., Максуини Ф., Рахман Н. Медуллобластома, острый миелоцитарный лейкоз и карциномы толстой кишки у ребенка с двуаллельными мутациями MSH6. Нат Клин Практик Онкол (2007) 4: 130–4. DOI: 10.1038 / ncponc0719

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Перон С., Метин А., Гардес П., Альянакян М.А., Шеридан Е., Кратц С.П. и др.Дефицит PMS2 человека связан с нарушенной рекомбинацией переключения класса иммуноглобулинов. J Exp Med (2008) 205: 2465–72. DOI: 10.1084 / jem.20080789

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Gardes P, Forveille M, Alyanakian MA, Aucouturier P, Ilencikova D, Leroux D, et al. Дефицит MSH6 у человека связан с нарушением созревания антител. J Immunol (2012) 188: 2023–9. DOI: 10.4049 / jimmunol.1102984

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18.Sekine H, Ferreira RC, Pan-Hammarstrom Q, Graham RR, Ziemba B, De Vries SS и др. Роль Msh5 в регуляции рекомбинации переключателей класса Ig. Proc Natl Acad Sci U S. A (2007) 104: 7193–8. DOI: 10.1073 / pnas.0700815104

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Предложение SM, Pan-Hammarstrom Q, Hammarstrom L, Harris RS. Уникальные вариации генов репарации ДНК и потенциальные ассоциации с синдромами первичной недостаточности антител IgAD и CVID. PLoS One (2010) 5: e12260.DOI: 10.1371 / journal.pone.0012260

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Hauck F, Voss R, Urban C, Seidel MG. Внутренние и внешние причины злокачественных новообразований у пациентов с первичными иммунодефицитными расстройствами. J Allergy Clin Immunol (2018) 141: 59–68.e54. DOI: 10.1016 / j.jaci.2017.06.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Лавуан Н., Колас С., Мулерис М., Бодо С., Дюваль А., Энтц-Верле Н. и др.Синдром дефицита восстановления конституционального несоответствия: клиническое описание во французской когорте. J Med Genet (2015) 52 (11): 770–8. DOI: 10.1136 / jmedgenet-2015-103299

CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Иленчикова Д. Синдром дефицита репарации конституционального несоответствия (CMMR-D) — клинический случай семьи с двуаллельной мутацией MSH6. Клин Онкол (2012) 25 (Прил.): С34–8.

Google Scholar

23. Baris HN, Barnes-Kedar I, Toledano H, Halpern M, Hershkovitz D, Lossos A.Дефицит исправления конституционального несоответствия в Израиле: высокая доля мутаций основателя в генах MMR и кровном родстве. Педиатр по раку крови (2016) 63 (3): 418–27. DOI: 10.1002 / pbc.25818

CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Суэринк М., Потджер Т.П., Верслуйс А.Б., Тен Брок С.В., Топс К.М., Виммер К. и др. Дефицит коррекции конституционального несоответствия у здорового ребенка: диагностика на месте? Clin Genet (2018) 93: 134–7. DOI: 10.1111 / cge.13053

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25.Ричардс С., Азиз Н., Бейл С., Бик Д., Дас С., Гастье-Фостер Дж. И др. Стандарты и руководящие принципы интерпретации вариантов последовательностей: совместная консенсусная рекомендация Американского колледжа медицинской генетики и геномики и ассоциации молекулярной патологии. Genet Med (2015) 17: 405–24. DOI: 10.1038 / gim.2015.30

CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Ингхэм Д., Диггл С. П., Берри I, Бристоу, Калифорния, Хейворд Б. Е., Рахман Н. и др. Простое обнаружение микросателлитной нестабильности зародышевой линии для диагностики синдрома репарации конституционального несоответствия. Hum Mutat (2013) 34: 847–52. DOI: 10.1002 / humu.22311

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Маркос И., Боррего С., Уриосте М., Гарсиа-Валлес С., Антиноло Г. Мутации в гене восстановления несоответствия ДНК MLh2, связанные с ранним началом рака толстой кишки. J Pediatr (2006) 148: 837–9. DOI: 10.1016 / j.jpeds.2006.01.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. Huck K, Feyen O, Ghosh S, Beltz K, Bellert S, Niehues T.В-клетки памяти у здоровых детей и детей с дефицитом антител. Clin Immunol (2009) 131: 50–9. DOI: 10.1016 / j.clim.2008.11.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Имаи К., Каталан Н., Плебани А., Мароди Л., Санал О, Кумаки С. и др. Синдром гипер-IgM типа 4 с селективной недостаточностью, присущей В-лимфоцитам, при рекомбинации с переключением класса Ig. J Clin Invest (2003) 112: 136–42. DOI: 10.1172 / JCI18161

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31.Перон С., Пан-Хаммарстром К., Имаи К., Ду Л., Таубенхайм Н., Санал О. и др. Первичный иммунодефицит, характеризующийся дефектной рекомбинацией переключения класса иммуноглобулинов и нарушенной репарацией ДНК. J Exp Med (2007) 204: 1207–16. DOI: 10.1084 / jem.20070087

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Schauer U, Stemberg F, Rieger CH, Borte M, Schubert S, Riedel F, et al. Концентрации подкласса IgG в сертифицированном эталонном материале 470 и эталонные значения для детей и взрослых, определенные с помощью реагентов сайта связывания. Clin Chem (2003) 49: 1924–9. DOI: 10.1373 / Clinchem.2003.022350

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Driessen GJ, Ijspeert H, Weemaes CM, Haraldsson A, Trip M, Warris A, et al. Дефицит антител у пациентов с атаксией и телеангиэктазией вызван нарушением гомеостаза B- и T-клеток и снижением разнообразия иммунного репертуара. J Allergy Clin Immunol (2013) 131: 1367–75.e1369. DOI: 10.1016 / j.jaci.2013.01.053

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34.Берковска М.А., Дриссен Г.Дж., Бикос В., Гроссерихтер-Вагенер С., Стаматопулос К., Черутти А. и др. В-клетки памяти человека происходят от трех различных путей созревания, зависящих от зародышевого центра. Кровь (2011) 118: 2150–8. DOI: 10.1182 / кровь-2011-04-345579

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Вардеманн Х., Юрасов С., Шефер А., Янг Дж. В., Меффре Э., Нуссенцвейг М.С. Преобладающая продукция аутоантител ранними предшественниками В-клеток человека. Наука (2003) 301: 1374–7. DOI: 10.1126 / science.1086907

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Эйсперт Х., Ван Скоувенбург П.А., Ван Цессен Д., Пико-Книжненбург И., Дриссен Г.Дж., Стаббс А.П. и др. Оценка репертуара рецепторов B-клеток, испытывающих антиген, у здоровых детей и взрослых. Front Immunol (2016) 7: 410. DOI: 10.3389 / fimmu.2016.00410

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37.Эренштейн MR, Neuberger MS. Дефицит Msh3 влияет на эффективность и локальную специфичность последовательности иммуноглобулиновой рекомбинации с переключением классов: аналогично соматической гипермутации. EMBO J (1999) 18: 3484–90. DOI: 10.1093 / emboj / 18.12.3484

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Schrader CE, Edelmann W., Kucherlapati R, Stavnezer J. Снижение переключения изотипа в B-клетках селезенки мышей, дефицитных по ферментам репарации ошибочного спаривания. J Exp Med (1999) 190: 323–30.DOI: 10.1084 / jem.190.3.323

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Эренштейн М.Р., Рада С., Джонс А.М., Мильштейн С., Нойбергер М.С. Последовательности переключающих соединений у мышей с дефицитом PMS2 обнаруживают опосредованный микрогомологией механизм рекомбинации переключения класса Ig. Proc Natl Acad Sci U S. A (2001) 98: 14553–8. DOI: 10.1073 / pnas.241525998

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Schrader CE, Vardo J, Stavnezer J.Роль белков репарации ошибочного спаривания Msh3, Mlh2 и Pms2 в переключении классов иммуноглобулинов показана с помощью анализа последовательности рекомбинационных соединений. J Exp Med (2002) 195: 367–73. DOI: 10.1084 / jem.20011877

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Шен Х.М., Танака А., Бозек Г., Николае Д., Сторб У. Соматическая гипермутация и рекомбинация с переключением классов у мышей с двойным нокаутом Msh6 (- / -) Ung (- / -). J Immunol (2006) 177: 5386–92. DOI: 10.4049 / jimmunol.177.8.5386

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Schanz S, Castor D, Fischer F, Jiricny J. Вмешательство несоответствия и эксцизионной репарации оснований во время обработки соседних U / G неправильных пар может играть ключевую роль в соматической гипермутации. Proc Natl Acad Sci U S. A (2009) 106: 5593–8. DOI: 10.1073 / pnas.0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44. Чахван Р., Эдельманн В., Шарфф М.Д., Роа С. Предрасположенная к ошибкам репарация генов иммуноглобулинов, вызванная несоответствием. Biomed Pharmacother (2011) 65: 529–36. DOI: 10.1016 / j.biopha.2011.09.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

45. Arkwright PD, Gennery AR. Десять предупреждающих признаков первичного иммунодефицита: в 21 веке нужна новая парадигма. Ann N Y Acad Sci (2011) 1238: 7–14. DOI: 10.1111 / j.1749-6632.2011.06206.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

46. Фарманд С., Бауман У., фон Бернут Х., Борт М., Фёрстер-Вальдль Э., Франке К. и др.[Междисциплинарное руководство AWMF по диагностике первичного иммунодефицита]. Клинский падиатр (2011) 223: 378–85. DOI: 10.1055 / с-0031-1287835

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Караджа Н.Э., Дюранди А., Гулез Н., Аксу Г., Кутуккулер Н. Исследование пациентов с фенотипом гипер-IgM типа IV, которые выздоровели спонтанно в позднем детстве, и обзор литературы. Eur J Pediatr (2011) 170: 1039–47. DOI: 10.1007 / s00431-011-1400-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48.Murray JE, Van Der Burg M, IJspeert H, Carroll P, Wu Q, Ochi T. и др. Мутации в компоненте NHEJ XRCC4 вызывают изначальную карликовость. Am J Hum Genet (2015) 96: 412–24. DOI: 10.1016 / j.ajhg.2015.01.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Пикард С., Аль-Херц В., Бусфиха А., Казанова Дж. Л., Шатила Т., Конли М.Э. и др. Заболевания, связанные с первичным иммунодефицитом: обновленная информация о классификации комитета экспертов международного союза иммунологических обществ по первичному иммунодефициту 2015 г. J Clin Immunol (2015) 35 (8): 696–726. DOI: 10.1007 / s10875-015-0201-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Плашке Дж., Линнебахер М., Клоор М., Геберт Дж., Кремер Ф. В., Тиншерт С. и др. Сложная гетерозиготность по двум мутациям MSH6 у пациента с ранним началом HNPCC-ассоциированного рака, но без гематологических злокачественных новообразований и опухоли головного мозга. евро J Hum Genet (2006) 14: 561–6. DOI: 10.1038 / sj.ejhg.5201568

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51.Ранер Н., Хефлер Г., Хогенауэр С., Лакнер С., Стейнке В., Зенгтеллер М. и др. Сложная гетерозиготность по двум мутациям MSH6 у пациента с ранним началом колоректального рака, витилиго и системной красной волчанки. Am J Med Genet A (2008) 146A: 1314–9. DOI: 10.1002 / ajmg.a.32210

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Sperotto F, Cuffaro G, Brachi S, Seguso M, Zulian F. Распространенность антинуклеарных антител у школьников в период полового созревания и возможная связь с мышечно-скелетной болью: продольное исследование. J Rheumatol (2014) 41: 1405–8. DOI: 10.3899 / jrheum.130948

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Дюранди А. Цитидиндезаминаза, индуцированная активацией: двойная роль в рекомбинации с переключением классов и соматической гипермутации. Eur J Immunol (2003) 33: 2069–73. DOI: 10.1002 / eji.200324133

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54. Повысил Г., Цика А., Фогт Дж., Хауншмид В., Мессиан Л., Цшок Дж. И др.panelcn.MOPS: определение числа копий в целевых данных панели NGS для клинической диагностики. Hum Mutat (2017) 38: 889–97. DOI: 10.1002 / humu.23237

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55. Etzler J, Peyrl A, Zatkova A, Schildhaus HU, Ficek A, Merkelbach-Bruse S, et al. Анализ мутаций на основе РНК выявляет необычный дефект сплайсинга MSH6 и позволяет избежать влияния псевдогена PMS2. Hum Mutat (2008) 29: 299–305. DOI: 10.1002 / humu.20657

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

56.Wernstedt A, Valtorta E, Armelao F, Togni R, Girlando S, Baudis M и др. Улучшенный анализ амплификации зонда, зависящий от мультиплексного лигирования, позволяет идентифицировать вредоносный аллель PMS2, образованный рекомбинацией с кроссовером между PMS2 и PMS2CL. Гены Хромосомы Рак (2012) 51: 819–31. DOI: 10.1002 / gcc.21966

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

57. den Dunnen JT, Antonarakis SE. Расширения номенклатуры мутаций и предложения для описания сложных мутаций: обсуждение. Hum Mutat (2000) 15: 7–12. DOI: 10.1002 / (SICI) 1098-1004 (200001) 15: 1 <7 :: AID-HUMU4> 3.0.CO; 2-N

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

58. Монтейро Дж., Хингорани Р., Чой И. Х., Сильвер Дж., Перголицци Р., Грегерсен П. К.. Олигоклональность в репертуаре CD8 + Т-клеток человека у нормальных субъектов и монозиготных близнецов: значение для исследований инфекционных и аутоиммунных заболеваний. Mol Med (1995) 1: 614–24.

PubMed Аннотация | Google Scholar

59.van Dongen JJ, Langerak AW, Bruggemann M, Evans PA, Hummel M, Lavender FL, et al. Дизайн и стандартизация праймеров и протоколов ПЦР для обнаружения рекомбинаций гена клонального иммуноглобулина и Т-клеточного рецептора при подозреваемых лимфопролиферациях: отчет о согласованном действии BIOMED-2 BMh5-CT98-3936. Лейкемия (2003) 17: 2257–317. DOI: 10.1038 / sj.leu.2403202

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

60. Тиллер Т., Меффре Э., Юрасов С., Цуйджи М., Нуссенцвейг М.С., Вардеманн Х.Эффективное получение моноклональных антител из единичных В-клеток человека с помощью ОТ-ПЦР одиночных клеток и клонирования вектора экспрессии. J Immunol Methods (2008) 329: 112–24. DOI: 10.1016 / j.jim.2007.09.017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Berkowska MA, Schickel JN, Grosserichter-Wagener C, De Ridder D, Ng YS, Van Dongen JJ, et al. Циркулирующие человеческие CD27-IgA + В-клетки памяти распознают бактерии с полиреактивными Ig. J Immunol (2015) 195: 1417–26.DOI: 10.4049 / jimmunol.1402708

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

62. IJspeert H, Van Schouwenburg PA, Van Zessen D, Pico-Knijnenburg I, Stubbs AP, Van Der Burg M. Антигенная рецепторная галактика: удобный веб-инструмент для анализа и визуализации рецепторов Т- и В-клеток данные репертуара. J Immunol (2017) 198: 4156–65. DOI: 10.4049 / jimmunol.1601921

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

63. Аламьяр Э., Дуру П., Лефранк М.П., ​​Джудичелли В.Инструменты IMGT ((R)) для нуклеотидного анализа репертуаров, полиморфизмов и мутаций IG иммуноглобулинов (IG) и Т-клеточных рецепторов (TR) V- (D) -J: IMGT / V-QUEST и IMGT / HighV-QUEST для NGS. Методы Мол Биол (2012) 882: 569–604. DOI: 10.1007 / 978-1-61779-842-9_32

CrossRef Полный текст | Google Scholar

64. Gupta NT, Vander Heiden JA, Uduman M, Gadala-Maria D, Yaari G, Kleinstein SH. Change-O: набор инструментов для анализа данных крупномасштабного секвенирования репертуара B-клеточного иммуноглобулина. Биоинформатика (2015) 31: 3356–8. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btv359

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Диета с высоким содержанием белка / низким содержанием жиров может взаимодействовать с вариантами генов связывающего витамин D белка, чтобы снизить риск депрессии у явно здоровых взрослых — FullText — Lifestyle Genomics 2018, Vol. 11, № 1

Аннотация

Предпосылки: Недавние исследования показали, что депрессия обратно коррелирует с высоким содержанием белка и низким потреблением жиров и положительно коррелирует с витамином D-связывающим белком (VDBP).Таким образом, целью данного исследования было изучить взаимосвязь между диетическими схемами белков / жиров и генотипами VDBP в отношении риска депрессии у внешне здоровых взрослых, у которых не было диагностировано никаких хронических заболеваний. Методы: В этом исследовании 265 человек (126 мужчин и 139 женщин) в возрасте 18–55 лет были набраны из общин центрального и западного Тегерана на основе удобной выборки. Состав тела измерялся с помощью анализатора состава тела, и симптомы депрессии классифицировались как нормальная, умеренная депрессия или тяжелая депрессия с использованием опросника «Шкала депрессии, тревожности и стресса 21» (DASS-21).Образцы питания определялись с помощью полуколичественного опросника частоты приема пищи, чтобы оценить типичное потребление пищи в течение 12-месячного периода. У всех участников были взяты образцы крови и проведены биохимические измерения. Анализ двух полиморфизмов (rs7041 и rs4588) в гене GC, который кодирует VDBP, был выполнен с помощью полиморфизма длины фрагмента рестрикции полимеразной цепной реакции. Результаты: Была обнаружена статистически значимая связь между депрессией и диетой ( p = 0.03) после разделения участников на три группы: группа с высоким содержанием белка / низким содержанием жира (HP / LF), группа с умеренным содержанием белка / умеренным содержанием жира (MP / MF) и группа с низким содержанием белка / высоким содержанием жира. (LP / HF) группа. Более того, результаты показали, что депрессия связана как с полиморфизмом rs7041, так и с полиморфизмом rs4588 ( p = 0,05 и p = 0,02, соответственно). Затем мы использовали полиномиальное логистическое моделирование для исследования риска депрессии. Наблюдалась значительная взаимосвязь между диетой HP / LF и полиморфизмом rs7041 в группах умеренной и тяжелой депрессии (β = –0.30, p = 0,05, β = –0,48, p = 0,01 соответственно). Заключение: Это исследование показало, что диета HP / LF взаимодействует с полиморфизмом rs7041, причем носители аллеля T имеют более высокую распространенность умеренной и тяжелой депрессии.

© 2018 S. Karger AG, Базель

Введение

Депрессия — это распространенное психическое расстройство и вторая ведущая причина глобальной инвалидности, с высокой распространенностью, по оценкам, у 350 миллионов человек во всем мире [1].Депрессия характеризуется рядом симптомов, включая потерю интереса к повседневной деятельности на срок более 2 недель [1]. Последствия, связанные с депрессивными расстройствами, включают негативное влияние на отношения, семью и работу. Было подсчитано, что депрессивные расстройства являются значительной причиной бремени болезней как у мужчин, так и у женщин [1, 2]. В нескольких эпидемиологических исследованиях сообщается, что низкий уровень 25-гидроксивитамина D в сыворотке крови является фактором риска депрессии [3, 4].

Кальцитриол (1,25 [OH] ₂ D ₃ ) помогает поддерживать как количество нейронов, так и структуру нейронов с помощью механизмов детоксикации, включая ингибирование синтеза индуцируемой синтазы оксида азота и повышение уровня глутатиона [5], а также регулируя синтез нейротрофинов [6, 7] — все они являются факторами, влияющими на риск депрессии.Влияние кальцитриола на депрессию может быть связано с присутствием рецептора витамина D, витамин D-связывающего белка (VDBP) и / или фермента 1-альфа-гидроксилазы, который превращает 25 (OH) D ₃ в 1,25. (OH) ₂ D ₃ в головном мозге. Эти данные стимулировали попытки описать взаимосвязь между нервно-психическими расстройствами и развитием мозга [6].

В настоящем исследовании нашей целью было изучить эффекты полиморфизма в гене GC, который кодирует VDBP, а не циркулирующих уровней VDBP.VDBP обнаружен в спинномозговой жидкости человека [8] и представляет собой сывороточный белок, кодируемый геном GC — основным белком-носителем, ответственным за перенос кальцитриола к нейронам-мишеням [2]; однако мало что известно о роли VDBP в центральной нервной системе [9]. Два общих функциональных однонуклеотидных полиморфизма (SNP) присутствуют в экзоне 11 гена GC, и они приводят к нуклеотидным заменам в кодоне 416 (GAT на GAG; Asp на Glu; rs7041) и кодоне 420 (AAG на ACG; Thr на Lys. ; rs4588) [10].Аллель T в rs7041 и аллель A в rs4588 соответствуют аллелям риска, связанным с депрессией [11-14].

Многие исследования установили связь между диетой и депрессией. Например, существует взаимосвязь между диетой с высоким содержанием белка / низким содержанием жира (HP / LF) и депрессией [15, 16]. В ряде исследований показано влияние потребления белка на депрессию [16, 17]. Исследование влияния потребления белка с пищей на депрессию было сосредоточено на уровнях серотонина и концентрации триптофана в мозге [17].Было обнаружено, что концентрации VDBP в плазме чувствительны к дефициту белка в пище, хотя механизмы неизвестны [18].

В настоящем исследовании взаимодействие между диетическими белками / жирами и полиморфизмами GC, а также их влияние на риск депрессии, изучались на популяции здоровых взрослых иранцев, свободных от хронических заболеваний.

Субъекты и методы

Участники

Объектами исследования стали 265 человек (126 мужчин и 139 женщин) в возрасте от 18 до 55 лет, которые были набраны из всех регионов западного и центрального Тегерана с использованием удобной выборки на уровне сообществ [ 19].Информация была собрана в период с мая по сентябрь 2017 г. Критерии исключения: беременность; диагностированы заболевания печени, такие как вирусный гепатит; заболевания щитовидной железы, почек или сердечно-сосудистой системы; сердечная недостаточность; злокачественные новообразования; сахарный диабет; нахождение в любом остром или хроническом воспалительном состоянии, которое влияет на воспалительные маркеры; наличие какой-либо инфекции; будучи курильщиком; наличие в анамнезе гипертонии; или указание на злоупотребление алкоголем или наркотиками по самооценке.

Антропометрические оценки

Для всех участников исследования были измерены вес (кг), рост (см), окружность талии и бедра (см).Вес тела измерялся в легкой одежде с помощью электронных весов, рост измерялся босиком, а окружность бедра измерялась в самой большой части бедра поверх легкой одежды. Окружность талии измеряли с помощью антропометрической ленты, определяя расстояние посередине между нижним ребром и гребнем подвздошной кости, когда испытуемый стоял [20, 21].

Полный анализ состава тела

Состав тела всех людей оценивался с помощью анализатора сегментарного состава тела BC-418MA (Tanita, UK) [22].Измерения включали вес, ИМТ, массу жира, процентное содержание жира в организме, массу брюшного жира, мышечную массу, массу без жира и массу висцерального жира. Общий объем воды в организме был получен с помощью анализа биоэлектрического импеданса. Все участники голодали в течение ночи (10–12 ч) и ходили босиком, когда их оценивали с помощью анализа биоэлектрического импеданса [19]. Избегали проведения измерений после физических нагрузок; клиницисты ждали, пока пациенты достаточно отдохнут, чтобы предотвратить возможные различия в измеренных значениях.

Оценка рациона питания и подсчет HP / LF диеты

Участники придерживались своей обычной диеты. Диетическое потребление оценивалось с использованием достоверного и надежного [23], 147-пункта, полуколичественного опросника частоты приема пищи (FFQ) для оценки обычного потребления пищи людьми в течение предыдущих 12 месяцев. Частота потребления каждого продукта питания на ежедневной, еженедельной или ежемесячной основе была преобразована в суточное потребление; Затем размеры порций были преобразованы в граммы и миллилитры с помощью программного обеспечения Nutritionist (Nutritionist версия 4.0; Tinuviel Software, Уоррингтон, Великобритания). В конце концов, с помощью этого программного обеспечения было рассчитано общее потребление энергии. Структуры белково-жировой диеты рассчитывались согласно следующему методу. Используя данные, полученные из FFQ, было определено количество потребляемого белка и жира, и процент потребления белка и жира был рассчитан по следующим формулам: (потребление белка [г] × 4 / ккал) × 100 и (потребление жира [г] ] × 9 / ккал) × 100. Для оценки тертилей использовали ранговый метод. Тертильная оценка потребления белка проводилась следующим образом: (1) высокое потребление белка, (2) умеренное потребление белка и (3) низкое потребление белка; оценка потребления жира была противоположной.Затем оценки были объединены, и окончательная оценка была разделена на (1) HP / LF, (2) умеренное содержание белка / умеренное содержание жира (MP / MF) и (3) низкий уровень белка / высокий уровень. -жирный (LP / HF) рисунок. Среднее процентное содержание белка в диетах HP / LF, MP / MF и LP / HF составляло 16,9, 14,7 и 12,7% соответственно.

Симптомы депрессии

Данные были собраны с помощью опросника по шкале депрессии, тревожности и стресса 21 (DASS-21). Этот опросник представляет собой инструмент психологического скрининга, который позволяет различать симптомы депрессии, стресса и тревоги.Это надежный и проверенный инструмент с 21 пунктом в трех областях (депрессия, тревога и стресс) [24]. Людей попросили указать наличие симптомов, связанных с каждым параметром, за последнюю неделю, получив оценку от 0 до 3. Баллы по каждому домену были суммированы и затем классифицированы в соответствии с руководством DASS как нормальная, умеренная депрессия или тяжелая депрессия. [25].

Измерение артериального давления

Артериальное давление в состоянии покоя было измерено через 15 минут нахождения в кресле тем же человеком.Артериальное давление измеряли с использованием автоматического монитора артериального давления для надувания (автоматический цифровой монитор артериального давления Samsung BA507S; Samsung America, Inc.).

Лабораторные измерения

Все участники были направлены в амбулаторную клинику Шариатской больницы. Все исходные образцы крови были собраны между 8:00 и 10:00 утра, после 10–12 часов ночного голодания. После центрифугирования сыворотку выделяли и хранили при температуре –80 ° C. Все измерения проводились в лаборатории Центра исследований эндокринологии и метаболизма больницы Шариати.

Биохимические измерения

Метод GPO-PAP (глицерин-3-фосфатоксидаза, фенол 4-аминоантипиринпероксидаза) использовался для измерения уровней триглицеридов (ТГ), а уровень глюкозы в сыворотке крови измерялся с помощью GOD-PAP (глюкозооксидаза). фенол-4-аминоантипиринпероксидаза) [20]. Уровни общего холестерина (ОХ), а также холестерина прямых липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) и холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) измеряли с помощью ферментативного анализа клиренса и ферментативного метода конечных точек, соответственно.Все измерения проводились с использованием лабораторных наборов Randox (Randox Laboratories Ltd., Ардмор, Великобритания). 1,25 (OH) ₂ D ₃ в сыворотке измеряли с использованием набора BioSource (BioSource Europe SA, Nivelles, Бельгия) методом радиоиммуноанализа. Высокочувствительный С-реактивный белок (hs-CRP) в сыворотке крови оценивали методом иммунотурбидиметрического анализа (анализ высокой чувствительности; Hitachi 902). Контроль качества всех биохимических оценок проводился с использованием контрольной сыворотки в соответствии с инструкциями производителей.

Анализ полиморфизма гена GC

Геномную ДНК экстрагировали из 200 мл цельной крови с использованием набора GeneAll Mini Columns Type (GeneAll, Южная Корея). Выделенную ДНК использовали для оценки SNP rs4588 и rs7041, расположенных в гене GC. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили на SNP rs4588 и rs7041 с использованием прямого и обратного праймеров: прямой, 5′-CAAGTCTTATCACCATCCTG-3 ‘; обратный, 5’-GCCAAGTTACAATAACAC-3 ‘. ПЦР проводили в общем объеме 20 мкл, который включал 10 пмоль каждого праймера, 50 нг / мл ДНК и 1 М диметилсульфида.

Протокол амплификации состоял из этапа первичной денатурации при 94 ° C в течение 5 минут, за которым следовали 35 циклов денатурации при 60 ° C в течение 1 минуты, отжиг при 94 ° C в течение 45 секунд и удлинение при 72 ° C в течение 1 минуты. мин, и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 10 мин. Для аускультации SNP rs4588 (Asp, 416, Glu) и rs7041 (Thr, 420, Lys) использовали ферменты Sty I и Hae III следующим образом: для Hae III, продукт ПЦР 5 мкл, Hae III 1 мкл, буфер Y / Tango 10 × 1 мкл и дистиллированная вода (D.W.) 8 мкл, а для Sty I, продукта ПЦР 5 мкл, Sty I 1 мкл, буфера Y / Tango 10 × 1 мкл и D.W. 8 мкл.

Продукты переваривания окрашивали бромидом этидия на 2% агарозном геле и отображали. У индивидуумов, гомозиготных по аллелю Asp, была непереваренная полоса на 809 п.н., а у гомозиготных по аллелю Glu — две полосы (577 и 232 п.н.) в гене GC (rs7041). Гомозиготный аллель Lys имел две полосы (584 и 225 п.н.), тогда как аллель Thr в rs4588 проявлялся в виде одной полосы (809 п.н.).Гаплотипы определяли, наблюдая за продуктами переваривания обоих ферментов рестрикции. В GC 1S есть сайт Hae III, но нет сайта Sty I. В GC 1F нет ни Hae III, ни Sty I. В GC 2 есть Sty I, но нет сайта Hae III. Существование обоих сайтов рестрикции в одном гаплотипе еще не охарактеризовано [26].

Статистический анализ

Данные и статистический анализ выполнялись с использованием статистического пакета SPSS 20 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Согласно методу Педуцци, размер выборки оценивался с помощью бинарного логистического уравнения [27]. Нормальное распределение данных определяли с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Люди были разделены на категории в соответствии с баллами депрессии. Метод ранжирования использовался для оценки трех диетических групп (HP / LF, MP / MF и LP / HF).

Общая линейная модель и ANOVA использовались для оценки различий в биохимических измерениях и характеристиках между депрессивными группами, моделями питания и группами rs7041 и гаплотипами.Была использована общая линейная модель, скорректированная с учетом возраста, ИМТ, общей энергии, а также систолического и диастолического артериального давления в качестве искажающих эффектов. Тест t для независимых выборок был использован для оценки различий между двумя группами rs4588 в биохимических измерениях и характеристиках. Кодирование SNP выполнялось с использованием аддитивной модели.

Полиномиальный логистический регрессионный анализ был проведен для оценки взаимодействия между VDBP и моделями питания белков / жиров и скорректирован с учетом различий в возрасте, поле и ИМТ.Характеристики исследуемой популяции представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Статистическая значимость была определена как p ≤ 0,05 для всех анализов.

Результаты

Характеристики популяции исследования

Участники текущего исследования были практически здоровыми, их средний возраст, вес, рост и ИМТ составляли 35,08 ± 8,78 лет, 73,51 ± 15,66 кг, 168,23 ± 9,43 см и 25,93 ± 4.89 соответственно.

Связь между клиническими и биохимическими характеристиками участников и депрессивным статусом

В таблице 1 представлены клинические и биохимические характеристики 265 участников (126 мужчин и 139 женщин).Субъекты были разделены на категории в зависимости от депрессивного статуса и разделены на три группы: нормальная, умеренная депрессия и тяжелая депрессия. ANOVA выявил отсутствие статистически значимых различий между тремя группами депрессивного статуса по демографическим характеристикам и биохимическим измерениям; однако соотношение полов значительно отличалось ( p = 0,01). После поправки на возраст, ИМТ, общую энергию, систолическое и диастолическое артериальное давление с использованием общей линейной модели, отношения между депрессивным статусом и окружностью талии ( p = 0.04), процентное содержание жира ( p = 0,002), диастолическое артериальное давление ( p = 0,006), ЛПНП ( p = 0,03), ТГ ( p = 0,006) и уровень сахара в крови натощак (FBS; p = 0,008) были статистически значимыми. Однако апостериорный анализ не смог выявить статистически значимых различий между группами. Тем не менее, в группе тяжелой депрессии окружность талии и ЛПНП имели тенденцию быть более похожими на значения в нормальной группе, в то время как процентное содержание жира, диастолическое артериальное давление, ТГ и FBS в группе тяжелой депрессии были менее похожи на значения нормальная группа.

Таблица 1.

Исходные характеристики и биохимические измерения среди участников, разделенных в соответствии с депрессивным статусом

HP / LF Diet

Утвержденный полуколичественный FFQ из 147 пунктов был использован для оценки диетического питания [23]. Чтобы оценить диету, состоящую из белков и жиров, участники были разделены на категории в соответствии с их потреблением белков и жиров. Источники диетического белка включали красное мясо, обработанное красное мясо, птицу, жирные молочные продукты, нежирные молочные продукты, рыбу, яйца и бобовые.В таблице 2 показаны возраст, вес, рост, ИМТ, окружность талии и бедер, процент жира, систолическое и диастолическое артериальное давление, потребление белка и биохимические показатели для групп HP / LF, MP / MF и LP / HF.

Таблица 2.

Характеристики участников, разделенных на группы белково-жировой диеты

После категоризации наблюдались статистически значимые различия в возрасте ( p = 0,001), оценке депрессии ( p = 0,03), весе ( стр. <0.001), рост ( p <0,001), систолическое артериальное давление ( p <0,001), диастолическое артериальное давление ( p = 0,006), ЛПВП ( p = 0,004), ЛПНП ( p = 0,001. ), TC ( p <0,001), TG ( p <0,001) и hs-CRP ( p = 0,001). После учета возраста, пола, ИМТ, общей энергии, а также систолического и диастолического артериального давления между тремя группами сохранились достоверные различия по возрасту ( p <0.001), потребление белка ( p <0,0001), вес ( p = 0,002), рост ( p <0,001), окружность бедра ( p = 0,005), систолическое артериальное давление ( p <0,001 ), диастолическое артериальное давление ( p = 0,001), HDL ( p = 0,002), TC ( p <0,007), TG ( p <0,001) и hs-CRP ( p = 0,001 ). Процент тяжелой депрессии среди участников группы HP / LF (7,8%) был значительно ниже, чем среди лиц в группе LP / HF (15.5%).

Характеристики и биохимические измерения среди различных генотипов GC

В полиномиальной модели пол, возраст и ИМТ считались зависимыми. При анализе индивидуумов на основе полиморфизмов rs7041 и rs4588 участники были разделены на три и две группы соответственно (rs7041: GG, TG и TT; rs4588: CC и AC + AA), в то время как в модели гаплотипов индивидуумы были разделены на категории. четыре группы (TC, GA, GC и TA). Настоящее исследование показало, что rs7041 значимо связан с оценкой депрессии ( p = 0.05), вес ( p = 0,008), рост ( p = 0,001), окружность бедра ( p = 0,01), систолическое артериальное давление ( p = 0,002), диастолическое артериальное давление ( p = 0,01), ЛПНП ( p <0,001), TC ( p <0,001), TG ( p = 0,04), AST ( p <0,001), АЛТ ( p <0,001), FBS ( p <0,001) и hs-CRP ( p = 0,04). Средний балл депрессии среди участников с генотипом TG был выше, чем у людей с генотипом TT или GG.

В настоящем исследовании rs4588 был положительно связан с оценкой депрессии ( p = 0,02), весом ( p = 0,002), ростом ( p = 0,003), окружностью талии ( p = 0,02), окружность бедра ( p = 0,003), ЛПВП ( p = 0,03), ЛПНП ( p = 0,005), AST ( p <0,001) и ALT ( p = 0,006). После категоризации люди в модели гаплотипа имели значимые ассоциации с окружностью бедра ( p = 0.03) и AST ( p = 0,01). Однако в модели гаплотипа не было значимых ассоциаций относительно других измерений ( p > 0,05). Показатели депрессии участников с генотипами GA и TA в модели гаплотипов не были значительно ниже, чем у участников с аллелями GC и TC.

Взаимодействие между генотипом GC и диетой HP / LF относительно риска депрессии

Был проведен полиномиальный логистический регрессионный анализ для определения взаимодействия между диетой HP / LF и различными генотипами, связанными с двумя SNP (rs4588 и rs7041) в отношении депрессии ( Таблица 3).Не было значительной гетерогенности во взаимодействии между диетой HP / LF и полиморфизмом rs4588 и моделью гаплотипа в группах депрессии до и после корректировки на возраст, пол и ИМТ ( p > 0,05). Однако была отмечена значительная взаимосвязь между диетой HP / LF и полиморфизмом rs7041 в группах умеренной и тяжелой депрессии до и после контроля ковариант ( p = 0,05, OR = 0,73, 95% ДИ 0,54–1,00 и p = 0,01, OR = 0,61, 95% ДИ 0.41–0,92 соответственно). Для полиморфизма rs7041 взаимодействие с группой тяжелой депрессии было выше, чем с группой умеренной депрессии (группа тяжелой депрессии: β = –0,48, 95% ДИ 0,41–0,91, p = 0,01). Кроме того, на Рисунке 1 было замечено значительное взаимодействие между диетой HP / LF и полиморфизмом rs7041, при этом процент участников с депрессией с аллелем риска T был выше (50% в группе умеренной депрессии и 10% в группе тяжелой депрессии). группа).

Таблица 3.

Взаимодействие между диетой HP / LF и генотипами GC

Рис. 1.

Было отмечено значительное взаимодействие между диетой с высоким / низким содержанием жира и полиморфизмом rs7041 в группах умеренной и тяжелой депрессии. Нормальная группа считалась контрольной группой. Что касается полиморфизма rs7041, взаимодействие в группе умеренной депрессии ( a ) было слабее, чем в группе тяжелой депрессии ( b ). Частота генотипа TT среди участников с депрессией была выше, чем частота других генотипов.Количество участников в группе умеренной депрессии составляло 81 (GG, n = 16; TG, n = 25; TT, n = 40), а в группе тяжелой депрессии было 40 человек ( GG, n = 4; TG, n = 16; TT, n = 20).

Обсуждение

Это поперечное исследование продемонстрировало, что диета HP / LF может взаимодействовать с генотипом VDBP, чтобы снизить риск депрессии у внешне здоровых взрослых, не страдающих хроническими заболеваниями.Выявлено три депрессивных статуса: нормальная депрессия, депрессия средней тяжести и депрессия тяжелой степени. После классификации люди, соблюдающие диету HP / LF, продемонстрировали статистически значимые различия в показателях депрессии. Эти результаты демонстрируют, что показатели депрессии коррелировали с полиморфизмами rs7041 и rs4588, и что была сильная взаимосвязь между диетой HP / LF и тем, что они были носителями аллеля T для rs7041 в группах умеренной и тяжелой депрессии. Однако мы не обнаружили взаимодействия между диетой HP / LF и rs4588.

Депрессия может быть связана с липидным профилем и воспалительными цитокинами [28, 29]. В этом исследовании после классификации по статусу депрессии была обнаружена значимая связь между состоянием депрессии и окружностью талии, процентным содержанием жира, диастолическим артериальным давлением, ЛПНП, ТГ и FBS. В некоторых предыдущих исследованиях представлены данные, подтверждающие аналогичные результаты. В норвежском исследовании среди шизофреников ( n = 344) и не шизофренических ( n = 308) депрессия была связана с уровнями ЛПНП и ОХ, в то время как в другом исследовании было показано, что депрессия связана с повышенными уровнями нескольких воспалительных заболеваний. цитокины [29-31].В отличие от наших результатов, Shah et al. [32] сообщили об отсутствии связи HbA _1c , артериального давления и холестерина ЛПНП с депрессией у взрослых с сахарным диабетом 2 типа. Причина противоречия в результатах между нашим исследованием и этим предыдущим исследованием может происходить из-за использования разных вопросников для оценки депрессии (например, Вопросник о здоровье пациента-9 [PHQ-9] по сравнению с DASS-21).

В настоящем исследовании, разделив людей на категории на основе белково-жировой диеты, мы обнаружили, что высокое потребление белка было связано со снижением частоты депрессии.В некоторых предыдущих исследованиях представлены данные, подтверждающие эти выводы [17, 33]. Например, Nanri et al. [33] сообщили, что потребление белка было связано со снижением депрессивных симптомов. Напротив, в испанском исследовании с участием 140 пожилых участников [34] и в японском исследовании с участием 279 пожилых людей [35] потребление белка не было связано с симптомами депрессии. Противоречивые результаты в некоторых из этих предыдущих отчетов могут быть связаны с включением пожилых участников и / или отсутствием поправки на потенциально мешающие переменные, связанные с депрессивными симптомами, такие как привычки сна и физическая активность [33].Механизм, связывающий депрессивные симптомы и потребление белка, неизвестен. Исследование влияния потребления белка на поведение и настроение было сосредоточено на уровнях триптофана и серотонина [17]. Действительно, триптофан обладает антидепрессивным действием, превращаясь в серотонин [36]. Учитывая эту связь, высокое потребление белка может иметь большее положительное влияние на психическое здоровье [33].

В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что полиморфизм rs7041 был связан с депрессией и весом, ростом, окружностью бедер, систолическим и диастолическим артериальным давлением, ЛПНП, ОХ, ТГ, АСТ, АЛТ, FBS и hs-CRP, в то время как полиморфизм rs4588 коррелировал с депрессией и окружностью талии, ЛПНП, ОХ, ТГ, АСТ и АЛТ.Эти результаты отличаются от результатов предыдущих исследований. Например, некоторые предыдущие исследования не наблюдали взаимосвязи между различными биохимическими показателями и rs7041 или rs4588 [37, 38]. Это противоречие в выводах может быть связано с дисбалансом между двумя популяциями, а также с низкой распространенностью SNP. Однако Ли и др. [2] сообщили о значительной связи между уровнями экспрессии генов GC, симптомами депрессии и липидными профилями сыворотки. Распределение нейронов, на которые воздействует кальцитриол, предполагает влияние уровней синтеза ацетилхолинацетилазы, тестостерона и серотонина [39, 40], которые все связаны с патогенезом депрессии.В частности, снижение количества нейромедиаторов связано с повышенным риском депрессии.

Настоящее исследование также предполагает, что существует взаимодействие между диетой HP / LF и rs7041 в группах с умеренной и тяжелой депрессией, а также демонстрируется сильное взаимодействие между аллелем T в rs7041 и диетой HP / LF. Аллель T в rs7041 был описан как аллель риска [41]. Похоже, что уровень депрессии среди участников, несущих аллель Т, был выше. Напротив, мы не обнаружили связи между диетой HP / LF и полиморфизмом rs4588.Эти результаты имеют большое значение, учитывая высокую распространенность низкобелковых диет и изменений генотипа VDBP среди внешне здоровых взрослых с депрессией. Это может привести к практическим стратегиям, помогающим контролировать или предотвращать депрессию. Интерпретация исследователями ассоциаций, описанных в настоящем исследовании, потребует интервенционных исследований, чтобы предоставить причинные доказательства.

Основным ограничением настоящего исследования является его основание на размере выборки, что привело к недостаточному количеству участников в некоторых подгруппах для категоризации генотипа.Сила настоящего исследования заключается в том, что, насколько нам известно, оно является первым, в котором оценивается взаимодействие между вариантами гена GC и белковой / жировой диетой у практически здоровых субъектов с депрессией.

Выводы

Настоящее исследование предполагает, что диета HP / LF может взаимодействовать с генотипом rs7041 при умеренной и тяжелой депрессии. Кроме того, еще одним важным открытием этого исследования является то, что у носителей аллеля T в rs7041 был выявлен эффект взаимодействия с диетой HP / LF.

Благодарности

Исследование было поддержано грантами Тегеранского университета медицинских наук (идентификаторы грантов: 93-04-159-28031, 96-01-159-34988 и 93-04-161-27722). Авторы благодарят менеджеров Школы диетологии и диетологии и Исследовательского центра эндокринологии и метаболизма Тегеранского университета медицинских наук за разрешение на текущий проект.

Заявление об этике

Все люди дали свое информированное письменное согласие на участие в исследовании.Исследование было одобрено этическим комитетом Исследовательского центра эндокринологии и метаболизма Тегеранского университета медицинских наук (этический номер 93-04-159-28031-144521).

Заявление о раскрытии информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов

Концепция и дизайн исследования: K.M. и С.П .; сбор данных: K.M., S.P., M.H.R., M.M., L.K.-N. и Z.M .; анализ и интерпретация данных: К. и Z.M .; составление рукописи: С.П., Ю.Н., М.Н.Р., М.М. и Л.К.-Н.

Список литературы

1. Shafiee M, Tayefi M, Hassanian SM, Ghaneifar Z, Parizadeh MR, Avan A, et al. Симптомы депрессии и тревоги связаны с количеством лейкоцитов и шириной распределения эритроцитов: стратифицированный по полу анализ в популяционном исследовании.Психонейроэндокринология. 2017 Октябрь; 84: 101–8.
2. Ли М.Ю., Ким ЭЙ, Ким Ш., Чо КК, Ха К, Ким КП и др. Открытие биомаркеров сывороточного белка у пациентов с большим депрессивным расстройством, не принимающих лекарственные препараты. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2016 август; 69: 60–8.
3. Банерджи А., Кхемка В.К., Рой Д., Дхар А., Синха Рой Т.К., Бисвас А. и др.Роль провоспалительных цитокинов и витамина D в вероятной болезни Альцгеймера с депрессией. Aging Dis. 2017 Май; 8 (3): 267–76.
4. Milaneschi Y, Hoogendijk W, Lips P, Heijboer AC, Schoevers R, van Hemert AM и др. Связь между низким содержанием витамина D и депрессивными расстройствами.Мол Психиатрия. 2014 Апрель; 19 (4): 444–51.
5. Гарсион Э., Вион-Барбот Н., Монтеро-Меней К.Н., Бергер Ф., Вион Д. Новые сведения о функциях витамина D в нервной системе. Trends Endocrinol Metab. 2002 Апрель; 13 (3): 100–5.
6. Джан М.С., Байкан Х, Байкан О, Эренсой Н., Карлыдере Т.Уровни витамина D и полиморфизм генов рецепторов витамина D при большой депрессии. Психиатр Дунай. 2017 июн; 29 (2): 179–85.
7. Пухач Э., Штумпф В.Е., Стаховяк Э.К., Стаховяк МК. Витамин D увеличивает экспрессию гена тирозингидроксилазы в мозговых клетках надпочечников. Brain Res Mol Brain Res.1996 Февраль; 36 (1): 193–6.
8. Петров Б., Алдури А., Джеймс К., Ян К., Альгорта Г. П., Ли А. и др. Биполярное расстройство в молодости связано с повышенным уровнем белка, связывающего витамин D. Перевод Психиатрия. 13 марта 2018 г .; 8 (1): 61.
9. Пак Й., Ким Ю.С., Кан Я.А., Шин Дж. Х., О Ю. М., Со Дж. Б. и др.Взаимосвязь между полиморфизмом витамин D-связывающего белка и уровнем витамина D в крови у корейских пациентов с ХОБЛ. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2016 апр; 11: 731–8.
10. Agliardi C, Guerini FR, Zanzottera M, Bolognesi E, Costa AS, Clerici M. Полиморфизм генов связывающего витамин D белка не связан с риском рассеянного склероза в итальянской когорте.J Neuroimmunol. 2017 Апрель; 305: 92–5.
11. Лу Л., Шэн Х, Ли Х, Ган В., Лю Ц., Чжу Дж. И др. Связь между общими вариантами GC и DHCR7 / NADSYN1 и концентрацией витамина D у китайских ханьцев. Hum Genet. 2012 Март; 131 (3): 505–12.
12. Engelman CD, Fingerlin TE, Langefeld CD, Hicks PJ, Rich SS, Wagenknecht LE и др.Генетические и экологические детерминанты уровней 25-гидроксивитамина D и 1,25-дигидроксивитамина D у латиноамериканцев и афроамериканцев. J Clin Endocrinol Metab. 2008 сентябрь; 93 (9): 3381–8.
13. Робиен К., Батлер Л.М., Ван Р., Бекман К.Б., Валек Д., Ко В.П. и др. Генетические и экологические предикторы концентрации 25-гидроксивитамина D в сыворотке крови у китайцев среднего и пожилого возраста в Сингапуре.Br J Nutr. 2013 февраль; 109 (3): 493–502.
14. Santos BR, Mascarenhas LP, Boguszewski MC, Spritzer PM. Вариации гена витамин D-связывающего белка (DBP) связаны с более низким уровнем 25-гидроксивитамина D у здоровых девочек: перекрестное исследование. Horm Res Paediatr. 2013. 79 (3): 162–8.
15. Альвердт Дж., Малый Б.Дж. Недержание кала как посредник между приемом пищи и депрессивными симптомами среди выборки пожилых людей, полученной в результате Национального исследования здоровья и питания (NHANES). Старение психического здоровья. 2017. [Epub перед печатью]
16. Чанг М.В., Браун Р., Ницке С., Смит Б., Эгтедари К.Стресс, сон, депрессия и рацион среди беременных женщин с низким уровнем дохода и ожирением. Matern Child Health J. 2015 May; 19 (5): 1047–59.
17. Wolfe AR, Arroyo C, Tedders SH, Li Y, Dai Q, Zhang J. Диетический белок и богатая белком пища в связи с тяжелым депрессивным настроением: 10-летнее наблюдение национальной когорты.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2011 Янв; 35 (1): 232–8.
18. Laing CJ, Fraser DR. Изменения при недостаточности питания в концентрации связывающего витамин D белка в плазме у растущих крыс. Br J Nutr. 2002 август; 88 (2): 133–9.
19. Моллахоссейни М., Данешзад Э., Рахими М.Х., Еканинеджад М.С., Магбули З., Мирзаи К.Ассоциация между потреблением фруктов и овощей и ферментами печени (аспартат и аланин трансаминазы) в Тегеране, Иран. Эфиоп J Health Sci. Июль 2017; 27 (4): 401–10.
20. Мирзабабаей А., Мирзаи К., Хоррами-Нежад Л., Магбули З., Кешаварз С.А. Метаболически здоровые / нездоровые компоненты могут изменять минеральную плотность костей у людей с ожирением.Арка Остеопорос. 2017 Октябрь; 12 (1): 95.
21. Многоцентровая референс-группа ВОЗ по вопросам роста. Надежность антропометрических измерений в многоцентровом эталонном исследовании ВОЗ. Acta Paediatr Suppl. 2006 апр; 450: 38–46.
22. Моради С., Мирзаи К., Абдурахман А.А., Кешаварз С.А., Хоссейн-Нежад А.Посреднический эффект циркулирующего васпина на скорость метаболизма в покое у лиц с ожирением. Eur J Nutr. 2016 Апрель; 55 (3): 1297–305.
23. Асгари Г., Резазаде А., Хоссейни-Исфахани Ф., Мехраби Й., Мирмиран П., Азизи Ф. Надежность, сравнительная достоверность и стабильность режимов питания, полученных на основе FFQ в Тегеранском исследовании липидов и глюкозы.Br J Nutr. 2012 сентябрь; 108 (6): 1109–17.
24. Русли Б.Н., Амрина К., Тривед С., Ло К.П., Шаши М. Построить валидность и надежность внутренней согласованности малайской версии шкалы стресса, тревожности и депрессии из 21 пункта (малайский-DASS-21) среди посетителей мужских поликлиник в Джохоре.Med J Malaysia. 2017 Октябрь; 72 (5): 264–70.
25. Тонизирующий кн. Психометрические свойства и валидация непальской версии шкал депрессии, тревожности и стресса (DASS-21). Азиатский J Psychiatr. 2014 Апрель; 8: 63–6.
26. Борхес ЧР, Редер Д.С., Джарвис Дж. У., Шааб М. Р., Оран П. Э., Нельсон Р. В..Полная характеристика белков в человеческих популяциях. Clin Chem. 2010 Февраль; 56 (2): 202–11.
27. Педуцци П., Конкато Дж., Кемпер Э., Холфорд Т.Р., Файнштейн А.Р. Имитационное исследование количества событий на переменную в логистическом регрессионном анализе. J Clin Epidemiol. 1996 декабрь; 49 (12): 1373–9.
28. Гохар С.М., Дизет I, Стин Н.Е., Мёрч Р.Х., Иверсен Т.С., Стин В.М. и др. Связь между уровнями липидов в сыворотке крови, остеопротегерином и депрессивной симптоматикой при психотических расстройствах. Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 2018 май. https://doi.org/10.1007/s00406-018-0897-z.
29. Аптегроув Р., Мансанарес-Тесон Н., Барнс, Нью-Мексико.Функция цитокинов в первом эпизоде ​​психоза, не принимавшем лекарств: систематический обзор и метаанализ. Schizophr Res. 2014 Май; 155 (1-3): 101–8.
30. Гохар С.М., Дизет I, Стин Н.Е., Мёрч Р.Х., Иверсен Т.С., Стин В.М. и др. Связь между уровнями липидов в сыворотке крови, остеопротегерином и депрессивной симптоматикой при психотических расстройствах.Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 2018. [Epub перед печатью]
31. Köhler CA, Freitas TH, Maes M, de Andrade NQ, Liu CS, Fernandes BS и др. Изменения периферических цитокинов и хемокинов при депрессии: метаанализ 82 исследований. Acta Psychiatr Scand. 2017 Май; 135 (5): 373-387.
32. Шах Б.М., Меццио Диджей, Хо Дж., Ип ЭДЖ; Ассоциация ABC. Связь достижения цели ABC (HbA1c, артериальное давление, холестерин ЛПНП) с депрессией и качеством жизни, связанным со здоровьем, среди взрослых с диабетом 2 типа. J Осложнения диабета. 2015 августа; 29 (6): 794–800.
33. Нанри А., Эгути М., Кувахара К., Кочи Т., Куротани К., Ито Р. и др.Потребление макроэлементов и симптомы депрессии среди японских рабочих-мужчин: исследование питания и здоровья Фурукавы. Psychiatry Res. 2014 декабрь; 220 (1-2): 263–8.
34. Апарисио А, Роблес Ф, Лопес-Собалер А.М., Ортега Р.М. Пищевая гликемическая нагрузка и вероятность депрессии в группе пожилых людей, находящихся в лечебных учреждениях, без лечения антидепрессантами.Eur J Nutr. 2013 Апрель; 52 (3): 1059–66.
35. Оиси Дж., Дои Х., Каваками Н. Питание и симптомы депрессии у пожилых людей, проживающих в общинах в Японии. Acta Med Okayama. 2009 фев; 63 (1): 9–17.
36. Вонг П.Т., Онг Ю.П.Острые антидепрессантные и снотворные эффекты триптофана у мышей. Фармакология. 2001. 62 (3): 151–6.
37. Даффара В., Вердоя М., Ролла Р., Нардин М., Марино П., Белломо Дж. И др .; Группа исследования атеросклероза Новары (NAS). Влияние полиморфизма rs7041 и rs4588 белка, связывающего витамин D, на степень ишемической болезни сердца.Нутр Метаб Кардиоваск Дис. 2017 Сен; 27 (9): 775–83.
38. Grave N, Tovo-Rodrigues L, da Silveira J, Rovaris DL, Dal Bosco SM, Contini V и др. Взаимодействие ген-ген пути витамина D влияет на уровень холестерина липопротеинов низкой плотности. J Nutr Biochem. 2016 декабрь; 38: 12–7.
39. Штумпф МЫ.Сайты и механизмы действия витамина D: гистохимическая перспектива. Размышления о полезности авторадиографии и цитофармакологии для нацеливания лекарств. Histochem Cell Biol. 1995 декабрь; 104 (6): 417–27.
40. Штумпф В.Е., О’Брайен Л.П. 1,25 (OH) 2, сайты действия витамина D3 в головном мозге.Авторадиографическое исследование. Гистохимия. 1987. 87 (5): 393–406.
41. Пеккинен М., Саарнио Э., Вильякайнен Х.Т., Кокконен Э., Якобсен Дж., Кашман К. и др. Генотип связывающего витамин D белка связан с концентрацией 25-гидроксивитамина D и ПТГ в сыворотке крови, а также со здоровьем костей у детей и подростков в Финляндии.PLoS One. 2014 Янв; 9 (1): e87292.

Автор Контакты

Хадидже Мирзаи, доктор наук

Департамент общественного питания, Школа диетологии и диетологии

Тегеранский университет медицинских наук (TUMS), P.O. Box 14155-6117

Тегеран (Иран)

Электронная почта mirzaei_kh @ tums.ac.ir

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Поступила: 3 мая 2018 г.
Дата принятия: 26 июля 2018 г.
Опубликована онлайн: 5 сентября 2018 г.
Дата выпуска: октябрь 2018 г.

Количество страниц для печати: 9
Количество рисунков: 1
Количество столов: 3

ISSN: 2504-3161 (печатный)
eISSN: 2504-3188 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/LFG

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или какой-либо системой хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Определений статуса транспортных средств в Британской Колумбии

Вы пытаетесь определить статус вашего автомобиля в Британской Колумбии.Присвоил ли ICBC статус вашему автомобилю на основании недавней аварии или претензии? Здесь мы обсуждаем сами типы статусов транспортных средств и их значение для вашего автомобиля, грузовика, внедорожника или фургона.

В Британской Колумбии и по всей Канаде каждому транспортному средству дается статус, описывающий общее состояние транспортного средства и его соответствие требованиям для получения лицензии.

Почему автомобилям присвоен «статус»?

Транспортным средствам присваивается статус, позволяющий отслеживать их, в основном для целей страхования и перепродажи.Транспортному средству можно присвоить пять типов статуса.

Обратите внимание: сам по себе статус автомобиля не может полностью описать его механическое состояние или историю повреждений.

Пять типов статуса автомобиля в Британской Колумбии:

Статус изменен: Этот статус присваивается транспортному средству, которое было значительно модифицировано после его изготовления. Автомобиль должен пройти техосмотр ICBC, чтобы получить этот статус. Примером такой модификации может быть автомобиль с измененной высотой подвески более чем на 10 см.Измененный статус также используется для описания самодельных автомобилей, чтобы указать, что они были проверены и конструктивно исправны.

Нормальный статус: Если автомобиль не имеет статуса восстановленного, утилизированного, неремонтируемого или измененного, он считается нормальным статусом. «Нормальный» — это просто термин, используемый для целей регистрации транспортного средства. Нормальное состояние не означает, что автомобиль никогда не был поврежден или находится в хорошем механическом состоянии. Новая машина в нормальном состоянии.

Состояние восстановления: Состояние восстановления — это повышение по сравнению со статусом восстановления. После того, как аварийный автомобиль отремонтирован и прошел техосмотр, ему присваивается статус восстановленного.

Статус аварийного: Этот статус присваивается транспортному средству, которое было списано в результате случайной гибели, но может быть отремонтировано или реконструировано. Транспортное средство необходимо отремонтировать и осмотреть, прежде чем его можно будет получить лицензию или перестраховать.

Не подлежит ремонту: Этот статус присваивается транспортному средству, которое было списано или иным образом полностью выведено из эксплуатации, не подлежит ремонту из-за структурных нарушений или нарушений безопасности, а также не может быть повторно лицензировано или застраховано.Неремонтопригодный автомобиль можно использовать только на запчасти или металлолом.

Каковы основные генотипы серпа?